一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，具体包括，准备牛初乳、牛初乳饲喂随母哺乳羔羊、血清样品采集、标准牛IgG含量标准曲线测定、血清样品IgG含量测定、牛初乳样品IgG含量测定和新生羔羊IgG吸收效率的计算，本发明专利技术中，可实现随母哺乳羔羊正常状态下IgG吸收效率测定，不影响羔羊正常哺乳和生产管理，突破测定产后时间限制，可测定任意时间羔羊IgG吸收效率。IgG吸收效率。IgG吸收效率。

【技术实现步骤摘要】
一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法


[0001]本专利技术涉及羔羊IgG吸收效率测定
，特别涉及一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法。

技术介绍

[0002]IgG抗体(immunoglobulin G)在免疫应答中起着激活补体，中和多种毒素的作用。反刍动物IgG抗体不能在妊娠期穿过胎盘，它们从乳腺分泌进入初乳，使新生幼崽第一时间得到抗体保护。
[0003]新生羔羊有完整吸收初乳中大分子IgG的能力，从而形成被动免疫力，新生羔羊IgG吸收不足引起的被动免疫失败将导致羔羊哺乳期免疫力下降，是羔羊哺乳期患病和死亡高发的主要原因。
[0004]新生羔羊IgG吸收能力随出生时间延长而快速下降，一般这种吸收IgG的能力仅有约24h，此后形成肠关闭，同时羔羊对IgG的吸收能力存在巨大的动物个体差异，是影响其被动免疫建立的主要因素，精确测定羔羊IgG吸收效率具有重大生产和科研意义。
[0005]前人通常采用延迟初乳饲喂时间进行IgG吸收效率测定，但这种方法存在至少3个问题：1，延迟初乳饲喂导致肠关闭时间延后，所测定的IgG吸收效率不能反映正常状态；2，由于新生羔羊或犊牛在延迟饲喂的过程中长时间没有进食，机体本身已经处于虚弱状态，对试验结果存在一定程度上的影响；3，新生羔羊初乳饲喂时间无法延迟太久，否则很难保证新生羔羊的存活。

