一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术属于血小板抗体检测技术领域，具体地说，涉及一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用。所述的抗筛细胞采用如下方法制备得到：1）将已筛选确认抗原谱的3人份O型血小板等体积混合，使用血小板清洗液清洗、离心，弃掉上清，保留血小板沉淀；2）使用血小板载入液将步骤1）的血小板沉淀重悬，调整细胞浓度到（1.0

【技术实现步骤摘要】
一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于血小板抗体检测
，具体地说，涉及一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]血小板抗体是机体对血小板表面或相关抗原免疫产生的，刺激血小板抗体产生的抗原可以是自身的也可以是异体的。血小板抗体有两类，一类主要是针对人类组织相容性抗原（HLA）I类抗原的抗体，即血小板表面相关抗体（PA IgG），一类是针对GP抗原的血小板特异性抗体(PB IgG)。GP抗原和HLA
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I类抗原刺激机体产生同种免疫反应，导致的外源性血小板破坏使血小板寿命缩短和功能改变，是血小板输注无效的重要原因，而随着输注次数及量的增加，检出血小板抗体的阳性率增高，发生输注无效及非溶血性输血反应率也增高。
[0003]血小板抗原经输血、妊娠及骨髓移植等可刺激机体产生血小板抗体，抗体可致敏血小板并使其破坏，引起血小板减少，导致患者出现淤点、淤斑、出血甚至死亡等严重后果。检测患者血小板抗体可辅助临床采取恰当的预防和治疗措施，为血小板抗体阳性患者进行交叉配型以筛选血小板相容性患者，可显著减少血小板输注无效症的发生。
[0004]抗血小板抗体检测试剂盒为各大医院输血科、血站提供了一个简单、快捷的方法来检测患者血液中是否有抗血小板抗体，可辅助临床采取恰当的预防和治疗措施。为抗血小板抗体阳性患者进行交叉配型以筛选血小板相容性供者，从而预防血小板输注无效。目前国内外抗血小板抗体检测主要有免疫细胞化学法、微柱凝胶法及固相凝集法三种。免疫细胞化学法由于需要专用仪器、繁琐、耗时，不适于基层开展，微柱凝胶法容易造成结果误差，而固相凝集法因灵敏度、特异性高而前景较好。
[0005]准确、快速、简便的检测和鉴定出血小板抗体对血小板免疫性疾病的诊断、治疗等方面起着重要的作用。目前临床上血小板抗体检测的主要方法是以免疫学方法为主，但因为血小板表面抗原的复杂性和多样性，到目前为止没有商品化的纯抗原销售。在当前的检测中多使用血小板本身作为抗原。然而正常情况下血小板的保存期仅为5
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7天，而血小板抗体的检测又依赖于血小板抗原，这就为血小板抗体的检测增加了难度。目前我国尚无商品化的抗筛细胞，以致临床难以开展血小板抗体检测，少数血站应用的国外试剂价格昂贵，检测成本高，增加了患者负担。
[0006]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用。本专利技术所提供的抗筛细胞可用于血小板抗体的检测，保存时间长，使用方便，抗原保存效果好。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞，其中，所述的抗筛细胞采用如下方法制备得到：1）将已筛选确认抗原谱的3人份O型血小板等体积混合，使用血小板清洗液清洗、离心，弃掉上清，保留血小板沉淀；2）使用血小板载入液将步骤1）的血小板沉淀重悬，调整细胞浓度到（1.0
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2.0）
×
10
10
个/ml，振荡；3）振荡后使用血小板清洗液再次清洗，清洗完成后使用血小板保存液重悬沉淀，调整细胞浓度到（2.0
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5.0）
×
107个/ml，得到适用于血小板抗体检测的抗筛细胞。
[0009]血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆解脱落下来的小块胞质，是构成人体血液的重要组成成分，在参与血液凝固过程、维持毛细血管的稳定性、器官移植排斥、炎症等生理及病理过程中扮演着重要的角色。正常情况下血小板保存期仅为5
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7天，而血小板的抗体检测依赖于血小板抗原，为血小板抗体的检测增加了难度。本专利技术提供了一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞，可用于血小板抗体的检测，保存时间长，使用方便，抗原保存效果好，为血小板抗体的检测提供了方便。
[0010]本专利技术还提供一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞的制备方法，该方法包括如下步骤：1）将已筛选确认抗原谱的3人份O型血小板等体积混合，使用血小板清洗液清洗、离心，弃掉上清，保留血小板沉淀；2）使用血小板载入液将步骤1）的血小板沉淀重悬，调整细胞浓度到（1.0
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2.0）
×
10
10
个/ml，振荡；3）振荡后使用血小板清洗液再次清洗，清洗完成后使用血小板保存液重悬沉淀，调整细胞浓度到（2.0
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5.0）
×
107个/ml，得到适用于血小板抗体检测的抗筛细胞。
[0011]进一步地，所述的血小板清洗液包括：柠檬酸钠5
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15mmol/L，氯化钠75
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80mmol/L，氯化钾10
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20mmol/L，磷酸二氢钠15
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25mmol/L，乙酸钠10
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20mmol/L，氯化镁10
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20mmol/L，硫酸钾3
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8mmol/，牛血清白蛋白25
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35g/L，蔗糖10
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20g/L，海藻糖15
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25g/L，葡萄糖15
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25g/L，其pH为7.2
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7.6；所述的血小板载入液包括：HEPES 40
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60mmol/L，氯化钠75
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80mmol/L，氯化钾10
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20mmol/L，蔗糖15
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25g/L,海藻糖15
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25g/L，D
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甘露醇10
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20g/L，冰醋酸10
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20mmol/L，戊二醛0.0020
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0.0030%，其pH为6.5
