分离的多肽、核酸及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种分离的多肽，该多肽与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有310位氨基酸突变。利用本发明专利技术提供的多肽可以高效制备肌肽，并且绿色环保，适于大规模生产。产。

【技术实现步骤摘要】
分离的多肽、核酸及其应用


[0001]本专利技术涉及生物化学领域，具体地，涉及分离的多肽、核酸及其应用，更具体地，涉及分离的多肽、核酸、构建体、重组细胞、提高肌肽合成酶活性的方法和制备肌肽的方法。

技术介绍

[0002]L
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肌肽(β
‑
丙氨酰
‑
L
‑
组氨酸)是由β
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丙氨酸和组氨酸组成的二肽，在脊椎动物的骨骼肌和中枢神经系统中具有较高浓度(Boldyrev，2013)。L
‑
肌肽在体内具有许多重要的生理功能，包括抗氧化，抗糖化以及细胞质间缓冲作用和消除自由基等。因此L
‑
肌肽作为一种具有生物活性化合物而备受关注，并广泛用于医药，化妆品，食品添加剂等领域(Yin et al.2019)。利用化学合成法生产L
‑
肌肽的研究已被广泛报道，是目前工业生产的主要方法。化学合成法工艺复杂，会产生许多有毒物质，并且反应条件苛刻，能耗大，不符合绿色化学的要求。
[0003]因此有必要开发新的方法予以取代。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
[0005]在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的多肽。根据本专利技术的实施例，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有310位氨基酸突变。专利技术人经过大量的研究发现，对野生型肌肽合成酶的310位氨基酸进行突变可以改变肌肽合成酶的活性，突变的氨基酸类型不同，对酶活性的影响不同，例如，有些类型的氨基酸可以大幅降低酶活，有些可以使酶失去催化肌肽合成的活性，有些可以大幅提高酶活，进而提高合成肌肽的转化率。
[0006]根据本专利技术的实施例，上述分离的多肽还具有下列附加技术特征：
[0007]根据本专利技术的实施例，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有p.Gly310Ala或p.Gly310Ser。专利技术人经过大量的研究发现，野生型肌肽合成酶的310位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸时，可以大幅提高肌肽合成酶的活性，可以将酶活提高26％；野生型肌肽合成酶的310位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸时丝氨酸时，也可以提高肌肽合成酶的活性。
[0008]根据本专利技术的实施例，所述多肽具有SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列相比具有至少95％同一性的氨基酸序列。
[0009]LIISSVSAAEPIRARDLGIPFDGQPGSLNAITDVAGVEVGQVTLIDGEGALLVGSGPVRTGVTVIHPRGRNSTDPVFAGWFALNASGEMTGTTWLEERGMVDGPIAITNTHSVGVVRDAAVAWMVEQGWPADWHAPVVAETYDGGLNDINGFHVTREHALEAMAKARTGVVEEGVVGGGTGMVCNGFKGGIGTSSRVFDALGRSFTVGILVQCNYNWDGEQDLRIGGKNMSGLLPVGKHCFIYRDVPRHVNWYPYCDDSSANDELDKPTRDGSIIIIVATDAPLLPHQLRRLAKRPALGLGRLGGISSDGSGDIFLAFSTASPGLINENEESTISMFPNNGLSVVFEAAVQATEEAIVNAMVAAETVVGASGLQVEEMPEDQLRAIFLD(SEQ ID NO:1)
[0010]LIISSVSAAEPIRARDLGIPFDGQPGSLNAITDVAGVEVGQVTLIDGEGALLVGSGPVRTGVTVIHPR
GRNSTDPVFAGWFALNASGEMTGTTWLEERGMVDGPIAITNTHSVGVVRDAAVAWMVEQGWPADWHAPVVAETYDGGLNDINGFHVTREHALEAMAKARTGVVEEGVVGGGTGMVCNGFKGGIGTSSRVFDALGRSFTVGILVQCNYNWDGEQDLRIGGKNMSGLLPVGKHCFIYRDVPRHVNWYPYCDDSSANDELDKPTRDGSIIIIVATDAPLLPHQLRRLAKRPALGLGRLGGISSDASGDIFLAFSTASPGLINENEESTISMFPNNGLSVVFEAAVQATEEAIVNAMVAAETVVGASGLQVEEMPEDQLRAIFLD(SEQ ID NO:2)
