一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒及其制备方法和应用，具体为水热法制备的PEG

【技术实现步骤摘要】
一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于纳米生物医药材料领域，涉及一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒的制备方法及其产品和应用。

技术介绍

[0002]癌症是威胁人类生命的一种重大疾病，常规化疗放疗和手术治疗效果有限，且副作用较高，应癌症市场要求急需新技术的开发。靶向磁纳米颗粒是当前一项研究重点，磁性Fe3O4具有独特的磁性质和导热能力，有良好的生物相容性，在癌症治疗中得到广泛关注，可以以少量红外光能量就激发出大量热量，是光热疗法的好材料，且其磁性能有利于赋予癌细胞磁响应性，便于磁场控制。Fe3O4的缺点在于磁效应令该粒子容易团聚沉淀，过大的粒子不利于人体代谢，容易累积在肝脏、肾脏、淋巴结处，造成人体不能容忍的副作用。虽然目前现在技术在磁纳米颗粒制备过程中，通过Fe3O4的表面修饰，可以增强其悬浮性，但是为了达到减小粒子粒径的目的常采用毒性较大的表面活性剂如十二烷基苯磺酸钠，有机溶剂四氢呋喃、DMSO等，且常常无法避开免疫细胞的识别吞噬，虽然制成的粒子生物效应优异，但也存在毒性隐患和被免疫细胞吞噬的风险。计较表面活性剂与有机溶剂使得选择范围减小，错选的风险增大，曾使用过的毒性较低的壳聚糖和海藻酸钠为表面活性剂皆以失败告终。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的不足，本专利技术首要目的在于：提供一款制备简易低毒性的且具有免疫逃避性的靶向纳米粒子制备方法。具体为水热法制备的PEG
‑
Fe3O4用经靶向修饰的红细胞膜碎片挤出包裹，因红细胞膜的隔离作用，制备出有免疫逃避性和灵敏磁响应性的纳米颗粒，由于叶酸靶向分子易得，对叶酸敏感的癌细胞较多，将粒子制成能靶向吸附对叶酸敏感的癌细胞，方便其被磁场控制或通过光热刺激杀灭癌细胞，能有效减小粒子粒径除了水热法，还使用了PEG6000
‑
10000混合油酸钠制成的分散剂，成功将粒子减低至80nm，红细胞膜起到去除分散剂后稳定粒径的作用，整个制备过程有效避开了毒性大的表面活性剂和有机溶剂。
[0004]一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0005](1)PEG
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Fe3O4的制备；
[0006](2)红细胞膜碎片的提取和靶向修饰；
[0007](3)红细胞膜
‑
PEG
‑
Fe3O4的制备：将PEG
‑
Fe3O4加入由PEG6000
‑
10000与油酸钠加入超纯水配成的分散液，超声，静置，去沉淀取上层悬浮液，步骤(2)获得的靶向修饰的红细胞膜与上层悬浮液共混搅拌，再放入脂质体挤出器，经多次挤出获得。
[0008]进一步地，步骤(3)将PEG6000
‑
10000(优选PEG6000)与油酸钠的质量比为1:2
‑
2：1，优选1：1，加入超纯水配成6
‑
8％分散液，优选6％分散液。PEG
‑
Fe3O4在分散液中的浓度为100
‑
300μg/mL；优选150
‑
250μg/mL，进一步优选200μg/mL。
[0009]进一步地，步骤(3)超声细胞破碎仪的功率600
‑
1000W，优选800W，频率15
‑
25kHz，
优选20kHz。超声30min
‑
40min。
[0010]进一步地，步骤(3)超声后至少静置12h，去沉淀。
[0011]进一步地，步骤(3)中将步骤(2)获得的靶向修饰的红细胞膜与上层悬浮液共混搅拌，加热至38
‑
45℃，优选40℃，再进行挤出。
[0012]进一步地，步骤(3)中每毫升PEG
‑
Fe3O4与靶向修饰的红细胞膜的混合溶液中两者比例150
‑
250μg:3mg，用脂质体挤出器从800nm、400nm相继挤出，40
‑
45℃在200nm膜下挤出3
‑
7次。优选：每毫升PEG
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Fe3O4与靶向修饰的红细胞膜的混合溶液中两者比例180
‑
230μg:3mg，再在40℃，用脂质体挤出器从800nm、400nm相继挤出，在200nm膜下挤出7次。
[0013]步骤(3)的膜优选Whatman聚碳酸酯膜。
[0014]步骤(1)PEG
‑
Fe3O4的制备的具体过程：FeCl2与FeCl3以1：1.5
‑
1：2摩尔比例加入蒸馏水，再加入FeCl2质量2
‑
4倍的PEG6000
‑
10000，超声5
‑
10min(超声细胞破碎仪的功率600
‑
1000W，频率15
‑
25kHz)至溶解；置于惰性气氛下以1400
