能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc-145细胞株的筛选方法技术

本发明专利技术公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc

【技术实现步骤摘要】
能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc
‑
145细胞株的筛选方法


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc
‑
145细胞株的筛选方法，特别涉及一种利用免疫荧光方法检测细胞表面CD163受体从而快速、方便、客观、准确筛选能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc
‑
145细胞株的方法，以及利用免疫荧光方法检测Marc
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145细胞表面CD163受体来预测利用该细胞体外培养增殖PRRSV所获得的病毒液中病毒含量的方法及其在疫苗制备中的应用。

技术介绍

[0002]猪繁殖和呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS，俗称蓝耳病)是由猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV，俗称蓝耳病毒)所引起的一种接触性传染病，主要侵害本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc
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145细胞株的筛选方法，其包括以下步骤：检测：利用间接免疫荧光法检测由候选Marc
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145单克隆细胞株繁殖形成的Marc
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145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc
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145细胞群的百分比；筛选：将所述百分比≥50％对应的候选Marc
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145单克隆细胞株作为能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc
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145细胞株；其中所述高病毒含量病毒液是指病毒含量≥10
7.0
TCID
50
/ml的病毒液。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其中筛选标准更优为：所述百分比≥80％，所述高病毒含量病毒液中病毒含量≥10
8.0
TCID
50
/ml。3.根据权利要求1或2所述的筛选方法，其中所述细胞表面存在CD163受体的细胞为利用间接免疫荧光法检测到的细胞表面出现特异性荧光的细胞。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的筛选方法，其中所述候选Marc
‑
145单克隆细胞株为候选Marc
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145单克隆贴壁细胞株或候选Marc
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145单克隆悬浮细胞株，由所述候选Marc
‑
145单克隆贴壁细胞株繁殖形成的细胞群为Marc
‑
145单克隆贴壁细胞群，由所述候选Marc
‑
145单克隆悬浮细胞株繁殖形成的细胞群为Marc
‑
145单克隆悬浮细胞群。5.根据权利要求4所述的筛选方法，其中由所述候选Marc
‑
145单克隆贴壁细胞株繁殖形成Marc
‑
145单克隆贴壁细胞群的具体操作为：将所述候选Marc
‑
145单克隆贴壁细胞株按照1个细胞/孔接种于细胞培养板，置于37
±
1℃5％CO2的条件下用含10％新生牛血清的DMEM培养基培养7～14天，得到Marc
‑
145单克隆贴壁细胞群。6.根据权利要求4所述的筛选方法，其中由所述候选Marc
‑
145单克隆悬浮细胞株繁殖形成Marc
‑
145单克隆悬浮细胞群的具体操作为：将所述候选Marc
‑
145单克隆悬浮细胞株按照1个细胞/板接种于半固体琼脂糖平板中，置于37
±
1℃5％CO2的条件下用CD293培养基培养7～14天，得到Marc
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145单克隆悬浮细胞群。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的筛选方法，其中所述间接免疫荧光法中所使用的一抗为抗CD163单克隆抗体，使用的二抗为FITC标记羊抗鼠IgG二抗。8.一种利用Marc
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145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量的预测方法，其包括利用间接免疫荧光法检测所述Marc
‑
145细胞群中细胞表面存在CD163受...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔彩平，朱旭，俎红丽，赵丽霞，李敏，乌日罕，刘燕军，孙慧，王娥娥，郝苏云，韩冬，张海宝，乔煜婷，郝鹏，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：