一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，由葡萄籽原花青素粉、发酵培养基以及复合菌液发酵制备制成；所述复合菌液由酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O混合制成，且酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O的添加比例为2:3；所述发酵培养基由以下组分构成：葡萄糖26

【技术实现步骤摘要】
一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用


[0001]本专利技术涉及生物制剂
，具体为一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用。

技术介绍

[0002]我国的葡萄产量处于世界领先水平，随着葡萄加工产业的迅猛发展，葡萄废弃物的产生也越来越多。目前这些废弃物部分用于生产肥料、活性碳、沼气原料等低价值产品，多数则直接将其作为垃圾处理。然而葡萄籽中不仅含有丰富的维生素、氨基酸及矿物质等营养物质，更含量大量的原花青素；而且从葡萄籽中提取的原花青素具有强抗氧化性，能够高效清除自由基，其能力是维生素C的20倍。因此合理提取并利用葡萄籽中的原花青素具有重要的经济价值和实践意义。
[0003]原花青素(PC)是由黄烷
‑3‑
醇单体聚合而成不同聚合度的黄酮类物质。植物粗提取的原花青素大部分为聚合度大于5的高聚体。目前葡萄籽提取物是工业制备原花青素的最主要来源，葡萄中的PC大部分存在于葡萄籽的外珠被，与细胞基质中的蛋白质、纤维素、半纤维素、木质素等连接。葡萄籽原花青素(GSPC)中聚合度>5的原花青素高聚体(PPC)占比为50％，而原花青素单体 (MPC)和二聚体等占比总共不到10％。PPC难以透过生物膜，生物利用度很低，且大量的PPC在肠道累积会刺激肠道，诱发肠道上皮炎症反应，对机体健康产生损害。因此，获得低聚合度的原花青素有助于提高其在机体内利用率，增强抗氧化性能。
[0004]氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体内高活性分子如活性氧自由基(ROS)和活性氮自由基(RNS)产生过多,氧化程度超出氧化物的清除,氧化系统和抗氧化系统失衡,从而导致组织损伤。在氧化应激过程中，由于受到自由基的氧化胁迫，构成细胞组织的各种物质如脂质、糖类、蛋白质、脱氧核糖核酸(DNA)等所有的大分子物质，都会发生各种程度的氧化反应，引起变性、交联、断裂等氧化损伤，进而导致细胞结构和功能的破坏以及机体组织的损伤和器官的病变。研究表明，肝脏的氧化应激是脂肪肝、肝硬化和肝癌等疾病的共同特征，且缓解氧化应激有助于上述疾病的恢复。因此，寻找高效的抗氧化制剂对于防治氧化应激引发的肝损伤类疾病具有重要意义。

