一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品、应用及使用方法技术

本发明专利技术公开一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品、应用及使用方法，属于生物蛋白技术领域。通过非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白（EEC）联合使用，可快速、准确的鉴别结核病和NTM病，当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的迟发性超敏反应均呈全阳性时，为结核病；当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物的迟发性超敏反应为呈阳性，重组结核杆菌融合蛋白的迟发性超敏反应为呈阴性时，为NTM病。而提出一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品及其应用，进而快速、准确的鉴别结核病和NTM病，为患者的早期诊断和治疗等方面提供可靠的依据。期诊断和治疗等方面提供可靠的依据。

【技术实现步骤摘要】
一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品、应用及使用方法


[0001]本专利技术涉及一种蛋白产品及其应用，尤其涉及一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品、应用及使用方法，属于生物蛋白


技术介绍

[0002]结核病是一种严重危害人类和动物健康的慢性传染病，于2019年，全球结核病死亡人数140万。据WTO发布的2020全球结核病年度报告：2019年全球结核病发病人数估计1000万左右(890
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1100万)；其中，印度264万，占26％；印尼84.6万，占8.5％；中国83.3万，占8.4％。中国结核病人数世界排名第三，为结核病高负担国家。
[0003]对于非结核分枝杆菌病(NTM病)，我国的流行病学数据表明，NTM病感染呈上升趋势；我国历次的结核病流行病学调查资料表明，在所有分枝杆菌病人分离株中，1990年NTM分离率为4.9％，2000年NTM分离率为11.1％，到2010年增加到22.9％。NTM感染是我国面临的重大公共卫生问题，NTM在中国的菌种分布有很大的地域差异性，总体分布特点是，沿海高于内地，南方高于北方，气候温和地区高于寒冷地区。
[0004]非结核分枝杆菌病(NTM病)与结核病的临床症状很接近，很容易被当作结核病来治疗，但两者的治疗方案是完全不同的，且NTM病抗药性非常强。
[0005]其中，NTM病的治疗方案包括：对于治疗结核病的异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)和吡嗪酰胺，NTM病耐药性很高。通常使用喹诺酮类，如：环丙沙星(Ciprofloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)或氟罗沙星(Fleroxacin)；大环内酯类，如：阿奇霉素(Agithromycin AZ)或克拉霉素(clarithromycin，Cear)；头孢菌素类，如：头孢酊(Cefoxintin，Cet)或头孢克肟(Cefixime)；氨基糖苷类，如：阿米卡星(丁氨卡那霉素AuiKacia，AM)、卷曲霉素(Capreomycin，Cap)、庆大霉素(Gentamicin，Gm)、利福布汀(Rifabutin，Rb)、环丝氨酸(Cycloserin，Cy)或乙硫异烟胺(Ethionamide，Ethion)。此外，如：亚胺培南(Imipenen)，四环素(Tetracyclines，Tz)、多西环素(Doxycycline，Dox)、对氨水杨酸钠(PAS)和磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole)亦有一定疗效。
[0006]结核病的治疗方案包括：常见的一线抗结核药物主要包括异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)和吡嗪酰胺，常用的抗结核的一线治疗方案为6个月的治疗方案，前2个月是异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺的四种药物联合；后4个月是两种药物联合，主要是指异烟肼和利福平联合。
[0007]目前，NTM病的诊断方法有：高效液相色谱法(HPLC)，分子生物学方法(包括吖啶酯标记的DNA探针测定法、PCR或多重PCR法、PCR
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限制性片段长度多态性分析法、DNA测序技术、反向杂交DNA扩增技术)等。
[0008]基于NTM病和结核病临床症状接近，但两者治疗方案截然不同，而对于常规的NTM病诊断方法，一般耗时较久(30天以上)，可能严重影响患者的治疗，因此，急需一种能简单、快捷的检测试剂。
[0009]现有技术CN111905110A中公开了“一种鉴别结核杆菌感染与非结核分枝杆菌感染的方法、系统及应用”，其中，具体公开：提出一种重组结核杆菌Esat
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6蛋白和CFP
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10蛋白组成的变态反应原和NTM菌体蛋白同体双臂皮肤试验，向待测生物注射重组结核杆菌Esat
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6蛋白和CFP
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10蛋白组成的变态反应原以及NTM菌体蛋白进行皮试反应；根据皮试反应的结果判断所述待测生物的结核杆菌和NTM感染情况。该专利技术提供的检测结核杆菌感染和非结核分枝杆菌感染的系统既可以联合使用应用于鉴别诊断，也可分别单独用于结核杆菌感染或NTM感染检测。CN102229999A中公开了“鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒及其使用方法”，其中，利用双通道荧光定量的优点，能够一次性区分鉴别结核和非结核分枝杆菌的荧光定量核酸检测技术；提供一种鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，包括对待测菌株进行PCR扩增的引物和荧光定量检测的探针。其中，通过不同分枝杆菌的基因序列的差异来设计荧光探针，区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，从细菌的基因序列和分子结构水平来区分和鉴定，分类更准确，更可靠。解决了传统鉴定方法中通过细菌的生长形态来区分需耗时长达4
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6周的问题。CN101413031A中公开了“鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的方法及其专用试剂盒”，试剂盒包括引物和探针，引物包括4条引物，它们的核苷酸序列分别是序列表中序列1、序列2、序列4和序列5；探针包括2条，它们的核苷酸序列分别是序列表中序列3和序列6；探针的5
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端带有荧光物质，3
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端带有淬灭物质；2条探针的5
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端的荧光物质不同。

