【技术实现步骤摘要】
一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法
本专利技术属于核细胞分离
,具体涉及一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法。
技术介绍
单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个细胞核的白细胞,其中包括淋巴细胞和单核细胞。猴来源的PBMC是许多药物测试工作中重要的原材料,但是猴子的白细胞密度与人源的白细胞密度并不完全一致,因此,直接使用1.077g/ml的ficoll分离效果并不十分理想,且现有的分离试剂盒价格较贵。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法,以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的,本专利技术提供如下技术方案:一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法,具体包括以下步骤:步骤1、获取猴血后,添加羟乙基淀粉,混匀沉降20min;步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释;步骤3、取一只50ml离心管,添加20ml稀释过后的ficoll溶液;步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血,且添加过程中注意保持界面的清晰;步骤5、温度20℃,600g离心30min,升速设置为5min,降速设置为10min;步骤6、静置后,弃去上层血清层,收取第三层的白细胞层,转移到另一只离心管里;步骤7、添加DPBS溶液至50ml,450g离心10min洗去杂质;步骤8、重悬细胞沉淀,并计数。优选的,所述步骤1中的羟乙基淀粉为1/4体积的6%羟乙基淀粉。优选的 ...
【技术保护点】
1.一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法,其特征在于:具体包括以下步骤,/n步骤1、获取猴血后,添加羟乙基淀粉,混匀沉降20min;/n步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释;/n步骤3、取一只50ml离心管,添加20ml稀释过后的ficoll溶液;/n步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血,且添加过程中注意保持界面的清晰;/n步骤5、温度20℃,600g离心30min,升速设置为5min,降速设置为10min;/n步骤6、静置后,弃去上层血清层,收取第三层的白细胞层,转移到另一只离心管里;/n步骤7、添加DPBS溶液至50ml,450g离心10min洗去杂质;/n步骤8、重悬细胞沉淀,并计数。/n
【技术特征摘要】
1.一种优化的食蟹猴单个核细胞分离方法,其特征在于:具体包括以下步骤,
步骤1、获取猴血后,添加羟乙基淀粉,混匀沉降20min;
步骤2、将1.077g/ml的ficoll溶液使用DPBS溶液进行稀释;
步骤3、取一只50ml离心管,添加20ml稀释过后的ficoll溶液;
步骤4、在ficoll溶液中缓慢添加20ml沉降过的猴血,且添加过程中注意保持界面的清晰;
步骤5、温度20℃,600g离心30min,升速设置为5min,降速设置为10min;
步骤6、静置后,弃去上层血清层,收取第三层的白细胞层,转移到另一只离心管里;
...
【专利技术属性】
技术研发人员:张英博,
申请(专利权)人:上海赛笠生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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