靶向TGFβ抑制制造技术

本发明专利技术一般涉及双功能分子，其包括(a)TGFβRII或其能够结合TGFβ的片段，和(b)结合至免疫检查点蛋白质(例如程序性死亡配体1(PD

【技术实现步骤摘要】
靶向TGF
β
抑制
专利

[0001]本专利技术一般涉及双功能分子，其包括(a)TGFβRII或其能够结合TGFβ的片段，和(b)结合至免疫检查点蛋白质(例如程序性死亡配体1(PD
‑
L1))的抗体或其抗原结合片段，所述分子的应用(例如，用于治疗癌症)，以及制备所述分子的方法。
[0002]背景
[0003]在癌症治疗中，长期公认化疗与高毒性相关联，并且可导致抗性癌细胞变体的出现。甚至采用对肿瘤存活和生长具有重要性的过表达或活化的癌蛋白的靶向治疗，癌细胞也总是突变，并且适应于减少对靶向通路的依赖，例如，通过采用冗长的通路。癌症免疫治疗是癌症治疗中的新范例，其着重于激活免疫系统，而非靶向癌细胞。其原理是重整宿主的免疫应答，尤其是适应性T细胞应答，以提供免疫监督，以杀伤癌细胞，具体地是已经逃避其它形式的治疗的最小残余疾病，由此实现长期保护性免疫。
[0004]2011年，FDA批准的用于治疗黑素瘤的抗CTLA
‑
4抗体伊匹单抗(ipilimumab)引领了癌症免疫治疗的新纪元。关于抗PD
‑
1或抗PD
‑
L1疗法在临床试验中诱导黑素瘤、肾癌和肺癌中的持久的应答的证据进一步预示着它的时代即将到来(Pardoll,D.M.,Nat Immunol.2012；13:1129
‑
32)。然而，伊匹单抗疗法受限于其毒性性质，猜想是因为通过干扰原代T细胞抑制性检查点的抗CTLA
‑
4治疗会导致产生新的自体反应性T细胞。尽管抑制PD
‑
L1/PD
‑
1相互作用会导致对于力竭的T细胞(其大多数本身是抗病毒或抗癌的)中现存的长期免疫应答的去抑制(Wherry，E.J.，Nat Immunol.2011；12:492
‑
9)，然而抗PD
‑
1治疗有时会导致可能致命的肺相关的自身免疫负面事件。先不论迄今为止抗PD1和抗PD
‑
L1的具有前景的临床活性，由持续提高的治疗活性或持续减少的毒性或两者所代表的越来越多的治疗指标仍是免疫治疗剂开发中的核心目标。

