本实用新型专利技术公开了一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，所述的试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被板存放槽(2)、质控品存放槽(3)、阳性对照液孔槽(4)、阴性对照液孔槽(5)、羊抗猪IgG酶标抗体孔槽(6)、浓缩洗涤液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、显色液孔槽(9)、终止液孔槽(10)和操作说明书存放槽(11)；抗原包被板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，各孔槽中(3‑10)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(11)内放置操作说明书。本实用新型专利技术的试剂盒引入质控品，从而确保试剂盒的每次检测都是准确和可控的，进一步加强试剂盒的质量控制和准确性控制。此外，本实用新型专利技术的试剂盒稳定性好、灵敏度高、特异性强，能够适用于大规模临床检测。
【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒
本技术属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒。
技术介绍
猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus,PCV-2)被认为是猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、增生性坏死性肺炎(PNP)、猪皮肤与肾病综合征(PDNS)、猪呼吸系统疾病综合征(PRDC)、繁殖障碍、先天性震颤及肠炎等疾病的主要病原，统称猪圆环病毒2型相关疾病，而且PCV-2感染引起免疫抑制，极易导致其它病原混合感染或继发感染，是目前严重危害养猪业的病原之一。在我国，目前几乎100％猪场为猪圆环病毒2型阳性。PCV2是目前已知的最小的病毒之一，其基因组是一条共价闭合的单链DNA，约1.76kb～1.77kb。PCV2有11个开放阅读框(openreadingframes，ORFs)，然而仅有三个开放阅读框被认为可以编码蛋白。其中ORF2又称为Cap基因，位于互补链上，呈逆时针方向，负责编码唯一的结构蛋白Cap，其氨基酸长度为233aa～234aa。Cap蛋白也是PCV2的主要抗原，能诱导中和抗体的产生。因此，Cap蛋白是目前PCV2免疫评价最为理想的靶蛋白。但是，目前市面流行的用于评价PCV2免疫效果的试剂盒仅有阳对和阴对，不带有质控品，不能确保每一次检测的准确性和重复性，因此对PCV2疫苗免疫后的实际情况的评价可能存在一定的误测。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本技术的目的是提供一种能够准确评价PCV2-Cap蛋白的抗体的试剂盒，以弥补现有试剂盒技术的不足。因此，本技术一方面提供了一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，所述的试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被板存放槽(2)、质控品存放槽(3)、阳性对照液孔槽(4)、阴性对照液孔槽(5)、羊抗猪IgG酶标抗体孔槽(6)、浓缩洗涤液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、显色液孔槽(9)、终止液孔槽(10)和操作说明书存放槽(11)；抗原包被板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，各孔槽中(3-10)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(11)内放置操作说明书。优选地，本技术所述的抗原包被板为包被有PCV2-Cap蛋白的酶标板，所述的抗原包被板上PCV2-Cap蛋白的包被浓度为200ng/孔/100μL，每个试剂盒含有2块或5块抗原包被板。优选地，本技术所述的样品稀释液为含有2％BSA的1×PBST溶液，每个试剂盒含有80mL/瓶或200mL/瓶。优选地，本技术所述的浓缩洗涤液为25×PBST溶液，在使用前稀释到1×PBST溶液，每个试剂盒含有30mL/瓶或60mL/瓶。优选地，本技术所述的羊抗猪IgG酶标抗体为使用样品稀释液对商品化的羊抗猪IgG酶标抗体进行20000倍稀释后所得，每个试剂盒含有25mL/瓶或60mL/瓶。优选地，本技术所述的显色液为TMB单组分溶液，每个试剂盒含有25mL/瓶或60mL/瓶。优选地，本技术所述的终止液为2MH2SO4溶液，每个试剂盒含有12mL/瓶或30mL/瓶。优选地，本技术所述的阳性对照为PCV2抗体OD450nm值在0.9～1.5之间的阳性血清；所述的阴性对照为PCV2抗体OD450nm值小于0.2的阴性血清；每个试剂盒阳性对照和阴性对照均含有1mL/管或3mL/管。优选地，本技术所述的质控品包括质控品1、质控品2和质控品3，所述的质控品1为S/P值在1.5～2.0之间的强阳性血清；所述的质控品2为S/P值在0.5～1.0之间的弱阳性血清；所述的质控品3为S/P值小于0.35的阴性血清；每个试剂盒质控品1、质控品2、质控品3均含有1mL/管或3mL/管。本技术的试剂盒引入质控品(质控品1、质控品2、质控3)，对试剂盒的每次检测不仅仅有阴、阳性对照的校正外，还有3个质控品(强阳、弱阳和阴性)的校正，从而确保试剂盒的每次检测都是准确和可控的，进一步加强试剂盒的质量控制和准确性控制。此外，本技术的试剂盒稳定性好、灵敏度高、特异性强，能够适用于大规模临床检测。附图说明图1试剂盒模式图。图2质控品存放槽(3)中质控品的具体摆放位置。具体实施方式下面结合附图对本技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例中未进行详细说明的实验方法，通常按照本