[0011]LIISSVSAAEPIRARDLGIPFDGQPGSLNAITDVAGVEVGQVTLIDGEGALLVGSGPVRTGVTVIHPRGRNSTDPVFAGWFALNASGEMTGTTWLEERGMVDGPIAITNTHSVGVVRDAAVAWMVEQGWPADWHAPVVAETYDGGLNDINGFHVTREHALEAMAKARTGVVEEGVVGGGTGMVCNGFKGGIGTSSRVFDALGRSFTVGILVQCNYNWDGEQDLRIGGKNMSGLLPVGKHCFIYRDVPRHVNWYPYCDDSSANDELDKPTRDGSIIIIVATDAPLLPHQLRRLAKRPALGLGRLGGISSDSSGDIFLAFSTASPGLINENEESTISMFPNNGLSVVFEAAVQATEEAIVNAMVAAETVVGASGLQVEEMPEDQLRAIFLD(SEQ ID NO:3)在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种分离的核酸。根据本专利技术的实施例，所述分离的核酸与野生型肌肽合酶基因SEQ ID NO:4相比，具有下列突变组合的至少之一：c.929G>C和c.930C>T；和c.928G>Cc.929G>C和c.930C>T。
[0012]根据本专利技术的实施例，上述分离的核酸还具有下列附加技术特征：
[0013]根据本专利技术的实施例，所述核酸具有SEQ ID NO:5～7任一所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:5～7任一所示的核苷酸序列相比具有至少95％同源性的核苷酸序列。
[0014]CTGATCATCAGCAGCGTTAGCGCGGCGGAACCGATCCGTGCGCGTGATCTGGGTATTCCGTTCGACGGTCAGCCGGGTTCTCTGAATGCTATTACTGATGTTGCAGGTGTTGAAGTGGGTCAAGTTACCCTGATTGATGGTGAAGGTGCACTGTTAGTGGGTTCCGGCCCGGTTCGTACTGGCGTTACCGTTATCCACCCGCGTGGCCGTAACTCCACTGACCCGGTTTTTGCTGGTTGGTTTGCTCTTAACGCTTCTGGTGAAATGACCGGTACCACTTGGCTGGAAGAACGTGGTATGGTTGACGGTCCGATTGCTATCACCAACACCCACTCTGTGGGCGTTGTTCGTGATGCGGCGGTTGCGTGGATGG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有310位氨基酸突变。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有p.Gly310Ala或p.Gly310Ser。3.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列相比具有至少95％同一性的氨基酸序列。4.一种分离的核酸，其特征在于，与野生型肌肽合酶基因SEQ ID NO:4相比，具有下列突变组合的至少之一：c.929G>C和c.930C>T；和c.928G>Cc.929G>C和c.930C>T。5.根据权利要求4所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有SEQ ID NO:5～7任一项所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:5～7任一所示的核苷酸序列相比具有至少95％同源性的核苷酸序列。6.一种构建体，其特征在于，包含权利要求3～4任一项所述的核酸。7.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求5所述的构建体转化受体细胞获得的。8.根据权利要求7所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为大肠杆菌。9.一种提高肌肽合成酶活性的方法，其特征在于，使所述肌肽合成酶的第310位氨基酸发生突变；优选地，使所述肌肽合成酶的第310位Gly突变为Ala或Ser。10.权利要求1～3所述的多肽、权利要求4～5任一项所述的核酸、权利要求6所述的构建体、权利要求7～8所述的重组细胞在制备L
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肌肽中的用途。11.一种制备肌肽的方法，其特征在于，包括:将如权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晶瑜，黄灿，于波，张臻峰，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：