【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表征化合物的凝聚物缔合特征的方法及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年2月8日提交的美国临时专利申请第62/803,365号和2019年6月25日提交的美国临时专利申请第62/866,526号的优先权权益，其公开内容均在此通过引用整体并入本文。
[0003]本专利技术涉及生物凝聚物(condensates)领域。
技术介绍
[0004]除了膜结合的细胞器如线粒体、溶酶体和内质网外，细胞还包含不同的亚隔室，该亚隔室不包括在其和其紧邻周围溶液之间的膜。这些无膜分子组件中的很多已被证明是通过称为液
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液相分离或凝聚的过程形成的。在此过程中，包含生物大分子的溶液分离成不同的相，富有那些大分子其中一些的凝聚物和那些大分子相对缺乏的周围相。多种细胞凝聚物已被识出。另外，相分离的凝聚物可以在细胞外形成，如在溶液中或在细胞外(Alberti et al.,J Mol Biol,430(23),2018,4806
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4820；Muiznieks et al...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.确定测试化合物在目标凝聚物中的分配特征的方法，所述方法包括：(a)将所述测试化合物与包含所述目标凝聚物和凝聚物外溶液的组合物组合；(b)确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量，从而确定所述测试化合物在所述目标凝聚物中的分配特征。2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在步骤(a)之前导致所述目标凝聚物形成。3.确定测试化合物在目标凝聚物中的分配特征的方法，所述方法包括：(a)在所述测试化合物存在的情况下导致所述目标凝聚物形成，以获得包含所述目标凝聚物和凝聚物外溶液的组合物；和(b)确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量，从而确定所述测试化合物在所述目标凝聚物中的分配特征。4.根据权利要求3所述的方法，进一步包括在步骤(a)之前将所述测试化合物与包含前体分子的前体组合物组合。5.根据权利要求3所述的方法，进一步包括在步骤(a)之前将所述测试化合物添加到包含前体分子的前体组合物中。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，进一步包括确定所述凝聚物外溶液中的所述测试化合物的量。7.根据权利要求6所述的方法，其中在确定所述凝聚物外溶液中的所述测试化合物的量之前、同时或之后。确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量。8.根据权利要求6或7所述的方法，进一步包括确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量与所述凝聚物外溶液中的所述测试化合物的量的比率。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的方法，进一步包括将所述目标凝聚物与所述凝聚物外溶液分离。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，进一步包括在确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量之前鉴定所述目标凝聚物。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述目标凝聚物的失调与疾病相关。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，进一步包括表征所述目标凝聚物，所述表征通过鉴定其中包含的一种或多种大分子进行。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述鉴定包括确定所述目标凝聚物中的所述一种或多种大分子的量。14.根据权利要求13所述的方法，进一步包括确定所述目标凝聚物中的所述测试化合物的量与所述目标凝聚物中的所述一种或多种大分子的量的比率。15.根据权利要求1
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14中任一项所述的方法，其中所述目标凝聚物包括蛋白质，所述蛋白质包含固有无序的序列。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的方法，进一步包括标记所述目标凝聚物，以使所述目标凝聚物可视化。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述目标凝聚物用放射性标记、比色标记或荧光标记进行标记。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述组合物包含细胞。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述细胞是微生物或动物细胞。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述细胞包含被确定失调的凝聚物。21.根据权利要求18
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20中任一项所述的方法，其中所述细胞具有神经变性疾病或增殖性疾病的一个或多个特征。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的方法，其中所述目标凝聚物是细胞凝聚物。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述细胞凝聚物是裂解体、P
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颗粒、组蛋白基因座体、多泡体、神经元RA颗粒、核叶芽、核孔、核斑、核应力体、核仁、Oct1/PTF/转录(OPT)域、旁斑、核仁周室、PML核体、PML致癌域、多梳体、加工体、Sam68核体、应力颗粒或剪接斑。24.根据权利要求1