技术实现思路

[0005](一)解决的技术问题
[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，具备防治氧化应激引发的肝损伤类疾病的优点，有效缓解了由于氧化应激导致机体受到损伤的问题。
[0007](二)技术方案
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，由葡萄籽原花青素粉、发酵培养基以及复合菌液发酵制备制成；
[0009]所述复合菌液由酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O混合制成，且酿酒酵母H2 和发酵乳杆
菌O的添加比例为2:3；
[0010]所述发酵培养基由以下组分构成：葡萄糖26
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27重量份、蛋白胨10
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11 重量份、酵母浸粉4
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5重量份、磷酸氢二钾1
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2重量份、柠檬酸铵1
‑
2重量份、硫酸镁0.1
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0.3重量份，水950
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1000重量份；
[0011]还包括以下步骤：
[0012]S1、制备复合菌液：将组成复合菌液的菌种分别进行复苏及复壮培养后，用生理盐水分别将菌液调节至1麦氏比浊管的比浊度，之后将酵母菌和乳酸菌按体积2:3的接种比混合后即为复合菌液；
[0013]S2、混合发酵：将葡萄籽原花青素、复合菌液和发酵培养基混合加入发酵罐进行发酵，其中，葡萄籽原花青素添加量为40
‑
60重量份、复合菌液的接种量为20
‑
30体积份，发酵温度38
‑
40℃，搅拌转速为110
‑
130r/min，pH 为5.5
‑
6.5，发酵时间为18
‑
22h，发酵结束产物即为微生态制剂。
[0014]优选的，所述步骤S1中菌种在进行发酵培养之前，进行菌种的活化复壮，复壮培养基成分由以下组分制成：葡萄糖18
‑
22重量份、蛋白胨10
‑
12重量份、酵母浸粉4
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6重量份、牛肉浸粉6
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8重量份、磷酸氢二钾2
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4重量份、柠檬酸铵2
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4重量份、醋酸钠3
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5重量份、硫酸锰0.02
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0.04重量份、硫酸镁0.2
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0.4重量份、吐温80 1
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2重量份，二馏水950
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1000重量份。
[0015]优选的，所述葡萄籽原花青素的纯度为80
‑
90％、平均聚合度为6.5
‑
8.8。
[0016](三)有益效果
[0017]与现有技术相比，本专利技术提供了一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，具备以下有益效果：
[0018]1、该具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，通过选用成本低的粗提商品化葡萄籽原花青素粉末，其杂质及聚合度均偏高，通过联合发酵可将原花青素的平均聚合度降低并稳定地溶解于复合菌液中，使制剂成分能够被机体吸收与利用从而防治肝损伤。
[0019]2、该具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，通过采用原花青素与复合菌液的联合发酵提高复合菌液中酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O生长速率，缩短两菌种进入生长稳定期的时间，加快制剂的制备效率，同时，原花青素对于胃肠道常见致病菌具有抑制作用，能够帮助复合益生菌在胃肠道定植生长，维持胃肠道菌群稳态、促进营养消化吸收、增强机体免疫力和抗病能力。
附图说明
[0020]图1为本专利技术中酿酒酵母H2在原花青素添加的液体培养基中(酿酒酵母 H2+)和未添加原花青素的液体培养基(酿酒酵母H2)中的生长曲线图；
[0021]图2为本专利技术中发酵乳杆菌O在原花青素添加的液体培养基中(发酵乳杆菌O+)和未添加原花青素的液体培养基(发酵乳杆菌O)中的生长曲线图；
[0022]图3为本专利技术中空白培养基组、复合菌液组、原花青素培养基组、微生态制剂对于DPPH自由基清除率(％)检测图；
[0023]图4为本专利技术中空白培养基组、复合菌液组、原花青素培养基组、微生态制剂对于ABTS自由基清除率(％)检测图；
[0024]图5为本专利技术中微生态制剂预防急性肝损伤试验中小鼠肝脏剖检表观图；
[0025]图6为本专利技术中空白对照组、CCl4模型组、微生态制剂预防组小鼠肝脏组织中SOD和GSH
‑
Px的活性(单位U/mgprot表示在1mg组织蛋白中酶的活性)；
[0026]图7为本专利技术中微生态制剂预防急性肝损伤试验肝脏切片HE染色结果；
[0027]图8为本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用，其特征在于：由葡萄籽原花青素粉、发酵培养基以及复合菌液发酵制备制成；所述复合菌液由酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O混合制成，且酿酒酵母H2和发酵乳杆菌O的添加比例为2:3；所述发酵培养基由以下组分构成：葡萄糖26
‑
27重量份、蛋白胨10
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11重量份、酵母浸粉4
‑
5重量份、磷酸氢二钾1
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2重量份、柠檬酸铵1
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2重量份、硫酸镁0.1
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0.3重量份，水950
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1000重量份；还包括以下步骤：S1、制备复合菌液：将组成复合菌液的菌种分别进行复苏及复壮培养后，用生理盐水分别将菌液调节至1麦氏比浊管的比浊度，之后将酵母菌和乳酸菌按体积2:3的接种比混合后即为复合菌液；S2、混合发酵：将葡萄籽原花青素、复合菌液和发酵培养基混合加入发酵罐进行发酵，其中，葡萄籽原花青素添加量为40
‑
60重量份、复合菌液的接种量为20
‑
30体积份，发酵温度38
‑
40℃，搅拌转速为110
‑
130r/min，pH为5.5
‑
6.5，发酵时间为18
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘国文，金波，杜希良，李心慰，沈泰钰，房志愿，宋玉祥，王哲，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：