一种多重荧光染色液及其制备方法和使用方法技术

本发明专利技术公开了一种多重荧光染色液及其制备方法和使用方法，其中多重荧光染色液包括以每一升计的以下组分：强碱105.5

【技术实现步骤摘要】
一种多重荧光染色液及其制备方法和使用方法


[0001]本专利技术属于多重荧光检测
，特别是针对妇科阴道微生态检测；具体涉及一种多重荧光染色液及其制备方法和使用方法。

技术介绍

[0002]现有的妇科阴道微生态检测方法采用两步法对样本进行染色，即每个样本中真菌的检测要单独进行染色。每个样本需要涂两个玻片，一个玻片染真菌，采用紫外荧光模块进行检测；另一个玻片染除真菌外的微生物及其他有形成分，采用蓝光荧光模块进行检测；因此采用上述的检测方法存在操作时间长，步骤繁琐，并且需要两个荧光模块，对成像设备的配置要求高。
[0003]并且目前同类产品对目标物的染色清晰度不高，尤其对小目标物(如细菌，真菌等)的成像轮廓不清晰，会导致其在识别(人工和自动)过程中造成错误(遗漏和错认)；目前传统的不染色方式(盐水片检测)识别的准确度，由于技术本身的限制，最高仅仅只能达到75％
‑
80％。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有妇科阴道微生态检测方法存在的上述问题，提供一种多重荧光染色液。
[0005]本专利技术采用以下技术方案：一种多重荧光染色液，包括以每一升计的以下组分：强碱105.5
‑
365mM、酸0.01
‑
50g、结合蛋白5
‑
250g、防腐剂0.01
‑
0.2L、增溶剂0.1
‑
50L、破膜剂0.001
‑
20L以及荧光染色剂0.0194
‑
180mg、余量为灭菌蒸馏水。
[0006]进一步限定，所述强碱包括NaCl 100
‑
200mM、KCl 1
‑
5mM、Na2HPO
4 0.5
‑
2mM以及KH2PO
4 5
‑
158mM中的一种或多种。
[0007]进一步限定，所述结合蛋白以每一升计包括以下组分：鼠抗单克隆抗体2
‑
100g、羊抗单克隆抗体1
‑
50g以及兔抗单克隆抗体1
‑
50g中的一种或多种。
[0008]进一步限定，所述酸为乙酸。
[0009]进一步限定，所述防腐剂为食品用或药品用防腐剂，优选Proclin300。
[0010]进一步限定，所述增溶剂为工业有机溶剂，优选二甲基亚砜。
[0011]进一步限定，所述破膜剂为调节生物膜分子流动性的表面活性剂，优选甘油、丙三醇或吐温20中的一种。
[0012]进一步限定，所述荧光染色剂以每一升计包括以下组分：Hochest 0.01
‑
10mg、4,4
’‑
双(2
‑
苯并噁唑基)二苯乙烯0.001
‑
10mg、吖啶橙0.001
‑
10mg、羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯0.001
‑
50mg、Sybr Green I 0.001
‑
10mg、Sybr GreenⅡ0.001
‑
10mg、细胞膜荧光探针0.0003
‑
40mg、异硫氰酸荧光素0.001
‑
10mg、藻红蛋白0.001
‑
10mg、多甲藻黄素
‑
叶绿素
‑
蛋白质复合物0.001
‑
10mg、碘化丙啶0.001
‑
10mg以及别藻青蛋白0.001
‑
10mg中的一种或多种的混合物。
[0013]本专利技术的有益效果为：本专利技术将真菌检测物和真菌以外的其他微生物检测物鳌合在一起，因此只需要一次涂抹，一次染色，且只需要一次观色即可得出检测结果，并且染色后效果更加清晰，目标物染色边界更加锐化，这样对小目标物的识别非常有好处，尤其是微生物中细菌及真菌都是形态比较小，边界清晰，锐化的荧光染色效果，有利于此类目标物的鉴定，也更加有利于实施“人工智能识别”，实现妇科阴道微生态检测的自动化，采用上述多重荧光染色液操作时间短，操作步骤简单，提高实验效率，降低了对检测设备的配置要求；
[0014]本专利技术提供的多重荧光染色液能够对所有的有型微生物及组织细胞进行荧光染色或标记，完全呈现检测环境的微生态状况，利于临床检测结果的判断。
[0015]本专利技术还公开了一种多重荧光染色液的制备方法，包括以下步骤：
[0016]将强碱、乙酸以及灭菌蒸馏水混合配制盐母液，搅拌20
‑
35分钟，0.22μm水系膜过滤，2
‑
5℃避光保存；
[0017]配制结合蛋白母液，0.22μm水系膜过滤，
‑
20～
‑
17℃分装避光保存；
[0018]配制荧光染色剂母液，0.22μm脂溶系膜过滤，2
