一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法及其试剂盒技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法，具体包括冻存脐血单个核的高质量提取和NK细胞的体外无血清扩增。还涉及一种冻存脐血单个核分离试剂盒，包括含有人血白蛋白、肝素钠和生理盐水的脐血洗涤液，含有羟乙基淀粉和生理盐水的脐血重悬液，含有聚蔗糖的淋巴细胞分离液。本发明专利技术可以解决冻存年限较久脐血在提取单个核过程中会产生絮状沉淀、红细胞大量残留、细胞分层不明显等问题以及冻存脐血NK培养中需要引入动物源血清的问题。入动物源血清的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法及其试剂盒


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法及其试剂盒。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)，是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调解有关，甚至参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。NK细胞大多数具有细胞毒性。它们可产生大量分子(穿孔素、颗粒酶、人体颗粒溶素)的溶解颗粒，这些分子可诱导应激细胞的细胞死亡。NK细胞亦表达多种肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员，如FASL和TRAIL，分别与相应的受体FAS或TRAILR结合诱导靶细胞凋亡。此外，NK细胞产生一系列细胞因子(IFN
‑
γ、TNFα、IL
‑
10)、生长因子(GM
‑
CSF)和趋化因子(CCL3、CCL4、CCL5、XCL1)。NK细胞可以通过与树突状细胞、巨噬细胞和T细胞相互作用来形成免疫反应。因此，NK细胞在免疫疗法中发挥着重要作用。<br/>[0003]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：(1)采用冻存脐血单个核分离试剂盒从冻存脐带血中提取单个核细胞；(2)将单个核细胞用NK细胞扩增培养基调整细胞浓度为2
×
106
‑4×
106/mL后接种于T175细胞培养瓶内，得到细胞悬液；(3)将上述细胞悬液体积调整至15
‑
30mL，并加入体积分数为10
‑
15％的血清替代物、白细胞介素
‑
2及滋养层细胞，所述血清替代物包括生长因子、粘附因子、荷尔蒙、结合蛋白、维生素、微量矿物元素；(4)第三天进行换液；(5)第四天至第七天天进行补液，调整细胞浓度为0.8
‑
1.3
×
106/mL，并加入体积分数为10
‑
15％的血清替代物、白细胞介素
‑
2；(6)第八天进行补液，调整细胞浓度为0.8
‑
1.3
×
106/mL，并加入体积分数为5
‑
10％的血清替代物、白细胞介素
‑
2及滋养层细胞；(7)第九天至第十三天进行补液，调整细胞浓度为1
‑
1.5
×
106/mL，并加入体积分数为1
‑
5％的血清替代物、白细胞介素
‑
2；(8)第十四天至第十八天收取细胞，进行计数，检测。2.根据权利要求1所述的一种无血清培养冻存脐血NK细胞的方法，其特征在于，采用冻存...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕玲，邢义高，秦显喜，李树建，张春梅，张文俐，张秀涛，雒猛，
申请(专利权)人：山东省齐鲁干细胞工程有限公司，
类型：发明
国别省市：