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23中任一项所述的方法，其中所述目标凝聚物在细胞中。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述细胞是微生物或动物细胞。26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述细胞具有神经变性疾病或增殖性疾病的一个或多个特征。27.根据权利要求1
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26中任一项所述的方法，其中所述凝聚物外溶液是细胞内液。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述细胞内液是胞质溶胶或核溶胶。29.根据权利要求1
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21中任一项所述的方法，其中所述目标凝聚物不在细胞中。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述目标凝聚物是细胞外凝聚物。31.根据权利要求1
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22或29
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30中任一项所述的方法，其中所述凝聚物外溶液是细胞外液。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述细胞外液是间质液。33.根据权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述方法是无细胞测定法。34.根据权利要求1
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33中任一项所述的方法，其中所述组合物包含以下中的一种或多种：大分子、盐和缓冲剂。35.根据权利要求1
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34中任一项所述的方法，其中所述组合物包含两种或更多种目标凝聚物。36.根据权利要求1
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35中任一项所述的方法，其中所述方法包括对于一种或多种另外的凝聚物重复所述方法的步骤。37.根据权利要求1
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36中任一项所述的方法，其中所述测试化合物是小分子、多肽或核酸。38.根据权利要求1
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37中任一项所述的方法，其中所述测试化合物包含测试化合物标记。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述测试化合物标记是放射性标记、比色标记或荧光标记。40.根据权利要求38或39所述的方法，其中所述测试化合物标记是荧光标记。41.根据权利要求38
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40中任一项所述的方法，其中所述测试化合物的量通过检测所述测试化合物标记来确定。42.根据权利要求1
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41中任一项所述的方法，其中所述测试化合物的量通过质谱法、液相色谱法和/或紫外
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可见分光光度法来确定。43.确定多种测试化合物在目标凝聚物中的分配特征的方法，所述方法包括用多种测试化合物进行根据权利要求1
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42中任一项所述的方法。44.根据权利要求43所述的方法，进一步包括比较所述多种测试化合物的子集或全部
在所述目标凝聚物中的分配特征。45.根据权利要求44所述的方法，进一步包括鉴定在目标凝聚物中具有相同或相似的分配特征的测试化合物。46.根据权利要求45所述的方法，其进一步包括鉴定所鉴定的测试化合物的子集或全部除了相同或相似的分配特征之外还共同具有的特征。47.根据权利要求46所述的方法，进一步包括确定包含所鉴定的特征的一种或多种另外的测试化合物在目标凝聚物中的分配特征。48.根据权利要求46或47所述的方法，进一步包括确定不包含所鉴定的特征的一种或多种另外的测试化合物在目标凝聚物中的分配特征。49.确定测试化合物在目标凝聚物中的相对分配特征的方法，所述方法包括：(i)通过用所述测试化合物进行根据权利要求1
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42中任一项所述的方法来确定所述测试化合物的分配特征；(ii)通过用参考化合物进行根据根据权利要求1
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42中任一项所述的方法来确定参考化合物的分配特征；和(iii)计算在(i)和(ii)中确定的分配特征的比率，从而确定所述测试化合物在所述目标凝聚物中的相对分配特征。50.根据权利要求49所述的方法，其中所述测试化合物包括测试化合物标记。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述参考化合物是所述测试化合物标记。52.确定多种测试化合物在目标凝聚物中的相对分配特征的方法，所述方法包括：(1)进行根据权利要求49
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51中任一项所述的方法；和(2)用多种测试化合物重复步骤(i)和(iii)。53.根据权利要求52所述的方法，进一步包括比较所述多种测试化合物的子集或全部在所述目标凝聚物中的相对分配特征。54.根据权利要求53所述的方法，进一步包括鉴定在所述目标凝聚物中具有相同或相似的相对分配特征的测试化合物。55.根据权利要求54所述的方法，进一步包括鉴定所鉴定的测试化合物的子集或全部除了相同或相似的相对分配特征之外还共同具有的特征。56.根据权利要求55所述的方法，进一步包括确定包含所鉴定的特征的一种或多种另外的测试化合物在所述目标凝聚物中的相对分配特征。57.根据权利要求55或56所述的方法，进一步包括确定不包含所鉴定的特征的一种或多...
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