一种诊断标志物及其在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种诊断标志物及在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种上的应用。所述诊断标志物为新型冠状病毒N蛋白和/或NSP7蛋白,编码所述N蛋白的氨基酸序列为：SEQ ID NO:1或与SEQ ID NO：1具有80％以上同源性的序列；编码所述NSP7蛋白的氨基酸序列为：SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO：2具有80％以上同源性的序列。基于本发明专利技术的诊断标志物应用间接法定量检测人血清中抗N蛋白和NSP7蛋白的IgG抗体的水平。通过基于本发明专利技术所建立的检测试剂盒，可作为区分新型冠状病毒感染和新型冠状病毒灭活疫苗接种的一种辅助手段。

【技术实现步骤摘要】
一种诊断标志物及其在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种诊断标志物及其在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种中的应用，尤其涉及N蛋白及其衍生物和/或NSP7蛋白及其衍生物在区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种试剂盒中的应用。
技术介绍
SARS-CoV-2为一种新型的β属冠状病毒新毒株(新冠病毒)，可跨越物种屏障感染人类，可通过密切接触、呼吸道飞沫、高浓度气溶胶传播，引起以肺部病变为主的传染病，也可诱发包括神经系统和消化系统在内的全身性损伤，严重者可导致死亡(Lancet.2020Feb15；395(10223):514-523)。世界各地的人们都在拼命希望恢复正常的生活。为了实现这一目标，最好的，也许是唯一的办法是通过世界范围的疫苗接种获得群体免疫。我们正在见证人类历史上迄今为止针对一种新出现的病原体(SARS-CoV-2)的最快速的疫苗开发(NatRevImmunol.2020Dec18:1–10；NatRevImmunol.2020Oct；20(10):615-632)。根据COVID-19疫苗追踪网站(https://covid19.trackvaccines.org)，到2021年3月1日共有12种疫苗获准紧急使用，89种疫苗正在进行临床试验。这些疫苗可分为几种主要策略，包括RNA/DNA疫苗(NEnglJMed.2020Dec31；383(27):2616-2627；NatCommun.2020May20；11(1):2601)、亚单位疫苗(Cell.2020Aug6；182(3):722-733.e11；NEnglJMed.2020Dec10；383(24):2320-2332)和灭活病毒疫苗(Science.2020Jul3；369(6499):77-81；Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9；JAMA.2020Sep8；324(10):951-960)。在这些疫苗中，灭活疫苗具有高效、安全、低成本、高可行性等优点，被认为是最有前途的选择之一。目前临床试验的SARS-CoV-2灭活病毒疫苗有9种，其中6种为Ⅲ期，即CoronaVac(Science.2020Jul3；369(6499):77-81)、武汉生物制品研究所灭活病毒疫苗(LancetInfectDis.2021Jan；21(1):39-51)、BBIBP-CorV(Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9；LancetInfectDis.2021Jan；21(1):39-51)。BBIBPCorV已经获得中国、巴林、埃及、伊拉克、约旦、巴基斯坦、塞舌尔和阿联酋等国家的批准。这些灭活的病毒疫苗可以在多种动物模型中引发深刻的抗体反应，包括非人灵长类动物(NHPs)和人类。然而，未观察到NHPs和人类中TH1或TH2细胞应答的特异性诱导(NatRevImmunol.2020Dec18:1–10)。众所周知，有效抗体反应的刺激是良好灭活疫苗候选者的标志，也可能是灭活SARS-COV-2疫苗有效性的主要机制(Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9)在SARS-CoV-2感染人体过程中发挥重要作用且能激发人体免疫反应产生抗体的还有SARS-CoV-2表面的S蛋白。S蛋白即spikeglycoprotein(刺突糖蛋白)，位于SARS-CoV-2最外层，研究发现其与人体ACE2(血管紧张素转化酶2)的结合是新冠病毒感染人体细胞的关键。S蛋白包含两个区域：S1和S2，其中S1主要包含受体结合域(receptorbindingdomain，RBD)，负责识别细胞的受体；S2参与病毒与细胞膜的融合(Science2020Mar13；367(6483):1260-1263)。总的来说，S蛋白承担病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能，是宿主中和抗体的重要作用位点以及诊断、疫苗研制的关键靶点，从血清学检测方面来看，针对S蛋白开发诊断试剂是一个最好的选择。SARS-CoV-2的N蛋白，即nucleocapsidprotein，是组成病毒的结构蛋白，它表达丰度较高，与病毒的RNA结合，在病毒的生命周期中发挥多种作用，包括复制，转录和基因组包装(EMBOJournal2020Oct15；39(20):e105938)。