【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学检测，具体公开了一种荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物、反应体系及其检测方法。
技术介绍
1、鸡皮刺螨(prm)是鸡常见的一种吸血性外寄生虫，其发育周期短，繁殖速度快，对鸡危害严重，表现为叮咬并吸食血液，引起奇痒而导致鸡自啄、互啄，降低生长率和产蛋率，易给鸡养殖业造成巨大的经济损失。
2、目前鸡皮刺螨的诊断方法主要包括形体学诊断以及pcr检测等方法，但上述检测方法都具有明显的局限性。目前采用的pcr检测方法主要是常规pcr检测方法，但是常规pcr检测方法具有耗时长、敏感性低等缺陷，因此亟需建立一种可以检测鸡皮刺螨的荧光定量pcr的方法，弥补现有技术中鸡皮刺螨检测的不足，为疾病的防控提供一定的帮助。
技术实现思路
1、针对现有技术中检测鸡皮刺螨技术不足的问题，本专利技术提供了一种荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物、反应体系及其检测方法。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术提供了如下的技术方案。
3、本专利技术第一方面提供了一种荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物，所述专用引物的序列如seq id no.1-2所示，其中：
4、prm上游引物seq id no.1：5’-gattatcggcgacggtctgt-3’；
5、prm下游引物seq id no.2：5’-cgtgtagaacatgaggccgt-3’。
6、相比于现有技术，本专利技术提供了一种用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物，所
7、本专利技术第二方面提供了一种用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系，所述反应体系包括所述的荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物。
8、优选的，所述反应体系还包括：green qpcr supermix酶，样品dna和去离子水。
9、进一步优选的，所述prm上游引物和pcr下游引物的浓度为8-10μmol/l。
10、再进一步优选的，所述prm上游引物和pcr下游引物的浓度为9μmol/l。
11、进一步优选的，所述样品dna的浓度为200-600ng/l。
12、再进一步优选的，所述样品dna的浓度为400ng/l。
13、进一步优选的，所述反应体系中green qpcr supermix酶、prm上游引物、prm下游引物和样品dna的体积比为9-11:1:1:2。
14、再进一步优选的，所述反应体系中green qpcr supermix酶、prm上游引物、prm下游引物和样品dna的体积比为10:1:1:2。
15、本专利技术第三方面提供了一种检测鸡皮刺螨的方法，包括如下步骤：利用所述的荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系进行pcr扩增反应，再进行琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
16、优选的，所述pcr扩增反应的程序为：93-97℃预变性5min；93-97℃变性30s；52-58℃退火30s；共38-42个循环。
17、进一步优选的，所述pcr扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；共40个循环。
18、优选的，所述检测为检测166bp条带的出现。
19、综上所述，本专利技术提供了一种荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物和相应的最佳反应条件以及检测方法，其对鸡皮刺螨的质粒标准品的最低检出限为9.1×101拷贝/μl，灵敏度最低比常规pcr高出100倍，灵敏性高；该方法仅特异扩增鸡皮刺螨，与肺炎克雷伯菌和猪伪狂犬病毒无交叉反应，特异性强；组内变异系数小于1％，组间变异系数小于1％。本专利技术建立的荧光定量pcr检测方法为鸡皮刺螨的临床检测及流行病学调查提供了一种快速、敏感、特异的技术手段。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种荧光PCR检测鸡皮刺螨的专用引物，其特征在于：所述专用引物的序列如SEQ IDNO.1-2所示，其中：
2.一种用于荧光PCR检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述反应体系包括权利要求1所述的荧光PCR检测鸡皮刺螨的专用引物。
3.如权利要求2所述的用于荧光PCR检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述反应体系还包括：Green qPCR SuperMix酶，样品DNA和去离子水。
4.如权利要求3所述的用于荧光PCR检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述PRM上游引物和PCR下游引物的浓度为8-10μmol/L；和/或
5.如权利要求3所述的用于荧光PCR检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于，所述反应体系中Green qPCR SuperMix酶、PRM上游引物、PRM下游引物和样品DNA的体积比为9-11:1:1:2。
6.一种检测鸡皮刺螨的方法，其特征在于，包括如下步骤：利用权利要求2-5任一项所述的荧光PCR检测鸡皮刺螨的反应体系进行PCR扩增反应，再进行琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
7.如
8.如权利要求7所述的检测鸡皮刺螨的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；共40个循环。
9.如权利要求6所述的检测鸡皮刺螨的方法，其特征在于，所述检测为检测166bp条带的出现。
...【技术特征摘要】
1.一种荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物，其特征在于：所述专用引物的序列如seq idno.1-2所示，其中：
2.一种用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述反应体系包括权利要求1所述的荧光pcr检测鸡皮刺螨的专用引物。
3.如权利要求2所述的用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述反应体系还包括：green qpcr supermix酶，样品dna和去离子水。
4.如权利要求3所述的用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于：所述prm上游引物和pcr下游引物的浓度为8-10μmol/l；和/或
5.如权利要求3所述的用于荧光pcr检测鸡皮刺螨的反应体系，其特征在于，所述反应体系中green qpcr supermix酶、p...
【专利技术属性】
技术研发人员：王传文，张学迪，徐楷，王仲浩，尹硕，刘晶，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。