技术实现思路

[0010]专利技术人在长期的研究中发现，通过将非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白(EEC)联合使用，可快速(24h内)鉴别结核病和NTM病，当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的迟发性超敏反应均呈阳性时(致病菌
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堪萨斯分支杆菌除外)，为结核病；当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物的迟发性超敏反应为呈阳性，重组结核杆菌融合蛋白(EEC)的迟发性超敏反应为呈阴性时，为NTM病；
[0011]但同时发现，非结核分支杆菌纯蛋白衍生物对非结核分支杆菌Ⅲ群(慢生长、不产色)致病菌引起的NTM病灵敏度较高，而对非结核分支杆菌Ⅰ群、非结核分支杆菌Ⅱ群和非结核分支杆菌Ⅳ群病菌引起的NTM病灵敏度较低，易出现误判的可能，进而将非结核分枝杆菌Ⅰ群(慢生长、光产色)堪萨斯分支杆菌(ATCC12478)、Ⅱ群(慢生长、暗产色)戈登分支杆菌(ATCC14770)、Ⅲ群(慢生长、不产色)胞内分支杆菌(ATCC13950)和Ⅳ群(快生长)脓肿分支杆菌(ATCC19977)为菌种，分别生产四个群对应的蛋白，再将四类蛋白以1：1：1：1混合为混合蛋白，即非结核分支杆菌纯蛋白衍生物，进而保证了鉴别的灵敏度；
[0012]基于此，提出一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品、应用及使用方法，进而快速、精准的鉴别结核病和NTM病，为患者的早期诊断和治疗等方面提供可靠的依据。
[0013]为了实现上述技术目的，提出如下的技术方案：
[0014]首先，本技术方案提供：一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品，所述产品包括非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白，其中，非结核分支杆菌纯蛋白衍本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.将非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白联合，在制备结核病和非结核分枝杆菌病鉴别的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白联合在制备结核病和非结核分枝杆菌病鉴别的产品中的应用，其特征在于，所述鉴别的标准为，当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的迟发性超敏反应均呈阳性时，为结核病；当非结核分支杆菌纯蛋白衍生物的迟发性超敏反应为呈阳性，重组结核杆菌融合蛋白的迟发性超敏反应为呈阴性时，为非结核分枝杆菌病。3.一种基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品，其特征在于，所述产品包括非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白，其中，非结核分支杆菌纯蛋白衍生物为：以堪萨斯分支杆菌、戈登分支杆菌、胞内分支杆菌及脓肿分支杆菌分别为菌种，生产的对应蛋白再以1：1：1：1混合后的混合蛋白。4.根据权利要求3所述的基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品，其特征在于，所述非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的使用浓度均为5μg/mL。5.根据权利要求3所述的基于非结核分支杆菌纯蛋白衍生物和重组结核杆菌融合蛋白的产品，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙超伟，
申请(专利权)人：成都可恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：