一种诊断标志物及其在新型冠状病毒灭活疫苗保护效果评估中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种诊断标志物及在新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果评估中的应用。所述诊断标志物包括肽段VSP001，或VSP 001和VSP002的组合，所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。基于本发明专利技术的诊断标志物应用间接法定量检测人血清中抗肽段的IgG抗体水平。基于本发明专利技术所建立的检测试剂盒可作为评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果的一种辅助手段。

【技术实现步骤摘要】
一种诊断标志物及其在新型冠状病毒灭活疫苗保护效果评估中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种诊断标志物及其在新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果评估中的应用，尤其涉及肽段VSP001及其衍生物，或VSP001和VSP002及其衍生物组合在评估新型冠状病毒灭活疫苗保护效果的诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
SARS-CoV-2为一种新型的β属冠状病毒新毒株，可跨越物种屏障感染人类，可通过密切接触、呼吸道飞沫、高浓度气溶胶传播，引起以肺部病变为主的传染病，也可诱发包括神经系统和消化系统在内的全身性损伤，严重者可导致死亡(Lancet.2020Feb15；395(10223):514-523)。世界各地的人们都在拼命希望恢复正常的生活。为了实现这一目标，最好的，也许是唯一的办法是通过世界范围的疫苗接种获得群体免疫。我们正在见证人类历史上迄今为止针对一种新出现的病原体(SARS-CoV-2)的最快速的疫苗开发(NatRevImmunol.2020Dec18:1–10；NatRevImmunol.2020Oct；20(10):615-632)。根据COVID-19疫苗追踪网站(https://covid19.trackvaccines.org)，到2021年3月1日共有12种疫苗获准紧急使用，89种疫苗正在进行临床试验。这些疫苗可分为几种主要策略，包括RNA/DNA疫苗(NEnglJMed.2020Dec31；383(27):2616-2627；NatCommun.2020May20；11(1):2601)、亚单位疫苗(Cell.2020Aug6；182(3):722-733.e11；NEnglJMed.2020Dec10；383(24):2320-2332)和灭活病毒疫苗(Science.2020Jul3；369(6499):77-81；Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9；JAMA.2020Sep8；324(10):951-960)。在这些疫苗中，灭活疫苗具有高效、安全、低成本、高可行性等优点，被认为是最有前途的选择之一。目前临床试验的SARS-CoV-2灭活病毒疫苗有9种，其中6种为Ⅲ期，即CoronaVac(Science.2020Jul3；369(6499):77-81)、武汉生物制品研究所灭活病毒疫苗(LancetInfectDis.2021Jan；21(1):39-51)、BBIBP-CorV(Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9；LancetInfectDis.2021Jan；21(1):39-51)。BBIBPCorV已经获得中国、巴林、埃及、伊拉克、约旦、巴基斯坦、塞舌尔和阿联酋等国家的批准。这些灭活的病毒疫苗可以在多种动物模型中引发深刻的抗体反应，包括非人灵长类动物(NHPs)和人类。然而，未观察到NHPs和人类中TH1或TH2细胞应答的特异性诱导(NatRevImmunol.2020Dec18:1–10)。众所周知，有效抗体反应的刺激是良好灭活疫苗候选者的标志，也可能是灭活SARS-COV-2疫苗有效性的主要机制(Cell.2020Aug6；182(3):713-721.e9)在新冠疫苗大规模免疫接种后，迫切地需要一种成本效益高的检测方法可同时在个体层面和群体层面快速、简单且有效地评估疫苗接种对SARS-CoV-2感染的保护效果。最可靠的测试是对真实病毒的中和活性测定，然而，由于真病毒测试需要三级生物安全设施，实际上不可能对大量样本进行测定。即使是对假病毒的中和检测，其实验技术要求高、成本高，仍然限制了其应用。其他方法包括针对峰值蛋白或RBD结构域测试IgG，例如sVNT分析(NatBiotechnol.2020Sep；38(9):1073-1078)。sVNT具有良好的性能，但需要活性RBD和hACE2，难以制备和维护，因此阻碍了sVNT的大规模应用。若能够找到不需要考虑蛋白结构的肽来代替完整的蛋白，那么将大大简化免疫检测的关键材料的准备，并且有可能在不降低灵敏度的情况下提高特异性，因此，寻找关键抗原蛋白位点所对应的肽段是实现这一设想的关键突破口。
技术实现思路
