一种免疫调节性γδT细胞及其体外扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫调节性γδT细胞及其体外扩增方法，免疫调节性γδT细胞即Reg

【技术实现步骤摘要】
一种免疫调节性
γδ
T细胞及其体外扩增方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种免疫调节性γδT细胞及其体外扩增方法，免疫调节性γδT细胞即Reg
‑
γδT细胞，其与γδT细胞的唯一不同在于免疫表型为CD3
+
Vδ2
+
CD25
+
CD127
‑
。

技术介绍

[0002]根据人类T细胞抗原受体(T cell receptor，TCR)的差异将T淋巴细胞分为αβT细胞和γδT细胞。在健康成年人外周血中，γδT细胞占CD3
+
T细胞的1
‑
20％，其本身兼具固有免疫和适应性免疫的特性，在抗感染和抗肿瘤中发挥重要作用。
[0003]机体免疫监视与肿瘤细胞免疫逃逸相互制衡的结果决定了肿瘤的发生发展。肿瘤细胞可通过分泌抑制性细胞因子诱导产生免疫抑制性细胞，或通过分泌趋化因子招募免疫抑制因子，进而建立肿瘤免疫抑制环境，抑制效应细胞的活性及抗肿瘤作用，促进肿瘤进展。准确鉴定出肿瘤环境中调节性免疫细胞并实现有效扩增不仅对阐明肿瘤免疫逃逸机制至关重要，也可为自身免疫病、慢性炎症疾病、移植物抗宿主反应以及移植排斥反应提供潜在的治疗手段。γδT细胞具有不依赖MHC分子而直接识别抗原的特性，在异体回输时不会引起同种异体反应，因此在免疫治疗中有巨大的应用前景。
[0004]由于缺乏有效扩增调节性γδT细胞的方法，难以得到足够数量的细胞进行小鼠模型实验，也难以满足过继免疫治疗的需要，调节性γδT细胞的产生机制及高效培养扩增方案有待进一步研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的为如何进行免疫治疗。进一步的，提供了一种作为免疫治疗的免疫调节性细胞(即Reg
‑
γδT细胞)。
[0006]本专利技术首先保护扩增Reg
‑
γδT细胞的方法，包括如下步骤：
[0007](1)向培养基中加入PBMCs、BMP2、唑来膦酸、IL
‑
2和IL
‑
15，得到培养体系；之后培养2
‑
4天；培养体系中PBMCs的浓度可为3
×
106个/mL—5
×
106个/mL(如3
×
106个/mL—4
×
106个/mL、4
×
106个/mL—5
×
106个/mL、3
×
106个/mL、4
×
106个/mL或5
×
106个/mL)，BMP2的浓度可为50
‑
100ng/mL(如50
‑
80ng/mL、80
‑
100ng/mL、50ng/mL、80ng/mL或100ng/mL)，唑来膦酸的浓度可为1.5
‑
3μmol/mL(如1.5
‑
2μmol/mL、2
‑
3μmol/mL、1.5μmol/mL、2μmol/mL或3μmol/mL)，IL
‑
2的浓度可为20
‑
50ng/mL(如20
‑
25ng/mL、25
‑
50ng/mL、20ng/mL、25ng/mL或50ng/mL)，IL
‑
15的浓度可为40
‑
60ng/mL(如40
‑
50ng/mL、50
‑
60ng/mL、40ng/mL、50ng/mL或60ng/mL)；
[0008](2)完成步骤(1)后，半量换液，培养2
‑
4天(如2
‑
3天、3
‑
4天、2天、3天或4天)；
[0009](3)完成步骤(2)后，半量换液，培养2
‑
4天(如2
‑
3天、3
‑
4天、2天、3天或4天)；收集体系中的Reg
‑
γδT细胞；
[0010]Reg
‑
γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3
+
Vδ2
+
CD25
+
CD127
‑
。
[0011]上述方法中，所述步骤(1)中，培养基的溶质及其浓度可为8
‑
12％(如8
‑
10％、10
‑
12％、8％、10％或12％)胎牛血清、0.8
‑
1.2％(如0.8
‑
1.0％、1.0
‑
1.2％、0.8％、1.0％或1.2％)青霉素和0.8
‑
1.2％(如0.8
‑
1.0％、1.0
‑
1.2％、0.8％、1.0％或1.2％)链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基(北京细工生物科技有限公司产品，货号为AF2953)。
[0012]上述方法中，所述步骤(2)和所述步骤(3)中，半量换液的操作方法可为：去除一半培养液，再加入一半含BMP2、IL
‑
2和IL
‑
15的培养基并使体系中BMP2的浓度可为50
‑
100ng/mL(如50
‑
80ng/mL、80
‑
100ng/mL、50ng/mL、80ng/mL或100ng/mL)，IL
‑
2的浓度可为20
‑
50ng/mL(如20
‑
25ng/mL、25
‑
50ng/mL、20ng/mL、25ng/mL或50ng/mL)，IL
‑
15的浓度可为40
‑
60ng/mL(如40
‑
50ng/mL、50
‑
60ng/mL、40ng/mL、50ng/mL或60ng/mL)。所述培养基的溶质及其浓度可为8
‑
12％(如8
‑
10％、10
‑
12％、8％、10％或12％)胎牛血清、0.8
‑
1.2％(如0.8
‑
1.0％、1.0
‑
1.2％、0.8％、1.0％或1.2％)青霉素和0.8
‑
1.2％(如0.8
‑
1.0％、1.0
‑
1.2％、0.8％、1.0％或1.2％)链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基(北京细工生物科技有限公司产品，货号为AF2953)。
[0013]本专利技术还保护Reg
‑
γδT细胞；Reg
‑
γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3
+
Vδ2
+
CD25
+...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种扩增Reg
‑
γδT细胞的方法，包括如下步骤：(1)向培养基中加入PBMCs、BMP2、唑来膦酸、IL
‑
2和IL
‑
15，得到培养体系；之后培养2
‑
4天；培养体系中PBMCs的浓度为3
×
106个/mL—5
×
106个/mL，BMP2的浓度为50
‑
100ng/mL，唑来膦酸的浓度为1.5
‑
3μmol/mL，IL
‑
2的浓度为20
‑
50ng/mL，IL
‑
15的浓度为40
‑
60ng/mL；(2)完成步骤(1)后，半量换液，培养2
‑
4天；(3)完成步骤(2)后，半量换液，培养2
‑
4天；收集体系中的Reg
‑
γδT细胞；Reg
‑
γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3
+
Vδ2
+
CD25
+
CD127
‑
。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，培养基的溶质及其浓度为8
‑
12％胎牛血清、0.8
‑
1.2％青霉素和0.8
‑
1.2％链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)和所述步骤(3)中，半量换液的操作方法为：去除一半培养液，再加入一半含BMP2、IL
‑
2和IL
‑
15的培养基并使体系中BMP2的浓度为50
‑
100ng/mL，IL
‑
2的浓度为20
‑
50ng/mL，IL
‑
15的浓度为40
‑
60ng/mL。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述培养基的溶质及其浓度为8
‑
12％胎牛血清、0.8
‑
1.2％青霉素和0.8
‑
1.2％链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养2
‑
4天为培养3天。6.Reg
‑
γδT细胞；Reg

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓军，刘江莹，梁爽，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：