一种采用高效液相色谱法测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法技术

本发明专利技术提供一种采用高效液相色谱法测定L

【技术实现步骤摘要】
一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法


[0001]本专利技术涉及药物的检测方法，具体涉及一种测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的高效液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐(参见图1左)作为一种重要的起始原料，被广泛用于药物的合成，比如富马酸丙酚替诺福韦(TAF)(参见图1右)等。L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中的L
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐和L
‑
丙氨酸乙酯盐酸盐可以引起TAF杂质，需要严格控制其有关物质的含量。
[0003]近年来，对原料药的有关物质控制要求越来越严格，不只是限度的要求，而是要求准确测定其含量。目前，L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质尚无药典标准，文献中尚未报道L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质测定方法。因此建立一种能准确测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的液相色谱方法是很有必要的。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于:采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐，采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；有关物质包括杂质L
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐、L
‑
丙氨酸乙酯盐酸盐；以庚烷磺酸钠为离子对试剂。
[0005]进一步，以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以缓冲盐溶液
‑
乙腈为流动相。
[0006]进一步，所述流动相中缓冲盐溶液的溶质为磷酸二氢钾和庚烷磺酸钠，溶剂为纯化水。
[0007]进一步，缓冲盐溶液中，磷酸二氢钾浓度为10mmol/L，庚烷磺酸钠浓度为20mmol/L。
[0008]进一步，缓冲盐溶液中，pH＝4.0。
[0009]进一步，缓冲盐溶液与乙腈的体积比为70：30～80：20，优选为75：25
[0010]进一步，检测波长为205
±
2nm。
[0011]进一步，流速为0.9mL/min～1.1mL/min，优选为1.0mL/min。
[0012]进一步，进样量为5μL～20μL，优选为5μL。
[0013]进一步，柱温为25℃～35℃。
[0014]本专利技术的优选色谱条件为：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以缓冲盐
‑
乙腈(75：25)为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为205nm；进样量为5μl。
[0015]样品溶液的制备：
[0016]稀释剂：25％乙腈水溶液
[0017]供试品溶液：取本品约50mg，置5ml量瓶中，加稀释剂适量使溶解并稀释至刻度，摇
匀，即得。
[0018]对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0019]测定方法
[0020]精密量取系统适用性溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。主峰信噪比必不应低于30，再精密量取供试品溶液和对照溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0021]计算方法以及接受限度
[0022]供试品溶液中如有与L
‑
丙氨酸甲酯(相对保留时间约为0.65)、L
‑
丙氨酸乙酯(相对保留时间约为0.77)相对保留时间一致的峰，其峰面积均不得大于对照溶液主峰面积(0.1％)，其他单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的10倍(1.0％)。供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积的0.3倍的杂质峰可忽略不计。
[0023]在一般条件下，L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐在一般色谱柱上基本无保留，很难进行分离测定，采用离子对色谱方法，可增强此类化合物的保留；使其可以有效分离。
[0024]本专利技术所述的高效液相色谱分析方法，以庚烷磺酸钠为离子对试剂，实现了L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质(L
‑
丙氨酸甲酯、L
‑
丙氨酸乙酯)在色谱柱上的分离，并准确定量，控制了L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的有关物质。
[0025]在本专利技术的分析方法中，L
‑
丙氨酸异丙酯保留时间约为5.656min，L
‑
丙氨酸甲酯保留时间3.593min，L
‑
丙氨酸乙酯保留时间4.285min，分离度大于3.0，分析所需时间短，峰形对称性好。本专利技术方法的回收率高，平均回收率为90.0％和107.4％，且灵敏度高，检测限达0.5μg/ml。且溶液稳定性达到48h。采用本专利技术的方法能快速分离检测L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的有关物质，并能准确测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中杂质(L
‑
丙氨酸甲酯、L
‑
丙氨酸乙酯)的含量。
附图说明
[0026]图1为L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐和富马酸丙酚替诺福韦(TAF)。
[0027]图2为100％供试品溶液的液相色谱图，L
‑
丙氨酸异丙酯保留时间5.656min，L
‑
丙氨酸甲酯保留时间3.593min，L
‑
丙氨酸乙酯保留时间4.285min。
[0028]图3为对照溶液的相色谱图。
[0029]图4为L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的标准曲线图。
[0030]图5为L
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐的标准曲线图。
[0031]图6为L
‑
丙氨酸乙酯盐酸盐的标准曲线图。
[0032]图7为样品检测的液相色谱图。
具体实施方式
[0033]下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但不应该理解为本专利技术上述主题范围仅限于下述实施例。在不脱离本专利技术上述技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本专利技术的保护范围内。
[0034]主要仪器及色谱条件：
[0035]安捷伦1200系列高效液相色谱仪；配VWD紫外检测器，自动进样器，Waters色谱工作站。
[0036]试剂与药品：
[0037]磷酸二氢钾(分析纯)、庚烷磺酸钠(HPLC级)、磷酸(HPLC级)、乙腈(HPLC级)、L
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐对照品、L
‑
丙氨酸乙酯盐酸盐对照品、L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐对照品、L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐(样品)
[0038]实施例1色谱条件的选择
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于:采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐，采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；有关物质包括杂质L
‑
丙氨酸甲酯盐酸盐、L
‑
丙氨酸乙酯盐酸盐；以庚烷磺酸钠为离子对试剂。2.根据权利要求1所述的一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以缓冲盐溶液
‑
乙腈为流动相。3.根据权利要求2所述的一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：所述流动相中缓冲盐溶液的溶质为磷酸二氢钾和庚烷磺酸钠，溶剂为纯化水。4.根据权利要求3所述的一种采用高效液相色谱法测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐有关物质的方法，其特征在于：缓冲盐溶液中，磷酸二氢钾浓度为10mmol/L，庚烷磺酸钠浓度为20mmol/L。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱妍川，余虹，王韵，蒋琳，
申请(专利权)人：重庆医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：