由于N蛋白也会引起感染者较强的免疫反应，因此在血清学检测方面，N蛋白是另一个较好的用于诊断试剂开发的靶点。核酸检测是诊断SARS-CoV-2感染的“金标准”，然而，基于PCR方法的核酸检测在很大程度上依赖于病毒载量，低拷贝的病毒会产生假阴性结果。在低病毒载量情况下，血清学检测可以作为一种与核酸检测相结合、提高检测灵敏度和准确性的有益补充。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》将抗体检测结果纳入确诊病例的诊断标准以及疑似病例的排除标准。目前，S蛋白和N蛋白是SARS-CoV-2血清学诊断的主要抗原位点，并已有几十家公司的检测试剂盒上市。大部分是以S蛋白为检测靶点，如万泰生物、博奥赛斯的试剂盒，N蛋白为检测靶点的试剂盒有伯乐、罗氏的检测试剂盒，也有同时以S蛋白和N蛋白为靶点的，如Sugentech、TBG、Biocan等公司开发的检测试剂盒。SARS-CoV-2的NSP7蛋白的主要功能是与NSP8蛋白和RdRp蛋白形成复合物，发挥引物酶的作用参与病毒复制的过程(Nature2020May21；584(7819):154-156)。在新型冠状病毒肺炎患者中，NSP7并没有引起太强的免疫反应，因此没有针对NSP7开发的诊断试剂盒(NatureCommunications2020Jul14；11(1):3581)。由于灭活病毒含有与活病毒相同的免疫原，理论上已有的新冠感染的血清学诊断试剂，例如针对S蛋白和N蛋白的试剂，恐怕将不能有效的区分新冠灭活疫苗的接种者与新冠肺炎感染者，因此在灭活疫苗大规模接种的大背景下，新冠感染的血清学诊断试剂及原有的标准将不再适用。为了解决行数问题，我们需要一种可靠、简单和成本效益高的替代诊断标志物，可同时在个体和群体层面区分新型冠状病毒感染和新冠病毒灭活疫苗的接种。
技术实现思路
在灭活疫苗大规模接种的大背景下，为了在个体和群体层面区分新型冠状病毒感染和新冠病毒灭活疫苗的接种，本专利技术提供一种诊断标志物及其在区分新型冠病毒感染和新型冠状病毒灭活疫苗接种的试剂盒中的应用，该诊断标志物为一种蛋白质N蛋白(SEQIDNO:1)、NSP7蛋白(SEQIDNO:2)或N蛋白(SEQIDNO:1)和NSP7蛋白(SEQIDNO:2)的组合，用其来定量检测人血液样本中抗该蛋白的IgG抗体的水平，作为在灭活疫苗大规模接种的背景下，区分感染和疫苗接种的一种手段，有望大大提高区分新型冠病毒感染和新型冠状病毒灭活疫苗接种的敏感性和特异性，并大大降低单份样本检测的成本。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：蛋白芯片作为一种系统性的分析工具，其高效的解析能力不容小觑。本专利技术尝试将本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诊断标志物在制备区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种的产品中的应用，其特征在于，所述诊断标志物为新型冠状病毒N蛋白和/或NSP7蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种诊断标志物在制备区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种的产品中的应用，其特征在于，所述诊断标志物为新型冠状病毒N蛋白和/或NSP7蛋白。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，
编码所述N蛋白的氨基酸序列为：SEQIDNO:1或与SEQIDNO：1具有80％以上同源性的序列；
编码所述NSP7蛋白的氨基酸序列为：SEQIDNO:2或与SEQIDNO：2具有80％以上同源性的序列。


3.一种区分新冠病毒感染和新冠病毒灭活疫苗接种的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的诊断标志物。


4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准品、包被缓冲液、封闭液、样品稀释液、终止液、酶标试剂、酶底物溶液和洗涤液。


5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒中，诊断标志物抗原采用包被缓冲液稀释，所述包被缓冲液为0.05±0.005M、pH9.6±0.05的碳酸盐缓冲液，即每1L溶液中含1.59gNa2CO3，2.93gNaHCO3；
所述封闭液为含3％牛血清白蛋白的0.01±0.005M、pH7.4±0.05的磷酸盐-NaCl缓冲液(PBS)溶液，即每1L中含有5g牛血清白蛋白(BSA)，8gNaCl，0.2gKH2PO4，2.9gNa2HPO4·12H2O，0.2gKCl。


6.根据权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液包括：显色剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶生策，马明亮，
申请(专利权)人：上海真测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31