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6.8；所述的血小板保存液包括：HEPES 20
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30mmol/L，氯化钠40
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50mmol/L，氯化锌1
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5mmol/L，氯化钙8
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15mmol/l，乙酸钠8
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15mmol/L，柠檬酸钠8
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10mmol/L，碳酸氢钠20
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30mmol/L，硫酸镁3
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8mmol/L，海藻糖15
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25g/L，葡萄糖10
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20g/L，还原型谷胱甘肽5
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15mg/L,对氨基苯甲酸10
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20mg/L，核黄素1
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5mg/L，肌醇1
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5mg/L，谷氨酰胺20
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30mg/L，维生素C 3
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8mg/L，木糖醇3
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8g/L，牛磺酸15
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25mg/L，硫酸新霉素115
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125mg/L，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞，其特征在于，所述的抗筛细胞采用如下方法制备得到：1）将已筛选确认抗原谱的3人份O型血小板等体积混合，使用血小板清洗液清洗、离心，弃掉上清，保留血小板沉淀；2）使用血小板载入液将步骤1）的血小板沉淀重悬，调整细胞浓度到（1.0
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2.0）
×
10
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个/ml，振荡；3）振荡后使用血小板清洗液再次清洗，清洗完成后使用血小板保存液重悬沉淀，调整细胞浓度到（2.0
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5.0）
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107个/ml，得到适用于血小板抗体检测的抗筛细胞。2.一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：1）将已筛选确认抗原谱的3人份O型血小板等体积混合，使用血小板清洗液清洗、离心，弃掉上清，保留血小板沉淀；2）使用血小板载入液将步骤1）的血小板沉淀重悬，调整细胞浓度到（1.0
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2.0）
×
10
10
个/ml，振荡；3）振荡后使用血小板清洗液再次清洗，清洗完成后使用血小板保存液重悬沉淀，调整细胞浓度到（2.0
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5.0）
×
107个/ml，得到适用于血小板抗体检测的抗筛细胞。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的血小板清洗液包括：柠檬酸钠5
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15mmol/L，氯化钠75
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80mmol/L，氯化钾10
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20mmol/L，磷酸二氢钠15
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25mmol/L，乙酸钠10
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20mmol/L，氯化镁10
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20mmol/L，硫酸钾3
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8mmol/，牛血清白蛋白25
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35g/L，蔗糖10
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20g/L，海藻糖15
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25g/L，葡萄糖15
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25g/L，其pH为7.2
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7.6；所述的血小板载入液包括：HEPES 40
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60mmol/L，氯化钠75
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80mmol/L，氯化钾10
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20mmol/L，蔗糖15
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25g/L,海藻糖15
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25g/L，D
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甘露醇10
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20g/L，冰醋酸10
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20mmol/L，戊二醛0.0020
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0.0030%，其pH为6.5
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6.8；所述的血小板保存液包括：HEPES 20
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30mmol/L，氯化钠40
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50mmol/L，氯化锌1
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5mmol/L，氯化钙8
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【专利技术属性】
技术研发人员：潘大地，王伟权，黄志刚，王秀柱，王丽，
申请(专利权)人：天津德祥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：