用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒制造技术

本申请涉及体外诊断免疫分析技术及纳米技术领域，具体为一种用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒；所述试剂盒包括:EB病毒抗体标志物联合检测试剂卡、样本稀释液和固体底物试剂；本发明专利技术提供了一种快速现场检测EB病毒抗体的产品，解决了现有技术中不能快速高灵敏现场检测EB病毒抗体的不足，且可实现多指标联合检测；本申请中的试剂盒与传统ELISA试剂盒相比，灵敏度相当或更优，简单快速便携，16min内即可完成，无需大型精密仪器，稳定性良好，可常温保存及运输，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外诊断免疫分析技术及纳米
，具体为一种用于EB病毒抗体快速 联合检测的试剂盒。

技术介绍

[0002]鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一类发生于鼻咽粘膜处上皮性质的恶性肿瘤。 早期鼻咽癌对放射治疗敏感，及时干预治疗临床治愈率可达90％以上；中期鼻咽癌生存率 可达80％；而晚期鼻咽癌易发生转移，致死率高，五年生存率低于20％。因此，早发现， 早治疗对于提高鼻咽癌患者治愈率，延长患者生存期具有重要意义。然而，由于鼻咽癌早 期症状不明显，易漏诊，约80％鼻咽癌患者在就诊时已发展至中晚期，延误了最佳治疗时 机。在高风险地区(如广西、广东中山等地)推行鼻咽癌筛查，有助于及早发现鼻咽癌高 风险人群，并进行追踪随访及干预，提高鼻炎癌早诊率。
[0003]经流行病学研究发现，约95％以上的鼻咽癌与EB病毒(Epstein
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Barr virus,EBV)感染 密切相关。EB病毒是一种γ疱疹DNA病毒，也称为嗜淋巴细胞病毒，其感染还可能引起 单核细胞增多症、恶性淋巴瘤等。在鼻咽癌患者的肿瘤活检组织中可检出EBV核酸或抗原 [2](Liu Y等，Genet Test Mol Biomarkers，2011)，患者血清中亦存在针对EBV病毒抗原 的特异性抗体。EBV感染后，机体会产生针对EB病毒多种抗原的免疫反应，产生多种EB 病毒抗体，包括EBV衣壳抗原抗体(EBV
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VCA
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IgG/IgA/IgM)，EBV早期抗原抗体 (EBV
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EA
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IgA)，EBV核抗原抗体(EBV
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NA
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IgG/IgA)、Rta蛋白抗体(Rta
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IgG)及Zta 蛋白抗体(Zta
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IgG)等[3](Li,Y.Q.等，Cancer Biol Med,2018)。不同抗体出现在病毒感 染的不同阶段，其滴度的动态变化和监测，可用于鼻咽癌早期筛查、临床诊断、治疗效果 及预后判断[4](鼻咽癌标志物专家委员会，鼻咽癌标志物临床应用专家共识，中国癌症防 治杂志，2019)。尽管90％以上的成人均为EB病毒感染者，然而大规模人群普查及跟踪随 访发现，仅鼻咽癌患者在出现临床症状前三年，表现出血清中多种IgA抗体显著升高[5,6](Ji, M.F.等，British J Cancer，2007；季明芳等，中华肿瘤杂志，2003)。EB病毒IgA抗体水平 持续升高预示鼻咽癌发病高风险，其中，VCA
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IgA 5年随访升高组风险调整比21.3％，且抗 体滴度与发病风险存在剂量
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反应关系[7](Cao SM.,等，PLoS One,2011)。因此，基于 EBV
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IgA等抗体的滴度检测和动态监测，可初筛罹患鼻咽癌高风险人群，进一步开展3
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5 年的持续跟踪监测及风险管理，有助于在早期阶段筛查并发现鼻咽癌患者；同时可作为鼻 咽镜等侵入性检测手段的补充，用于鼻咽癌的临床早期辅助诊断[8](Cheng,W.M.等，Int J Cancer，2002)。过去十多年，针对中山等地的人群队列筛查结果显示，基于ELISA的 VCA
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IgA和/或NA
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IgA抗体筛查可将鼻咽癌的早诊率提高3