技术实现思路

[0005]本专利技术基于如下发现：包含能够结合TGFβ的TGFβ受体II(TGFβRII)的至少部分和结合至免疫检查点蛋白质(例如人蛋白质程序性死亡配体1(PD
‑
L1))的抗体或抗原结合片段的双功能蛋白质可以是有效的抗肿瘤和抗癌治疗剂。相较于单独给予这两种试剂的作用，该蛋白质可在癌症治疗中显示协同作用。
[0006]因此，在第一方面中，本专利技术的特点是这样的蛋白质：其包含(a)人TGFβRII，或其能够结合TGFβ的片段(例如，可溶片段)；和(b)结合PD
‑
L1的抗体或其抗原结合片段(例如，本文所述的任何抗体或抗体片段)。
[0007]在一相关的方面中，本专利技术的特点是这样的多肽：其包含(a)结合PD
‑
L1的抗体的至少一个重链可变结构域(例如，SEQ ID NO:2的氨基酸1
‑
120)；和(b)人TGFβRII或其能够结合TGFβ的可溶片段(例如，人TGFβRII胞外结构域(ECD)，SEQ ID NO:9的氨基酸24
‑
159，或任何本文所述的那些)。所述多肽还可包含，将所述可变结构域的C末端与所述人TGFβRII或其能够结合TGFβ的可溶片段的N末端相连接的氨基酸接头。所述多肽可包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3基本相同的氨基酸序列。所述抗体片段可以是scFv、Fab、F
(ab
’
)2，或Fv片段。
[0008]在某些实施方式中，所述蛋白质或多肽包含含有SEQ ID NO:2的抗体或其抗原结合片段和人TGFβRII。所述抗体可任选地包含经修饰的恒定区(例如，任何本文所述的，包含C末端Lys
→
Ala取代，Leu
‑
Ser
‑
Leu
‑
Ser(SEQ ID NO:19)序列向Ala
‑
Thr
‑
Ala
‑
Thr(SEQ ID NO:20)的突变，或包含IgG1铰链区和IgG2 CH2结构域的杂交恒定区)。
[0009]在某些实施方式中，所述蛋白质或多肽包含含有SEQ ID NO:2的抗体或其抗原结合片段，和能够结合TGFβ的人TGFβRII的片段(例如，可溶片段)。所述抗体可任选地包含经修饰的恒定区(例如，任何本文所述的，包含C末端Lys
→
Ala取代，Leu
‑
Ser
‑
Leu
‑
Ser(SEQ ID NO:19)序列向Ala
‑
Thr
‑
Ala
‑
Thr(SEQ ID NO:20)的突变，或包含IgG1铰链区和IgG2 CH2结构域的杂交恒定区)。
[0010]在某些实施方式中，所述蛋白质或多肽包含含有SEQ ID NO:2的抗体或其抗原结合片段，和人TGFβRII ECD。所述抗体可包含经修饰的恒定区(例如，任何本文所述的，包含C末端Lys
→
Ala取代，Leu
‑
Ser
‑
Leu
‑
Ser(SEQ ID NO:19)序列向Ala
‑
Thr
‑
Ala
‑
Thr(SEQ ID NO:20)的突变，或包含IgG1铰链区和IgG2 CH2结构域的杂交恒定区)。
[0011]在某些实施方式中，所述蛋白质或多肽包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸1
‑
120的抗体或其抗原结合片段，和人TGFβRII。所述抗体可包含经修饰的恒定区(例如，任何本文所述的，包含C末端Lys
→
Ala取代，Leu
‑
Ser
‑
Leu
‑
Ser(SEQ ID NO:19)序列向Ala
‑
Thr
‑
Ala
‑
Thr(SEQ ID NO:20)的突变，或包含IgG1铰链区和IgG2 CH2结构域的杂交恒定区)。
[0012]在某些实施方式中，所述蛋白质或多肽包含含有SEQ ID NO:2的氨基酸1
‑
120的抗体或其抗原结合片段，和能够结合TGFβ的人TGFβRII的片段(例如，可溶片段)。所述抗体可包含经修饰的恒定区(例如，任何本文所述的，包含C末端Lys
→
Ala取代，Leu
‑
Ser
‑
Leu
‑
Ser(SEQ ID NO:19)序列向Ala
‑
Thr
‑
Ala
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质，其包含：第一多肽，其包含：a)至少抗体或其抗原结合片段的重链可变结构域，所述抗体或其抗原结合片段结合人蛋白质程序性死亡配体1(PD
‑
L1)；和b)人TGFβRII或其能够结合TGFβ的片段；以及第二多肽，其包含至少抗体或其抗原结合片段的轻链可变结构域，所述抗体或其抗原结合片段结合人蛋白质PD
‑
L1。2.如权利要求1所述的蛋白质，还包含将所述重链的C末端与所述人TGFβRII或其片段的N末端相连的氨基酸接头。3.如权利要求1或2所述的蛋白质，其中，所述人TGFβRII包含与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9具有至少80％序列相同性的至少20个氨基酸长度的氨基酸序列。4.如权利要求1至3中任一项所述的蛋白质，其中，所述人TGFβRII包含氨基酸序列SEQ ID NO:10。5.如权利要求1至4中任一项所述的蛋白质，其中，(a)所述重链包括HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，分别与SYIMM、SIYPSGGITFYADTVKG和IKLGTVTTVDY具有至少80％总体序列相同性；并且(b)所述轻链包括HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3，分别与TGTSSDVGGYNYVS、DVSNRPS和SSYTSSSTRV具有至少80％总体序列相同性。6.如权利要求1至5中任一项所述的蛋白质，其中，所述重链可变区包括分别具有氨基酸序列SYIMM、SIYPSGGITFYADTVKG和IKLGTVTTVDY的HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，并且所述轻链可变区包括分别具有氨基酸序列TGTSSDVGGYNYVS、DVSNRPS和SSYTSSSTRV的HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3。7.如权利要求1至6中任一项所述的蛋白质，其中，(a)所述重链包含与以下氨基酸序列具有至少85％序列相同性的氨基酸序列：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMVWRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADWKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS，并且(b)所述轻链包含与以下氨基酸序列具有至少85％序列相同性的氨基酸序列：QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGY...

【专利技术属性】
技术研发人员：劳健明，
申请(专利权)人：默克专利有限公司，
类型：发明
国别省市：