靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途制造技术

本发明专利技术公开了靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途，所述嵌合抗原受体包含B7H3抗原结合结构域、跨膜结构域、细胞内信号结构域以及IL

【技术实现步骤摘要】
靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途


[0001]本专利技术属于免疫学与分子生物学
，具体地，涉及一种靶向B7H3的嵌合抗原受体，其包含B7H3抗原结合结构域、跨膜结构域、细胞内信号结构域以及IL
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15，更具体地，涉及靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途。

技术介绍

[0002]肿瘤细胞免疫治疗(Tumor cell immunotherapy)是继手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术，是一种运用生物技术和生物制剂分离体外激活并回输患者自身或同种异体的肿瘤特异性或非特异性杀伤细胞的新型治疗方法。肿瘤的传统疗法包括手术、化疗和放疗都具有局限性：手术常因癌细胞浸润到邻近或转移到远端组织而不能根除；化疗、放疗则受限于对体内其他正常组织的毒性及伤害。近年来流行的靶向疗法可在细胞分子水平上针对已经明确的致癌位点来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点相结合并发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，但是分子靶向药物只能对特定基因突变型肿瘤产生作用，若靶点肿瘤基因突变就会产生药物耐受性，导致疗效下降，甚至发生严重的不良反应等问题。肿瘤细胞免疫治疗不同于传统的疗法，正常人体的免疫系统能够识别和清除肿瘤细胞，但癌症病人特别是晚期癌症病人往往伴有免疫系统受损，从而失去了清除肿瘤细胞的能力，在这种情况下，可以通过激发和增强机体的免疫功能，达到控制和杀伤肿瘤细胞的目的，这种治疗方法就是肿瘤细胞免疫治疗。
[0003]在肿瘤细胞免疫治疗中，嵌合抗原受体修饰T细胞(Chimeric antigen receptor modification T cells，CAR
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T)和嵌合抗原受体修饰NK细胞(Chimeric antigen receptor modification NK cells，CAR
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NK)免疫疗法是目前研究进展最迅速两种疗法，其原理在于经嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞或NK细胞，可以特异性地识别肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原，使效应T细胞或NK细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的免疫细胞高，并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境并打破宿主免疫耐受状态。同为免疫细胞的自然杀伤T细胞(Natural killer T cell，NKT)不同于传统的T细胞或NK细胞，而是一种具有先天性免疫应答功能的特殊T细胞，兼具NK细胞功能和T细胞特点，其分为I型NKT细胞、II型NKT细胞和III型NKT细胞，其中，I型NKT细胞又称恒定自然杀伤T细胞(Invariant nature killer T cell，iNKT)，是目前研究最为广泛也是最深入的一类NKT细胞，大量的研究表明，iNKT细胞有较好的抗肿瘤效果，在肿瘤免疫治疗中具有巨大的潜在应用价值。
[0004]B7H3(CD276)属于B7超家族，是一种跨膜糖蛋白，其胞外区结构分为2种，一种是单价的2Ig
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B7
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H3，一种是由2个重复单元结构组成的双价的4Ig
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B7
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H3。相关研究表明B7H3通过与一种结构未知的受体作用，能够抑制T细胞增殖及细胞因子释放(Suh W K,Gajewska B U,Okada H,et al.The B7 family member B7
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H3 preferentially down
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regulates T helper type 1
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mediated immune responses[J].Nature immunology,2003,4(9):899
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906.)，虽然B7H3的受体未知，但是近年来关于B7H3与受体作用在肿瘤免疫中的负调控的报
道越来越多，肿瘤细胞表达B7H3，使其规避CD8+T细胞的免疫监视，相关研究表明了B7H3基因敲除的小鼠或使用抗B7H3的抗体均能显著抑制肿瘤的生长，这种抑制作用依赖于CD8+T和NK细胞的功能(Lee Y,Martin
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Orozco N,Zheng P,et al.Inhibition of the B7
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H3 immune checkpoint limits tumor growth by enhancing cytotoxic lymphocyte function[J].Cell research,2017,27(8):1034
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1045.)，以上研究均表明了B7H3可作为肿瘤免疫治疗的有效治疗靶标。
[0005]鉴于此，本专利技术基于B7H3在肿瘤细胞中的高表达特性及其对免疫细胞的抑制活性特点，提供了一种靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体及其iNKT细胞，在肿瘤细胞免疫治疗领域具有重要的应用前景。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于一种靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体、iNKT细胞及其用途。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一方面提供了一种靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体。
[0009]进一步，所述嵌合抗原受体包括与B7H3特异性结合抗体scFv；
[0010]优选地，所述嵌合抗原受体还包括跨膜结构域、胞内信号传导结构域；
[0011]优选地，所述嵌合抗原受体还包括铰链区；
[0012]优选地，所述嵌合抗原受体还包括共刺激信号结构域；
[0013]优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽；
[0014]优选地，所述嵌合抗原受体还包括自裂解肽；
[0015]优选地，所述嵌合抗原受体还包括免疫调节分子或细胞因子；
[0016]更优选地，所述scFv的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列、与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；
[0017]最优选地，所述scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