技术实现思路

[0006](一)要解决的技术问题
[0007]本专利技术可以解决现有羔羊IgG吸收效率测定方法，无法实现羔羊正常状态下效率测定，测定过程影响正常哺乳和生产管理，且时间限制明显的难题。
[0008](二)技术方案
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案，一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，具体包括以下步骤：
[0010]S1、准备牛初乳：获得牛初乳，并于
‑
18℃—
‑
22℃保存；
[0011]S2、牛初乳饲喂随母哺乳羔羊：称量并记录羔羊的体重，牛初乳预热至38℃—40℃，通过口腔灌注给予随母哺乳羔羊饲喂牛初乳，并确定灌注牛初乳的哺乳量；
[0012]S3、血清样品采集：羔羊饲喂牛初乳后23h—25h，颈静脉采血，使用促凝采血管收集血液，在室温下静置1.5h—2.5h，待血清析出后，在室温下用离心机以3400
×
g—3600
×
g离心14min—16min收集血清样品，收集的血清样品置于
‑
18℃—
‑
22℃保存；
[0013]S4、牛IgG含量标准曲线测定：牛IgG标准品用10
×
磷酸盐缓冲溶液稀释成0.1mg/ml—1.0mg/ml的多个稀释度，每个稀释度至少设两个重复组；向凝胶琼脂板的每孔中加入19μl—21μl的标准牛IgG稀释液，置于36℃
‑
38℃恒温培养箱，观察记录沉淀环的大小，直至
其不继续扩散为止；使用游标卡尺测量各稀释度沉淀环直径，取相同稀释度沉淀环直径的平均值为测量值，以测量值的平方为横坐标，凝胶琼脂板相应孔中牛IgG的含量为纵坐标，绘制标准曲线；
[0014]S5、血清样品IgG含量测定：选择一新凝胶琼脂板，每孔加入19μl—21μl稀释后的血清样品，每个样品至少设两个重复组；使用游标卡尺测量各样品沉淀环直径，取相同样品沉淀环直径的平均值为测量值，根据标准曲线计算得出的牛IgG含量再乘以血清样品的稀释倍数，即为血清样品IgG的含量；
[0015]S6、牛初乳样品IgG含量测定：选择一新凝胶琼脂板，每孔加入19μl—21μl稀释后的牛初乳样品，每个样品至少设两个重复组；使用游标卡尺测量各样品沉淀环直径，取相同样品沉淀环直径的平均值为测量值，根据标准曲线计算得出的牛IgG含量再乘牛初乳以样品的稀释倍数，即为牛初乳样品IgG的含量；
[0016]S7、新生羔羊IgG吸收效率的计算：IgG表观吸收率AEA(％)＝[血清牛IgG含量(g/L)*体重(kg)*7.5％]/[牛初乳IgG含量(g/L)*哺乳量(L)]。
[0017]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S1中，获得牛初乳为还原牛初乳或新鲜牛初乳，还原牛初乳及新鲜牛初乳获得方式具体如下：
[0018]采用牛初乳粉添加清洁温水的方式制备的还原牛初乳，且牛初乳粉与清洁温水的体积比为1:4
‑
1:7；
[0019]收集母牛产犊后3天内的乳汁，获得的新鲜牛初乳。
[0020]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S2中，灌注牛初乳哺乳量的具体步骤为，将牛初乳预先放入一带有刻度线的灌注容器，记录初始牛初乳的体积，灌注牛初乳之后，记录灌注后牛初乳的体积，两者的差值即为灌注牛初乳的哺乳量。
[0021]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S3中，抗凝采血管收集血液的量为4ml
‑
6ml。
[0022]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S4、所述S5和所述S6中，凝胶琼脂板的具体制备步骤为：
[0023]使用0.9％氯化钠溶液制备琼脂浓度为1％凝胶琼脂板，制备过程中加入兔抗牛IgG抗体，兔抗牛IgG抗体与琼脂溶液的比例为1:30。
[0024]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S4中，多个稀释度具体设置有六个，且六个稀释度分别为0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml和1.0mg/ml。
[0025]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述S4中，标准曲线采用线性拟合绘制
[0026](三)有益效果
[0027]1.本专利技术提供的测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，可实现随母哺乳羔羊正常状态下IgG吸收效率测定；
[0028]2.本专利技术提供的测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，不影响羔羊正常哺乳和生产管理；
[0029]3.本专利技术提供的测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，突破测定产后时间限制，可测定任意时间羔羊IgG吸收效率。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0031]图1是本专利技术的流程示意图；
[0032]图2是本专利技术的牛IgG和羊IgG的抗原特异性检测结果示意图；
[0033]图3是本专利技术的单向免疫扩散标准曲线示意图；
[0034]图4是本专利技术的IgG吸收效率的动态变化示意图。
[0035]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0036]为使本专利技术实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施方式中的附图，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1、准备牛初乳：获得牛初乳，于
‑
18℃—
‑
22℃保存；S2、牛初乳饲喂随母哺乳羔羊：称量并记录羔羊的体重，牛初乳水浴预热至38℃—40℃，通过口腔灌注给予随母哺乳羔羊饲喂牛初乳，并确定灌注牛初乳的哺乳量；S3、血清样品采集：羔羊饲喂牛初乳后23h—25h，颈静脉采血，使用促凝采血管收集血液，在室温下静置1.5h—2.5h，待血清析出后，在室温下用离心机以3400
×
g—3600
×
g离心14min—16min收集血清样品，收集的血清样品置于
‑
18℃—
‑
22℃保存；S4、牛IgG含量标准曲线测定：牛IgG标准品用10
×
磷酸盐缓冲溶液稀释成0.1mg/ml—1.0mg/ml的多个稀释度，每个稀释度至少设两个重复组；向凝胶琼脂板的每孔中加入19μl—21μl的标准牛IgG稀释液，置于36℃
‑
38℃恒温培养箱，观察记录沉淀环的大小，直至其不继续扩散为止；使用游标卡尺测量各稀释度沉淀环直径，取相同稀释度沉淀环直径的平均值为测量值，以测量值的平方为横坐标，凝胶琼脂板相应孔中牛IgG的含量为纵坐标，绘制标准曲线；S5、血清样品IgG含量测定：选择一新凝胶琼脂板，每孔加入19μl—21μl稀释后的血清样品，每个样品至少设两个重复组；使用游标卡尺测量各样品沉淀环直径，取相同样品沉淀环直径的平均值为测量值，根据标准曲线计算得出的牛IgG含量再乘以血清样品的稀释倍数，即为血清样品IgG的含量；S6、牛初乳样品IgG含量测定：选择一新凝胶琼脂板，每孔加入19μl—21μl稀释后的牛初乳样品，每个样品至少设两个重复组；使用游标卡尺测量各样品沉淀环直径，取相同样品沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：纪守坤，刘月琴，田沛知，严慧，张英杰，段春辉，郭云霞，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：