常规操作或按照厂商建议的条件进行。实施例中涉及的试剂及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品。实施例1PCV2-Cap蛋白的制备本技术所用的PCV2-Cap蛋白来源于专利号为201710602362.1的专利技术专利，具体制备方法参考该专利的相关实施例。实施例2猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒的制备与使用1抗原包被板的制备1.1酶联反应板的来源及标准购自美国Corning公司的COSTAR酶标板，规格为8孔×12列。1.2包被将PCV2-Cap蛋白用包被缓冲液(称取0.15g碳酸钠、0.293g碳酸氢钠，溶解后调节pH值到9.6，然后加双蒸水至100mL，混合均匀，0.22μm滤膜过滤除菌，定量分装)稀释到2μg/mL，混匀后加入酶标板，100μL/孔，37℃湿盒内(工厂化生产，空气湿度保持65％～70％)孵育1小时后4℃过夜(12～14小时)。取出，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤3次，300μL/孔，每次静置30秒，拍干。1.3封闭向酶标板内加入封闭液(称取0.27g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾、3.58g十二水磷酸氢二钠、8.0g氯化钠，溶于800mL双蒸水中，添加0.5mL吐温-20、终浓度为0.01％(m/V)的ProClin300和终浓度为1％(m/V)BSA，溶解后调节pH值到7.2，然后加双蒸水至1L，混合均匀，0.22μm滤膜过滤除菌，定量分装)300μL/孔，37℃湿盒中(工厂化生产，空气湿度保持65％～70％)孵育120分钟。取出弃去封闭液，用洗涤液洗涤3次，300μL/孔，每次静置30秒。1.4干燥酶标板装架，37℃条件下烘干30分钟。1.5装袋将酶标板、干燥剂装入铝箔袋，真空后密封。2阳性对照的制备2.1制备用动物：3日龄的仔猪3头，对应母猪产前7天采血进行PEDV、CSFV、FMDV、PCV2、PRV、PRRSV、TGEV抗体筛查，挑选全部阴性母猪所产的健康仔猪；2.2免疫原的制备：取商品化的猪圆环病毒2型灭活疫苗，按时说明书进行稀释；2.3免疫程序：对3头猪进行颈部肌肉多点注射重组疫苗1mL，14日后进行二免，方法及剂量与首次相同，二免后每隔7天采血，采用IFA法进行血清PCV2抗体检测；2.4效价测定：采用IFA法测定血清效价，选择PCV2IFA抗体不低于1:100的猪用于阳性血清制备；2.5阳性血清制备：对满足条件本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被板存放槽(2)、质控品存放槽(3)、阳性对照液孔槽(4)、阴性对照液孔槽(5)、羊抗猪IgG酶标抗体孔槽(6)、浓缩洗涤液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、显色液孔槽(9)、终止液孔槽(10)和操作说明书存放槽(11)；抗原包被板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，各孔槽中(3-10)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(11)内放置操作说明书。/n
【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒有一个盒体(1)，盒体(1)内设有抗原包被板存放槽(2)、质控品存放槽(3)、阳性对照液孔槽(4)、阴性对照液孔槽(5)、羊抗猪IgG酶标抗体孔槽(6)、浓缩洗涤液孔槽(7)、样品稀释液孔槽(8)、显色液孔槽(9)、终止液孔槽(10)和操作说明书存放槽(11)；抗原包被板存放槽(2)内放置抗原包被反应板，各孔槽中(3-10)放置装有相应溶液的试剂瓶，操作说明书存放槽(11)内放置操作说明书。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗原包被板为包被有PCV2-Cap蛋白的酶标板，所述的抗原包被板上PCV2-Cap蛋白的包被浓度为200ng/孔/100μL，每个试剂盒含有2块或5块抗原包被板。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的样品稀释液为含有2％BSA的1×PBST溶液，每个试剂盒含有80mL/瓶或200mL/瓶。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的浓缩洗涤液为25×PBST溶液，在使用前稀释到1×PBST溶液，每个试剂盒含有30mL/瓶或60mL/瓶。
5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶思锐，查银河，舒建洪，陈勇锋，童夏霞，盛敏成，
申请(专利权)人：浙江洪晟生物科技股份有限公司，浙江理工大学绍兴生物医药研究院有限公司，浙江海隆生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江;33
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