针对现存的技术问题以及更准确的新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果评估诊断标志物发现的需要，本专利技术提供一种诊断标志物及其在新型冠状病毒灭活疫苗评估中的应用，尤其为一种肽VSP001(肽序列为PPAYTNSFTRGV)，或VSP001(肽序列为PPAYTNSFTRGV)和VSP002(肽序列为PSKRSFIEDLLF)在评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果的试剂盒中的应用，来定量检测人血液样本中抗该肽的IgG抗体的水平，作为评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果评估的一种手段，有望大大提高新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果检测的敏感性和特异性，并大大降低单份样本检测的成本。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：肽芯片作为一种系统性的分析工具，其高效的解析能力不容小觑。本专利技术尝试将SARS-CoV-2的S蛋白的S1和S2部分(总长为1273个氨基酸，参考序列NCBIGenBank:MN908947.3)切割成～200条小肽并进行了化学合成，在每条小肽的N端添加半胱氨酸，偶联至牛血清白蛋白(BSA)表面，将偶联产物固定于芯片表面，接种灭活疫苗的健康人血清孵育，针对血清中的IgG进行免疫检测，并与接种灭活疫苗的健康人血清的新冠病毒中和效果对比，最终筛选出能够评估疫苗效果的肽，以期得到有效的新型冠状病毒灭活疫苗评估标志物。第一方面，本专利技术提供了评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果的诊断标志物，所述诊断标志物包括肽段VSP001，或VSP001和VSP002的组合；所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列；所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。优选地，所述肽段VSP001的氨基酸序列为PPAYTNSFTRGV，或包含氨基酸序列PPAYTNSFTRGV中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列；所述肽段VSP002的氨基酸序列为PSKRSFIEDLLF，或包含氨基酸序列PSKRSFIEDLLF中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列。本专利技术所述的肽段VSP001和VSP002的制备方法包括但不限于化学合成、重组表达或其它方式，优选为化学合成。本专利技术通过检测病人体液中的肽段VSP001，或VSP001和VSP002的抗体(包括IgM，IgG和IgA，优选IgG型抗体)，用于评估接种新型冠状病毒灭活疫苗后是否有效。所述检测的样本包括但不限于全血、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物包括肽段VSP001或VSP001和VSP002的组合；/n所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列/n所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后保护效果的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物包括肽段VSP001或VSP001和VSP002的组合；
所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP001的氨基酸序列为：包含PPAYTNSFTRGV中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列
所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段VSP002的氨基酸序列为：包含PSKRSFIEDLLF中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。


2.根据权利要求1所述的评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果的诊断标志物，其特征在于，所述肽段VSP001的氨基酸序列为PPAYTNSFTRGV，或包含氨基酸序列PPAYTNSFTRGV中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列；
所述肽段VSP002的氨基酸序列为PSKRSFIEDLLF，或包含氨基酸序列PSKRSFIEDLLF中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列。


3.一种根据权利要求1所述的诊断标志物在制备评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果的产品中的应用。


4.一种用于评估新型冠状病毒灭活疫苗接种后的保护效果的诊断试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的诊断标志物。


5.根据权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断标志物通过SMCC与BSA偶联，形成SMCC-BSA-肽偶联产物。


6.根据权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括包被缓冲液、封闭液、样品稀释液、终止液、酶标试剂、酶底物溶液和洗涤液。


7.根据权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述肽段VSP001或VSP002抗原采用包被缓冲液稀释，所述包被缓冲液为0.05±0.005M、pH9.6±0....

【专利技术属性】
技术研发人员：陶生策，马明亮，
申请(专利权)人：上海真测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31