一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立及含量测定方法技术

本发明专利技术具体公开了一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立及含量测定方法，其中指纹图谱的建立包括供试品溶液的制备和指纹图谱的建立，采用Waters Symmetry C

【技术实现步骤摘要】
一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立及含量测定方法


[0001]本专利技术涉及药品检测
，尤其涉及一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立及含量测定方法。

技术介绍

[0002]疟疾是当今世界上最常见的寄生虫病之一，据世界卫生组织(World Health Organization, WHO)报告，在2019年全球大约有2.29亿例疟疾报告，目前以青蒿素为基础的联合疗法(artemisinin combination therapy,ACT)是WHO在疟疾流行国家推荐的一线治疗方法， 2010
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2019年间，制造商在全球售出超过31亿个疗程的青蒿素联合疗法。一个疗程的ACT 花费在1.0至3.5美元之间，而生活在经济困难国家的人们仍然无法负担多个疗程的治疗费用，因此，降低青蒿素类抗疟药物的生产成本至关重要。
[0003]研究发现在黄花蒿体内青蒿酸的含量是其青蒿素含量的8
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10倍，二氢青蒿酸的含量是青蒿素含量的2倍，在青蒿素的工业生产过程中，青蒿酸和二氢青蒿酸也被提取出来，而青蒿酸和二氢青蒿酸是已知的生物合成青蒿素的重要前体，是半合成青蒿素的潜在原料。目前工业上提取青蒿素主要采用溶剂提取重结晶法，青蒿素生产流程如附图16，以汽油作为溶剂，提取工艺为汽油提取
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硅胶过柱除杂
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浓缩结晶
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粗品重结晶，最终得到青蒿素，柱层析后的洗脱液以及重结晶后的母液在大生产中通常作为废料处理，而青蒿酸和二氢青蒿酸等被留在废料中，没有加以有效利用，废料既造成了资源浪费也可能会导致环境污染，为了合理利用 ABP(青蒿素副产物)，有必要为其建立质量控制标准。
[0004]指纹图谱分析可以识别单味中药和中成药中的多种化合物，是评估中药整体质量的一种重要方法，不仅可以确定是否存在所需的标记物或活性物质，而且可以确定所有可检测的分析物的完整比率。因此，建立中药的指纹图谱代表了一种全面的定性方法，用于物种认证、质量评估，并确保中药及其相关产品的一致性和稳定性。目前已知相关研究报道ABP中含有的青蒿酸是合成青蒿素的重要前体，但尚未有关于ABP指纹图谱和含量测定的文献报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立及含量测定方法，本专利技术建立了青蒿素副产物的高效液相指纹图谱方法，各共有峰分离度均较好，并以青蒿酸为对照，分别对AE和ARF样品进行含量测定，建立青蒿素副产物的质量评价方法，为青蒿素副产物的合理开发利用提供了基础。
[0006]本专利技术提供的一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
[0007](1)供试品溶液的制备
[0008]分别精密称取0.1g AE和0.1g ARF，分别置于50mL具塞锥形瓶中，加甲醇25mL，称定重量，超声处理，取出放冷，用甲醇补足失重，过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得AE供试品溶液和ARF供试品溶液；
[0009](2)指纹图谱的建立
[0010]将所述AE供试品溶液和所述ARF供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到AE指纹图谱和ARF指纹图谱；
[0011]其中所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：
[0012]采用Waters Symmetry C
18
色谱柱，250
×
4.6mm，5μm；流动相A为乙腈，流动相B为 0.2％磷酸；流速为1mL/min，检测波长为210nm；柱温为30℃；进样量为10μL；
[0013]AE高效液相色谱的流动相梯度洗脱程序如下表：
[0014][0015]ARF高效液相色谱的流动相梯度洗脱程序如下表：
[0016][0017](3)生成对照指纹图谱
[0018]将所述AE指纹图谱和所述ARF指纹图谱的cdf文件分别导入国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行分析，设置S1为参照图谱，时间窗宽度设置为0.2，对照图谱生成方法设置为平均数，采用多点校正后进行全谱峰匹配和相似度计算，并生成AE对照指纹图谱和ARF对照指纹图谱。