‑
5℃避光保存；
[0019]将盐母液、结合蛋白母液、荧光染色剂母液、防腐剂、增溶剂以及破膜剂混合，以灭菌蒸馏水为稀释液，稀释得到多重荧光染色液，室温避光保存。
[0020]本专利技术的有益效果为：该制备方法简单，在常温下和只需要搅拌即可实现鳌合，并且只需要在常温下保存，保存条件友好。
[0021]本专利技术还公开了一种多重荧光染色液的使用方法，包括以下步骤：
[0022]用生理盐水将采样拭子的采样端淹没且搅拌1
‑
2分钟；
[0023]将采样拭子的采样端于载玻片上涂抹单层样本膜；
[0024]固化样本后加入多重荧光染色液以使样本完全被覆盖，30
‑
45秒后冲洗样本；
[0025]晾干冲洗的样本，且将样本置于具有蓝光荧光模块的显微镜下观察即可。
[0026]本专利技术的有益效果为：使用方法简单，可操作性强，减少了对检测结果影响的因素，因此检测结果准确性高，并且采用上述的使用方法，可以减少生理盐水的使用量。
附图说明
[0027]图1为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下病原体孢子的染色图；
[0028]图2为采用现有荧光染色液染色样本后显微镜下病原体孢子的染色图；
[0029]图3为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下病原体线索细胞的染色图；
[0030]图4为采用现有荧光染色液染色样本后显微镜下病原体线索细胞的染色图；
[0031]图5为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下上皮细胞、白细胞以及乳杆菌的染色图；
[0032]图6为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下加德纳菌感染的上皮细胞的染色图；
[0033]图7为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下线索细胞真菌孢子的染色图；
[0034]图8为采用实施例2制备得到的多重荧光染色液染色样本后显微镜下菌丝的染色
图；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多重荧光染色液，其特征在于，包括以每一升计的以下组分：强碱105.5
‑
365mM、酸0.01
‑
50g、结合蛋白5
‑
250g、防腐剂0.01
‑
0.2L、增溶剂0.1
‑
50L、破膜剂0.001
‑
20L以及荧光染色剂0.0194
‑
180mg、余量为灭菌蒸馏水。2.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述强碱包括NaCl100
‑
200mM、KCl 1
‑
5mM、Na2HPO
4 0.5
‑
2mM以及KH2PO
4 5
‑
158mM中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述结合蛋白以每一升计包括以下组分：鼠抗单克隆抗体2
‑
100g、羊抗单克隆抗体1
‑
50g以及兔抗单克隆抗体1
‑
50g中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述酸为乙酸。5.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述防腐剂为食品用或药品用防腐剂，优选Proclin300。6.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述增溶剂为工业有机溶剂，优选二甲基亚砜。7.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述破膜剂为调节生物膜分子流动性的表面活性剂，优选甘油、丙三醇或吐温20中的一种。8.根据权利要求1所述的多重荧光染色液，其特征在于，所述荧光染色剂以每一升计包括以下组分：Hochest 0.01
‑
10mg、4,4
’‑
双(2
‑
苯并噁唑基)二苯乙烯0.001
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：郭永超，蔡锦刚，王艳平，黄萍，
申请(专利权)人：深圳联合医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：