‑
2600r/min搅拌，升温至45
‑
60℃，反应30
‑
40min；再追加FeCl2质量2
‑
4倍的PEG6000
‑
10000溶液，将反应液转移至聚四氟乙烯反应釜，设置温度为160
‑
200℃，反应5
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10小时；得到Fe3O4纳米颗粒沉淀，先用纯水和乙醇洗涤沉淀，重复多次，真空烘箱中45
‑
60℃干燥10
‑
24小时，最终获得PEG
‑
Fe3O4纳米颗粒。
[0015]优选：步骤(1)PEG
‑
Fe3O4的制备的具体过程：FeCl2与FeCl3以1：2摩尔比例加入蒸馏水，再加入FeCl2质量3倍的PEG6000，超声10min(超声细胞破碎仪的功率800W，频率20kHz)至溶解；置于氮气气氛下以2600r/min搅拌，升温至60℃，反应30min；再追加FeCl2质量3倍的PEG6000溶液，将反应液转移至聚四氟乙烯反应釜，设置温度为160℃，升温1小时，反应5小时；得到Fe3O4纳米颗粒沉淀，先用纯水和乙醇洗涤沉淀，重复多次，真空烘箱中60℃干燥10小时，最终获得PEG
‑
Fe3O4纳米颗粒。
[0016]步骤(2)红细胞膜碎片的提取和靶向修饰过程：将抗凝哺乳动物血离心沉淀红细胞去上清，用冰PBS洗涤，再用低渗溶液浸泡破碎剩下的红细胞，离心,留沉淀去上清，冰PBS洗涤沉淀，反复多次，直到沉淀变成淡粉色或白色，红细胞膜和牛黄胆酸钠溶液按照牛黄胆酸钠：红细胞膜＝1：6
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1:4质量比混合，溶入4
‑
6倍体积乙醇，超声混匀后装入注射器，迅速注入40℃
‑
50℃8
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12倍乙醇溶液体积的PBS溶液,50
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70℃旋蒸20
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30min去除乙醇；
[0017]靶向修饰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红细胞膜包裹的磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)PEG
‑
Fe3O4的制备；(2)红细胞膜碎片的提取和靶向修饰；(3)红细胞膜
‑
PEG
‑
Fe3O4的制备：将PEG
‑
Fe3O4加入由PEG6000
‑
10000与油酸钠加入超纯水配成的分散液，超声，静置，去沉淀取上层悬浮液，步骤(2)获得的靶向修饰的红细胞膜与上层悬浮液共混搅拌，再放入脂质体挤出器，经多次挤出获得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)将PEG6000
‑
10000与油酸钠的质量比为1:2
‑
2：1，优选1：1，加入超纯水配成6
‑
8％分散液，优选6％分散液；PEG
‑
Fe3O4在分散液中的浓度为100
‑
300μg/mL。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)超声细胞破碎仪的功率600
‑
1000W，优选800W，频率15
‑
25kHz，优选20kHz。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中将步骤(2)获得的靶向修饰的红细胞膜与上层悬浮液共混搅拌，加热至38
‑
45℃，优选40℃，再进行挤出。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中每毫升PEG
‑
Fe3O4与靶向修饰的红细胞膜的混合溶液中两者比例150
‑
250μg:3mg。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中用脂质体挤出器从800nm、400nm相继挤出，40
‑
45℃在200nm膜下挤出3
‑
7次。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)PEG
‑
Fe3O4的制备的具体过程：FeCl2与FeCl3以1：1.5
‑
1：2摩尔比例加入蒸馏水，再加入FeCl2质量2
‑
4倍的PEG6000
‑
10000，超声5
‑
10min至溶解，超声细胞破碎仪的功率600
‑
1000W，频...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭逸舟，段金娣，杨艳婧，钟世安，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：