一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法技术

本发明专利技术涉及一种抗凝血活性测定方法，尤其为一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至

【技术实现步骤摘要】
一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法


[0001]本专利技术涉及一种抗凝血活性测定方法，尤其是一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血 活性测定方法。

技术介绍

[0002]抗凝血剂在临床上用于抗凝治疗脑血管内凝血综合征、深度静脉栓塞以及预防心肺系统 凝血的发生等,也是活血化淤药物的重要组成部分。在体外,抗凝剂用于生物相容性医用材料 领域和血管美容化妆品领域；是值得广泛开发的多功能产品。目前,临床上常用的抗凝剂是 肝素,不同来源的肝素存在着结构和活性不稳定、易于携带多种危害人体健康的动物致病菌 等不足。因此,开发安全、稳定的肝素替代品正引起广泛关注。葡聚糖经硫酸酯化修饰能够 得到的半合成硫酸酯多糖,研究发现半合成硫酸酯多糖在体外具有突出的抗凝血作用，鉴于 此，本专利技术提出一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的一个目的是通过提出一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法， 以解决上述
技术介绍
中提出的缺陷。
[0004]本专利技术采用的技术方案如下：一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法， 包括如下步骤：
[0005]量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至
‑
5～
‑
8℃， 缓慢加入200目的酵母葡聚糖粉末5
‑
7g；
[0006]反应6
‑
8min后，反应体系用NaOH中和，离心，蒸馏水透析18/>‑
24h，减压浓缩至20
‑
22mL， 加入体积分数95％乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析18
‑
24h，透 析液经冷冻干燥后得葡聚糖硫酸酯；
[0007]采用截留分子量分别为4K和10K的聚醚砜膜对葡聚糖硫酸酯进行二级超滤分级,得到3 个级分；
[0008]以毛细管黏度计测试样品的特性粘度；
[0009]采用SD大鼠给药20
‑
60min后,以复方噻胺酮(10ml/kg)肌肉注射麻醉,从心脏取血于塑 料试管中,1
‑
2min后每隔10s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动时间,即为CT；
[0010]大鼠腹腔动脉采血,加入预先盛有0.1ml3.8％枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待 测样品,37
‑
38℃水浴中孵育1min,每支试管中再加入0.1ml0.01mol/L的CaCl2,混匀后开始计 时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT；
[0011]通过CT值和RT值判断3个级分对抗凝血活性的影响。
[0012]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述浓硫酸与正丁醇的比例为1∶7
‑
9。
[0013]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述二级超滤分级分为第一级超滤膜分级和第
二级超 滤膜分级。
[0014]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述第一级超滤膜分级采用截留分子量为10K的聚醚 砜膜将葡聚糖硫酸酯分为10K以上和10K以下两个级分。
[0015]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述第二级超滤分级采用截留分子量为4K的聚醚砜 膜得到4
‑
10K和4K以下两个级分。
[0016]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述毛细管黏度计长度为140
±
5mm内径为0.5
±ꢀ
0.05mm测定球的容积为3.5
±
0.5ml。
[0017]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述以毛细管黏度计测试样品的特性粘度方法如下： 称取干燥的样品，用蒸馏水配制成溶液用毛细管黏度计在20
‑
30℃下分别测定相同容积样品 和蒸馏水流出时间计算出相对粘度η，并通过多点稀释倒推的方法计算样品的特性粘度。
[0018]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述多点稀释倒推的方法为：将多个不同浓度的样品 相对粘度η与浓度绘制成曲线图，通过曲线图平缓点分析出样品的特性粘度。
[0019]作为本专利技术的一种优选技术方案：所述SD大鼠的实验数量为160
‑
190只，雌雄数量各 半。
[0020]本专利技术采用了葡聚糖的磺化反应提取纯度极高的葡聚糖硫酸酯，并采用超滤分级方法对 葡聚糖硫酸酯的浓度进行划分，再以大鼠为样本，成功测得其在不同的酵母葡聚糖粉末参与 制备情况下以及不同的冰浴冷却温度下，制得的葡聚糖硫酸酯的凝血时间和全血复钙时间， 使得在同样的提取技术下能够提取凝血效果更好地葡聚糖硫酸酯。
具体实施方式
[0021]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合， 下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是 本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员 在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]实施例1
[0023]本专利技术优选实施例提供了一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，包括 如下步骤：
[0024]量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至
‑
5℃， 缓慢加入200目的酵母葡聚糖粉末5g；
[0025]反应6min后，反应体系用NaOH中和，离心，蒸馏水透析24h，减压浓缩至20mL，加 入体积分数95％乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析24h，透析液 经冷冻干燥后得葡聚糖硫酸酯；
[0026]采用截留分子量分别为4K和10K的聚醚砜膜对葡聚糖硫酸酯进行二级超滤分级,得到3 个级分；
[0027]以毛细管黏度计测试样品的特性粘度；
[0028]采用SD大鼠给药20min后,以复方噻胺酮(10ml/kg)肌肉注射麻醉,从心脏取血于塑料试 管中,2min后每隔10s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动时间,即为CT；
[0029]大鼠腹腔动脉采血,加入预先盛有0.1ml3.8％枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待 测样品,37℃水浴中孵育1min,每支试管中再加入0.1ml0.01mol/L的CaCl2,混匀后开始计时, 记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT；
[0030]通过CT值和RT值判断3个级分对抗凝血活性的影响。
[0031]本实施例中所述浓硫酸与正丁醇的比例为1∶7。
[0032]本实施例中所述二级超滤分级分为第一级超滤膜分级和第二级超滤膜分级。
[0033]本实施例中所述第一级超滤膜分级采用截留分子量为10K的聚醚砜膜将葡聚糖硫酸酯 分为10K以上和10K以下两个级分。
[0034]本实施例中所述第二级超滤分级采用截留分子量为4K的聚醚砜膜得到4
‑
10K和4K以下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，包括如下步骤：量取浓硫酸、正丁醇，置于带干燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至
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5~
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8℃，缓慢加入200目的酵母葡聚糖粉末5
‑
7g；反应6
‑
8min后，反应体系用NaOH中和，离心，蒸馏水透析18
‑
24h，减压浓缩至20
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22mL，加入体积分数95％乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析18
‑
24h，透析液经冷冻干燥后得葡聚糖硫酸酯；采用截留分子量分别为4K和10K的聚醚砜膜对葡聚糖硫酸酯进行二级超滤分级,得到3个级分；以毛细管黏度计测试样品的特性粘度；采用SD大鼠给药20
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60min后,以复方噻胺酮(10ml/kg)肌肉注射麻醉,从心脏取血于塑料试管中,1
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2min后每隔10s缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动时间,即为CT；大鼠腹腔动脉采血,加入预先盛有0.1ml3.8%枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待测样品,37
‑
38℃水浴中孵育1min,每支试管中再加入0.1ml0.01mol/L的CaCl2,混匀后开始计时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT；通过CT值和RT值判断3个级分对抗凝血活性的影响。2.根据权利要求1所述的葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性测定方法，其特征在于：所述浓硫酸与正丁醇的比例为1∶7
‑
9。3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟军，毛伟权，杨丽倩，欧淑君，
申请(专利权)人：汉邦环宇多糖生物科技河源有限公司，
类型：发明
国别省市：