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4倍，入组筛查的鼻咽癌患者， 5年生存率显著提高，对人群风险管理及尽早干预治疗大有裨益[9](Yu X.等，J Cancer，2018)。 此外，由于不同抗体标志物在特异性、敏感性及窗口期上存在一定差异，采用多项指标组 合检测，可有效提高筛查的特异性和准确率[10](Chen,H.等，Cancer Prev Res(Phila)，2017)。
[0004]鼻咽癌的早期筛查和高风险人群管理，是实现鼻咽癌早诊早治的重要手段。根据
应用 场景，现有鼻咽癌检查手段可分为临床诊断和人群筛查两大类，检测技术包括：纤维鼻咽 镜检查及病理学检测、影像学诊断(鼻咽CT、MRI等)、EBV
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DNA检测、EBV血清学抗 体检测等。迄今为止，我国食品药品监督管理局共计批准106种鼻咽癌EBV检测相关试剂 产品，包括进口及国产医疗器械，其中酶联免疫(ELISA)试剂盒及化学发光试剂占主要， 分别占比44％和32％，此外基于荧光PCR技术的分子诊断试剂占10％，胶体金试纸及免疫 荧光试剂占比较小。对于血清学免疫检测，化学发光技术由于其高敏感性和特异性，市场 份额逐年上升，但其依赖于大型精密仪器，成本较高，因此多适用于中心实验室，用于临 床诊断及预后观察，占据三甲医院等高端市场。而ELISA、胶体金、免疫荧光试剂多用于 二级及以下医疗机构，也用于人群普查或体检中心机会性筛查。20世纪以前，我国鼻咽癌 人群筛查主要基于传统免疫荧光定性检查，缺乏标准化，存在人为判断的主观性。随后， 随着技术的发展和革新，灵敏度较高、结果精准量化的ELISA技术逐渐取代免疫荧光，成 为国家卫生计生委推荐的鼻咽癌筛查技术方案[11](Li,T.等，Cancer Med，2018)。然而， 由于ELISA检测操作繁琐耗时，且依赖于大型配套检测仪器，需动员村医、县医院、市医 院三级医务人员，运送血液样本至实验室由专业人员开展检测，至少72小时以后才能得到 检测结果，不仅耗时且综合成本较高，单一指标的结果还可能影响筛查结果准确性，导致 群众依从性不高，参与度低，在南方基层地区的推广效果不甚理想。尽管，目前市场上， 也有少量胶体金试纸产品，然而检测灵敏度不足限制其应用范围。因此，亟需开发便携式、 高灵敏且简单的检测产品。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种用于EB病毒抗体快速联合检测的试剂盒，以解决现有技术中EBV 抗体检测操作繁琐、便携度低的问题。
[0006]本申请公开了一种用于EB病毒抗体快速联合检测试剂盒，所述试剂盒包括:EB病毒抗 体标志物联合检测试剂卡、样本稀释液和固体底物试剂。
[0007]可选的，以质量分数计，所述样本稀释液包括：以质量分数计，0.05％
‑
5％封闭剂；以 体积分数计：0.05％
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5％表面活性剂和0.05％
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0.15％防腐剂；以摩尔浓度计：0.01M
‑
0.5M Tris 缓冲液。
[0008]可选的，所述封闭剂包括牛血清白蛋白、羊血清、鱼明胶中的至少一种。
[0009]可选的，所述表面活性剂为NP
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40、Tween、Trixton X
‑
100中的至少一种。
[0010]可选的，所述防腐剂为Proclin 300和叠氮化钠中的至少一种。
[0011]可选的，所述固体底物试剂包括固体化学发光剂、固体过氧化物、底物缓冲液。
[0012]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于EB病毒抗体快速联合检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括:EB病毒抗体标志物联合检测试剂卡、样本稀释液和固体底物试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括：以质量分数计，0.05％
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5％封闭剂；以体积分数计，0.05％
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5％表面活性剂和0.05％
‑
0.15％防腐剂；以摩尔浓度计，0.01M
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0.5M Tris缓冲液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭剂包括牛血清白蛋白、羊血清、鱼明胶中的至少一种。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为NP
‑
40、Tween和Triton X
‑
100中的至少一种。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为Proclin 300和叠氮化钠中的至少一种。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固体底物试剂包括固体化学发光剂、固体过氧化物和底物缓冲液。...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂国辉，阎锡蕴，刘丹，丁辉，王大吉，彭婉君，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：