表达CAR和shRNA的逆转录病毒载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种表达CAR和shRNA的逆转录病毒载体，该病毒载体中靶向LSD1的shRNA与CAR共表达。本发明专利技术中将LSD1shRNA与anti

【技术实现步骤摘要】
表达CAR和shRNA的逆转录病毒载体及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗
，特别涉及一种表达的嵌合抗原受体(CAR)和shRNA逆转录病毒载体及其应用。

技术介绍

[0002]短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)属于RNA干扰(RNA interference，RNAi)范畴，转导或转染细胞后，在细胞核中合成前体shRNA，其正义链和反义链通过碱基配对形成茎区，中间未配对的核苷酸形成环状，整个结构成发夹结构。经过核糖核酸酶IIIDrosha及DGCR8加工后，被Exportin
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5蛋白转运到细胞质中，然后经核糖核酸酶IIIDicer及TRBP/PACT酶切，去除环状结构的序列，形成siRNA。siRNA与RISC识别并整合后，发生解旋并去掉双链中一条RNA链，然后通过碱基互补序列识别和占据靶mRNA，导致其降解。shRNA可以通过转导的方式稳定表达，特异性靶向抑制目标mRNA的表达，在治疗、诊断及科学研究中具有广泛的应用。目前已有通过慢病毒载体转导的方式，将特异性靶向免疫检查点受体的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达CAR和shRNA的逆转录病毒载体，其特征在于，该病毒载体中靶向LSD1的shRNA与CAR共表达。2.根据权利要求1所述的逆转录病毒载体，其特征在于，该病毒载体中U6启动子和EF1α启动子分别整合到CAR表达载体中，代替长末端重复序列来驱动表达，由U6启动子驱动LSD1 shRNA的表达EF1α启动子驱动抗CAR的表达，所述抗CAR优选是抗CD19CAR和/或CD38 CAR。3.根据权利要求1所述的逆转录病毒载体，其特征在于，所述逆转录病毒载体中包括依次串联的U6启动子、LSD1 shRNA、EF1α启动子、上游的信号肽和用于检测的myc标签；CD19 CAR抗原结合区域；CD8铰链
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跨膜结构域；CD28或4
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1BB协同激活结构域和CD3ζ胞内信号传导结构域。4.根据权利要求1所述的逆转录病毒载体，其特征在于，靶向LSD1的shRNA的克隆ID是TRCN0000046068，克隆名称是NM_015013.1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王建勋，张静，朱晶晶，冯娅茹，李晓瑞，尚凤琴，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：