[0018]更优选地，所述跨膜结构域和铰链区包括下列分子的跨膜结构域和铰链区：CD8α，CD28，IgG1、IgG4、4
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1BB，PD
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1、CD34、OX40，CD3ε；
[0019]最优选地，所述跨膜结构域和铰链区为CD8α跨膜结构域和CD8α铰链区；
[0020]最优选地，所述CD8α跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
[0021]最优选地，所述CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
[0022]更优选地，所述胞内信号传导结构域包括下列分子的胞内信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括与B7H3特异性结合抗体scFv；优选地，所述嵌合抗原受体还包括跨膜结构域、胞内信号传导结构域；优选地，所述嵌合抗原受体还包括铰链区；优选地，所述嵌合抗原受体还包括共刺激信号结构域；优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽；优选地，所述嵌合抗原受体还包括自裂解肽；优选地，所述嵌合抗原受体还包括免疫调节分子或细胞因子；更优选地，所述scFv的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列、与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；最优选地，所述scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；更优选地，所述跨膜结构域和铰链区包括下列分子的跨膜结构域和铰链区：CD8α，CD28，IgG1、IgG4、4
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1BB，PD
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1、CD34、OX40，CD3ε；最优选地，所述跨膜结构域和铰链区为CD8α跨膜结构域和CD8α铰链区；最优选地，所述CD8α跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；最优选地，所述CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；更优选地，所述胞内信号传导结构域包括下列分子的胞内信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD21、CD22、CD79a、CD79b、CD278、FcεRI、DAP10、DAP12、CD66d、DAP10、DAP12、FYN；最优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3ζ胞内信号传导结构域；最优选地，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；更优选地，所述共刺激信号结构域包括下列分子的共刺激信号结构域：CD28、ICOS、CD27、CD19、CD4、CD8α、CD8β、HVEM、LIGHT、CD40、4
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1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、CD2、CD226、CD278；最优选地，所述共刺激信号结构域为CD28共刺激信号结构域；最优选地，所述CD28共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；更优选地，所述信号肽包括下列分子的信号肽：T细胞受体的α链及β链、CD3ζ、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD9、CD28、CD16、CD22、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、GITR、ICOS、IgG6；最优选地，所述信号肽为IgG6信号肽；最优选地，所述IgG6信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；更优选地，所述自裂解肽为T2A；最优选地，所述T2A的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；更优选地，所述免疫调节分子或细胞因子包括：B7.1、CCL19、CCL21、CD40L、CD137L、GITRL、GM
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CSF、IL
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12、IL
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2、IL
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15、IL
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18、IL
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21、LEC、OX40L；最优选地，所述免疫调节分子或细胞因子为IL
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15；最优选地，所述IL
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15的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；最优选地，所述嵌合抗原受体选自以下组中的任一种：
(1)含有依次连接的IgG6信号肽、scFv、CD8α铰链区、CD8α跨膜结构域、CD28共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域、T2A、IL
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15的融合蛋白；(2)在(1)中的融合蛋白的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸后形成的衍生融合蛋白；最优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列为含依次连接的靶向B7H3的嵌合抗原受体的编码序列、或其互补序列；优选地，所述靶向B7H3的嵌合抗原受体的编码序列包含依次连接的IgG6信号肽的编码序列、scFv的编码序列、CD8α铰链区的编码序列、CD8α跨膜结构域的编码序列、CD28共刺激信号结构域的编码序列、CD3ζ胞内信号传导结构域的编码序列、T2A的编码序列、IL
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15的编码序列；优选地，所述IgG6信号肽的编码序列如SEQ ID NO:10所示；优选地，所述scFv的编码序列如SEQ ID NO:11所示；优选地，所述CD8α铰链区的编码序列如SEQ ID NO:12所示；优选地，所述CD8α跨膜结构域的编码序列如SEQ ID NO:13所示；优选地，所述CD28共刺激信号结构域的编码序列如SEQ ID NO:14所示；优选地，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的编码序列如SEQ ID NO:15所示；优选地，所述T2A的编码序列如SEQ ID NO:16所示；优选地，所述IL
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15的编码序列如SEQ ID NO:17所示；优选地，所述靶向B7H3的嵌合抗原受体的编码序列如SEQ ID NO:18所示。3.一种含有权利要求2所述多核苷酸的载体，其特征在于，所述载体包括克隆载体、表达载体；优选地，所述载体包括DNA载体、RNA载体、质粒、病毒来源的载体；更优...

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧忠，郑骏年，王刚，刘宜林，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：