【技术实现步骤摘要】
一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法
[0001]本专利技术涉及一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，属于病毒检测
技术介绍
[0002]呼吸道感染是临床常见的疾病之一，主要病原体包括细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等，其中超过90％是由呼吸道病毒感染引起，急性呼吸道感染是儿童最主要的威胁之一，多发于儿童、老年人及免疫功能低下者，常见的有甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、鼻病毒、副流感病毒等，多数具有很强的感染力而且传播快、潜伏期短、发病急、临床表现相似，患者均表现为发热和上呼吸道感染症状，单从临床表现很难区分感染病原体。
[0003]目前常用的检测方法如下：病毒常规培养、血清学检验、抗原抗体检测及分子生物学方法(荧光聚合酶链式反应法及基因芯片法)；大多数病毒的检测采用病毒培养和血清学检测，前者通常被认为是诊断的“金标准”，但因细胞分离对培养技术的要求高，耗时长，不利于早期诊断。
[0004]血清学检测法虽方便易行，其检测双份血清需要间隔较长时间，检测结果不能及时...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，包括以下检测步骤：(1)样本前处理；(2)核酸提取；(3)多重PCR加样及扩增；(4)膜芯片杂交；(5)出具检测结果报告。2.根据权利要求1所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：通过多重PCR与反向斑点杂交技术的结合，同时检测6种常见呼吸道病毒，并以GAPDH作为内对照监控核酸提取和PCR扩增过程，PC和NC作为芯片杂交质控监控杂交过程。3.根据权利要求2所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述常见呼吸道病毒包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和副流感病毒；其中，甲型流感病毒的正向引物序列如SEQ ID No.1所示、反向引物序列如SEQ ID No.2所示；探针序列如SEQ ID No.3所示；乙型流感病毒的正向引物序列如SEQ ID No.4所示、反向引物序列如SEQ ID No.5所示；探针序列如SEQ ID No.6所示；呼吸道合胞病毒的正向引物序列如SEQ ID No.7所示、反向引物序列如SEQ ID No.8所示；探针序列如SEQ ID No.9所示；腺病毒的正向引物序列如SEQ ID No.10所示、反向引物序列如SEQ ID No.11所示；探针序列如SEQ ID No.12所示；鼻病毒的正向引物序列如SEQ ID No.13所示、反向引物序列如SEQ ID No.14所示；探针序列如SEQ ID No.15所示；副流感病毒的正向引物序列如SEQ ID No.16所示、反向引物序列如SEQ ID No.17所示；探针序列如SEQ ID No.18所示。4.根据权利要求3所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述样本前处理具体为：取鼻/咽分泌物拭子于含样本保存液的保存管中，涡旋震荡后，将所有溶液转移至离心管中12000rpm离心5min后，弃上清。5.根据权利要求4所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述核酸提取具体为：向离心管中加入核酸提取液和蛋白酶K并涡旋震荡15s后，放入56℃恒温金属浴中加热10
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15min，再调节温度至95℃加热2min，然后12000rpm离心5min，取上清液用作参与PCR反应的核酸溶液。6.根据权利要求5所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述多重PCR加样及扩增具体为：在离心管中加入PCR扩增体系组分，充分混合后得到成多重呼吸道病毒PCR Mix，然后在PCR管中加入所述多重呼吸道病毒PCR Mix、核酸溶液和双蒸水，配制成PCR扩增溶液，最后将PCR扩增溶液按指定扩增程序进行扩增，得到PCR扩增产物。7.根据权利要求6所述的一种基于基因膜芯片的多种呼吸道病毒检测方法，其特征在于，所述膜芯片杂交具体为：步骤
①
，将所述PCR扩增产物加入含杂交液的膜芯片中，45℃加
热30min；步骤
②
技术研发人员：周航，李文静，郎小亮，黄盈，黄广平，
申请(专利权)人：四川华汉三创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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