靶向CD22的嵌合抗原受体及其制法和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向CD22的嵌合抗原受体及其制法和应用。具体地，本发明专利技术提供了一种靶向CD22的嵌合抗原受体，其包括前导序列、靶向CD22的scFv，铰链区，跨膜区，和胞内信号结构域。本发明专利技术提供编码该嵌合抗原受体的核酸分子和相应的表达载体、CAR-T细胞及其应用。本发明专利技术的嵌合抗原受体靶向CD22阳性细胞，可以用于治疗CD22阳性B细胞白血病，包括一些抗CD19CAR-T治疗后急性B细胞白血病复发的CD19阴性CD22阳性的患者。性的患者。

【技术实现步骤摘要】
ID NO:2所示。(注：CAR-T22.13)
[0015]在另一优选例中，所述V
L
的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，V
H
的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。(注：CAR-T22.14)
[0016]在另一优选例中，所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
[0017]在另一优选例中，所述抗原结合结构域结合于CD22，较佳地为人CD22。
[0018]在另一优选例中，所述抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区来源于人源化或来自于人的抗体。
[0019]在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的结构如下式III所示：
[0020]L-V
L-V
H-H-TM-C-CD3ζ
ꢀꢀꢀꢀꢀ
(III)
[0021]其中，
[0022]L为任选的引导序列(Leader sequence，即信号肽signal peptide)；
[0023]H为绞链区；
[0024]TM为跨膜结构域；
[0025]C为共刺激信号分子；
[0026]CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；
[0027]V
H
、V
L
和
“-”
分别如上所述。
[0028]在另一优选例中，所述的L为选自下组的蛋白的信号肽：CD8、CD28、GM-CSF、CD4、CD137、或其组合。
[0029]在另一优选例中，所述的L为CD8来源的信号肽。
[0030]在另一优选例中，L的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。
[0031]在另一优选例中，所述的H为选自下组的蛋白的铰链区：CD8、CD28、CD137、或其组合。
[0032]在另一优选例中，所述的H为CD8α来源的铰链区。
[0033]在另一优选例中，H的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0034]在另一优选例中，所述的TM为选自下组的蛋白的跨膜区：CD28、CD3 epsilon、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、或其组合。
[0035]在另一优选例中，所述的TM为CD8α来源的跨膜区。
[0036]在另一优选例中，TM的序列如SEQ ID NO:11所示。
[0037]在另一优选例中，所述的C为选自下组的蛋白的共刺激信号分子：OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD134、4-1BB(CD137)、PD1、Dap10、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、NKG2D、GITR、TLR2、或其组合。
[0038]在另一优选例中，所述的C为4-1BB或CD28来源的共刺激信号分子，较佳地为4-1BB来源的共刺激信号分子。
[0039]在另一优选例中，C的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。
[0040]在另一优选例中，CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。
[0041]在另一优选例中，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.14或15所示。
[0042]在本专利技术的第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码本专利技术第一方面所述的嵌合抗原受体(CAR)。
[0043]在另一优选例中，所述核酸分子为分离的。
[0044]在本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述的载体含有本专利技术第二方面所述的核酸分子。
[0045]在另一优选例中，所述的载体选自下组：DNA、RNA、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体(AAV)、逆转录病毒载体、转座子、或其组合。
[0046]在另一优选例中，所述的载体选自下组：质粒、病毒载体。
[0047]在另一优选例中，所述载体为病毒颗粒的形式。
[0048]在另一优选例中，所述载体为慢病毒载体。
[0049]在另一优选例中，所述载体包含一个或多个启动子，所述启动子可操作地与所述核酸序列、增强子、转录终止信号、多腺苷酸化序列、复制起点、选择性标记、核酸限制性位点、和/或同源重组位点连接。
[0050]在本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞中含有本专利技术第三方面所述的载体或染色体中整合有外源的本专利技术第二方面所述的核酸分子或表达本专利技术第一方面所述的CAR。
[0051]在另一优选例中，所述宿主细胞为分离的细胞。
[0052]在另一优选例中，所述宿主细胞为基因工程化的细胞。
[0053]在另一优选例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
[0054]在另一优选例中，所述宿主细胞为T细胞或NK细胞，较佳地为T细胞。
[0055]在另一优选例中，所述宿主细胞为CAR-T细胞或CAR-NK细胞，较佳地为CAR-T细胞。
[0056]在本专利技术的第五方面，提供了一种制备工程化的免疫细胞的方法，所述的免疫细胞表达本专利技术第一方面所述的CAR，所述方法包括以下步骤：
[0057](a)提供待改造的免疫细胞；和
[0058](b)将本专利技术第二方面所述的核酸分子或本专利技术第三方面所述的载体转导入所述免疫细胞内，从而获得所述工程化的免疫细胞。
[0059]在另一优选例中，所述工程化的免疫细胞为CAR-T细胞或CAR-NK细胞。
[0060]在另一优选例中，在步骤(a)中，还包括在含有0.1-10％(较佳地0.5％-5％，更佳地0.8％-2％)人血白蛋白的GT-551无血清培养基中培养所述待改造的免疫细胞，其中人血白蛋白的含量以培养基总重量计。
[0061]在另一优选例中，所述的方法还包括对获得的工程化免疫细胞进行功能和有效性检测的步骤。
[0062]在本专利技术的第六方面，提供了一种制剂，所述制剂含有本专利技术第一方面所述的嵌合抗原受体、本专利技术第二方面所述的核酸分子、本专利技术第三方面所述的载体、或本专利技术第四方面所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0063]在另一优选例中，所述制剂为液态制剂。
[0064]在另一优选例中，所述制剂的剂型为注射剂。
[0065]在另一优选例中，所述制剂中所述CAR-T细胞的浓度为1
×
10
3-1
×
108个细胞/ml，较佳地1
×
10
4-1
×
107个细胞/ml。
[0066]在本专利技术的第七方面，提供了一种本专利技术第一方面所述的嵌合抗原受体、本专利技术第二方面所述的核酸分子、本专利技术第三方面所述的载体、或本专利技术第四方面所述的宿主细
胞、或本专利技术第六方面所述的制剂的用途，用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。
[0067]在另一优选例中，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域(即，scFv)包括SEQ ID NO:1或3所示的抗体重链可变区，和SEQ ID NO:2或4所示的抗体轻链可变区。2.如权利要求1所述的CAR，其特征在于，所述的抗原结合结构域的结构如下式I或II所示：V
L-V
H
ꢀꢀ
(I)；V
H-V
L
ꢀꢀ
(II)其中，V
H
为抗体重链可变区；V
L
为抗体轻链可变区；
“-”
为连接肽或肽键；较佳地，所述的抗原结合结构域的结构如式I所示。3.如权利要求2所述的CAR，其特征在于，所述V
L
的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，V
H
的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。4.如权利要求2所述的CAR，其特征在于，所述V
L
的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，V
H
的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。5.如权利要求1所述的CAR，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式III所...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚意弘，朱琳，李延峰，魏雨恬，姚昕，朱恃贵，黄家琪，张丽，刘必佐，
申请(专利权)人：无锡赛比曼生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：