白藜芦醇调控转基因表达的控制系统及其构建和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种由植物天然活性成分白藜芦醇(RES)调控转基因表达的控制系统及其构建方法，所述系统可以精准调控外源基因的表达或关闭，即白藜芦醇调控外源基因表达的抑制系统和诱导系统。本发明专利技术还公开了该抑制系统和诱导系统用于精确调控嵌合抗原受体(CAR)的表达，实现在体外及体内调控工程化T细胞识别并杀伤肿瘤细胞的功能，并调控细胞因子的释放，提高CAR

【技术实现步骤摘要】
白藜芦醇调控转基因表达的控制系统及其构建和应用


[0001]本专利技术涉及合成生物学，基因治疗、过继性细胞免疫治疗领域，具体涉及白藜芦醇调控转基因表达的控制系统及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]合成生物学是以工程学理论思路为指导，将不同生物的功能元件进行有效设计、优化及组装，对细胞进行定向改造，使其具有某些特定的功能以满足特定需求。经过近几十年的快速发展，已经设计出多种基因环路并应用于能源、环境、医药开发及疾病治疗等多个领域(Courbet et al.,2016；Lienert et al.,2014)。
[0003]恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一，肿瘤的预防及治疗研究也是全世界范围内的研究热点。现传统治疗肿瘤的方法包括手术、化学疗法及放射性疗法，但这些方法都有一些缺陷，难以完全治愈，同时也会影响正常细胞，产生很大的副作用。现逐渐发展起来的免疫疗法给肿瘤治疗带来了很大的希望，其中针对血液瘤的嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法已经上市且有多个成功治愈的案例，给肿瘤治疗带来了曙光——CAR
‑r/>T疗法(Mau本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述系统包括白藜芦醇调控转基因表达的抑制系统RES
OFF
，和/或白藜芦醇调控转基因表达的诱导系统RES
ON
。2.如权利要求1所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述白藜芦醇调控转基因表达的抑制系统RES
OFF
包括重组转录激活子、白藜芦醇诱导型弱启动子和待转录序列。3.如权利要求2所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述重组转录激活子由具有转录激活功能的激活蛋白融合至DNA结合蛋白TtgR上获得；其中，所述具有转录激活功能的激活蛋白包括单纯疱疹病毒颗粒蛋白VP16转录激活结构域、VP16的4拷贝转录激活结构域VP64、NF
‑
KBp65亚基转录激活结构域、Rta人类疱疹病毒转录激活域、和/或热休克转录因子HSF1转录激活域；所述DNA结合蛋白TtgR包括来源于白藜芦醇操纵子系统的阻遏蛋白TtgR及其突变蛋白；所述TtgR蛋白及其突变蛋白序列选自序列SEQ ID NO.1
‑
6。4.如权利要求2所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述白藜芦醇诱导型弱启动子由TtgR蛋白特异结合的DNA序列和弱启动子组成，所述白藜芦醇诱导型弱启动子的序列选自序列SEQ ID NO.26
‑
30；所述白藜芦醇诱导型弱启动子根据蛋白结合序列O
TtgR
的不同拷贝数组成不同类型的融合启动子。5.如权利要求1所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述诱导系统RES
ON
包括重组转录抑制子、白藜芦醇诱导型强启动子和待转录序列。6.如权利要求5所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述重组转录抑制子包括由转录抑制蛋白KRAB融合至DNA结合蛋白TtgR上获得的重组转录抑制子TtgR
‑
KRAB；所述TtgR蛋白及其突变蛋白序列选自序列SEQ ID NO.1
‑
6。7.如权利要求5所述的白藜芦醇调控转基因表达的控制系统，其特征在于，所述白藜芦醇诱导型强启动子由强启动子和TtgR蛋白特异结合的DNA序列组成，所述白藜芦醇诱导型强启动子的序列选自序列SEQ ID NO.13
‑
24；所述TtgR蛋白特异结合的DNA序列来源于白藜芦醇操纵子系统的操纵序列O
TtgR
及其相关突变序列；所述O
TtgR
及其突变序列选自序列SEQ ID NO.7
‑
12；所述白藜芦醇操纵...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶海峰，杨林凤，尹剑丽，吴嘉丽，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：