[0019]进一步地，所得到的所述AE对照指纹图谱共有34个峰，其中18号为二氢青蒿酸峰， 20号为青蒿酸峰；所得到的所述ARF对照指纹图谱共有27个峰，其中15号为青蒿素峰， 24号为二氢青蒿酸峰，25号为青蒿酸峰。
[0020]进一步地，所述超声处理时间为15～60min，频率为40kHz，功率为300W。
[0021]本专利技术还提供了一种青蒿素副产物的含量测定方法，包括以下步骤：
[0022](1)供试品溶液的制备
[0023]分别精密称取0.1g AE和0.1g ARF，分别置于50mL具塞锥形瓶中，加入无水乙醇25 mL，称定重量，超声处理，取出放冷，用无水乙醇补足失重，过0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液即得AE供试品溶液和ARF供试品溶液；
[0024](2)对照品溶液的制备
[0025]分别精密称取10.12mg二氢青蒿酸和10.13mg青蒿酸对照品，置于50mL容量瓶中，并加入甲醇定容至刻度线，摇匀，得到浓度为202.4μg/mL的二氢青蒿酸和202.6μg/mL的青蒿酸对照品储备溶液；
[0026](3)标准曲线的制备
[0027]分别移取步骤(2)中的对照品储备溶液0.5、1、2、4、6、8mL置于10mL容量瓶中，并加甲醇定容至刻度线，摇匀，得到稀释后各梯度浓度的二氢青蒿酸和青蒿酸对照品溶液；将稀释后的各梯度浓度对照品和对照品储备溶液注入高效液相色谱仪进行检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，并绘制标准曲线，得到线性方程；
[0028](4)含量测定
[0029]将供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测，记录二氢青蒿酸和青蒿酸的峰面积，并将峰面积带入线性方程，计算二氢青蒿酸和青蒿酸的百分含量；
[0030]其中步骤(3)和步骤(4)中的高效液相色谱仪的色谱条件如下：
[0031]采用Waters Symmetry C
18
色谱柱，250
×
4.6mm，5μm；流动相A为乙腈，流动相B为 0.2％磷酸；洗脱程序如下表：
[0032][0033]流速为1mL/min，检测波长为210nm；柱温为30℃；进样量为10μL。
[0034]进一步地，所述超声处理时间为15～60min，频率为40kHz，功率为300W。
[0035]本专利技术的优点如下：
[0036]1.经过对流动相和梯度洗脱条件等条件优化，使得各共有峰分离度均较好，可以全面反应AE和ARF的整体质量。
[0037]2.建立了2种青蒿素副产物的指纹图谱并测定了二氢青蒿酸和青蒿酸含量，给未来对青蒿素副产物的定性、定量研究提供了依据，有助于提升对青蒿素副产物的资源利用。
[0038]3.本专利技术中发现2种青蒿素副产物中的二氢青蒿酸和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备分别精密称取0.1g AE和0.1g ARF，分别置于50mL具塞锥形瓶中，加甲醇25mL，称定重量，超声处理，取出放冷，用甲醇补足失重，过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得AE供试品溶液和ARF供试品溶液；(2)指纹图谱的建立将所述AE供试品溶液和所述ARF供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到AE指纹图谱和ARF指纹图谱；其中所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：采用Waters Symmetry C
18
色谱柱，250
×
4.6mm，5μm；流动相A为乙腈，流动相B为0.2％磷酸；流速为1mL/min，检测波长为210nm；柱温为30℃；进样量为10μL；AE高效液相色谱的流动相梯度洗脱程序如下表：ARF高效液相色谱的流动相梯度洗脱程序如下表：(3)生成对照指纹图谱将所述AE指纹图谱和所述ARF指纹图谱的cdf文件分别导入国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行分析，设置S1为参照图谱，时间窗宽度设置为0.2，对照图谱生成方法设置为平均数，采用多点校正后进行全谱峰匹配和相似度计算，并生成AE对照指纹图谱和ARF对照指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在于：所得到的所述AE对照指纹图谱共有34个峰，其中18号为二氢青蒿酸峰，20号为青蒿酸峰；所得到的所述ARF对照指纹图谱共有27个峰，其中15号为青蒿素峰，24号为二氢青蒿酸峰，25号为青蒿酸峰。3.根据权利要求1所述的一种青蒿素副产物高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在
于：所述超声处理时间为15～60min，频率为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王计瑞，阳勇，张小梅，罗庆林，郭延垒，聂国祥，王云红，尚芳红，龚胡荣，高思佳，花雷，魏江平，秦伟瀚，
申请(专利权)人：重庆市中药研究院，
类型：发明
国别省市：