一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，启动驱动电机工作，带动主动齿轮转动，主动齿轮通过啮合作用带动从动齿轮进行转动，从动齿轮上安装有连接杆，连接杆沿着竖直槽进行转动，连接杆上的第一球体也随着进行转动，当第一球体与第二球体接触再分离时，会使得第二球体上下移动，第二球体通过滑杆带动滑板上下移动，滑板使得培养皿上下振荡，使得细胞在培养皿内晃动，解决了现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；避免细胞培养温度过高或过低，且该加热机构可以对多组培养皿同时进行加热，大大提高了培养皿加热效率的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法
本专利技术属于细胞培养
，涉及，具体为一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法。
技术介绍
对比文件CN105316287A公开了一种长期储存及复苏培养成人外周血单个核细胞的方法，它涉及成人外周血单个核细胞的分离及其冻存和复苏方法。方法：一、采血袋采集健康成人外周静脉血，并对其中单个核细胞进行分离纯化；二、通过添加冻存细胞所须相关冻存试剂，将分离得到的单个核细胞按照一定密度进行冻存；三、随机抽样对细胞冻存混合液进行细菌、真菌、内毒素和支原体检测；四、复苏细胞并重悬于特殊配制的细胞复苏洗液中，离心清洗两次后进一步培养。由于本专利技术使用的外周血单个核细胞来源于患者自身，实验用到的相关试剂均无外源性物质，不存在涉及相关伦理问题，回输后不会产生免疫排斥反应。本专利技术用于健康成人免疫细胞的存储，为日后进行肿瘤类相关疾病的治疗做储备。现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；且对细胞培养时温度的设置，其结构复杂，灵敏度高，易损坏的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于为了解决现有技术中，无法使得细胞组织在现有的细胞培养装置内进行均匀和摇晃的运作，从而使得细胞在培养过程中效率比较低的问题；且对细胞培养时温度的设置，其结构复杂，灵敏度高，易损坏的问题，而提出一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，包括以下步骤：第一步：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×107个/mL；将稀释后的细胞悬液分装至1.8mL冻存管中，每管添加1mL，并留样待检，将细胞冻存管放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；预留的冻存细胞悬液进行细菌、真菌、内毒素和支原体等指标的检测，指标检测合格后，冻存入库做长期保存；复苏时，将从冻存入库中取出的细胞转入预温至-80℃的冻存盒内后，平衡5min转入37℃水浴融化；将融化后的细胞转移至含质量百分含量为10％人血白蛋白的生理盐水混合液中洗涤，检测细胞活率，之后将细胞重悬于含有质量百分含量为10％人血白蛋白的无血清的培养皿内；第二步：将培养皿置于培养皿置物板11的放置槽内，再将盖板21盖上，对培养皿进行限位，然后打开培养箱的箱门，将培养皿置物板放置在外套上，培养皿置物板上的插板位于到外套的卡槽内，然后连接件的插杆插入到插板上的插槽，实现对培养皿置物板的固定；当培养结束后，通过拉动拉柄，带动滑板移动，使得插杆从插板上的插槽脱离，从而使得对培养皿置物板的拆卸；第三步：启动驱动电机工作，带动主动齿轮转动，主动齿轮通过啮合作用带动从动齿轮进行转动，从动齿轮上安装有连接杆，连接杆沿着竖直槽进行转动，连接杆上的第一球体也随着进行转动，当第一球体与第二球体接触再分离时，会使得第二球体上下移动，第二球体通过滑杆带动滑板上下移动，滑板使得培养皿上下振荡，使得细胞在培养皿内晃动；同时，通过循环进管向加热板注入热源，并从循环出管流出，从而对加热板进行加热，通过气缸工作，控制加热板与培养皿置物板之间的距离，从而对培养温度进行调节，培养皿置物板由导热材料制成的，吸收加热板的热量，并将热量传输到放置槽内，对培养皿进行加热，为细胞培养提供温度。优选的，培养箱的正面上方设置有箱门，培养箱内设置有培养装置，培养装置包括振荡机构和加热机构。优选的，振荡机构包括驱动电机、主动齿轮、从动齿轮、固定柱、固定套、连接杆、外套、固定环、第一球体；外套通过固定环安装在培养箱的内壁上，外套内设置有圆柱形的加热筒，外套的内壁与加热筒的外壁之间设置有环形的竖直槽；培养箱的底面上设置有驱动电机，驱动电机的输出端与主动齿轮连接，主动齿轮与从动齿轮啮合连接，从动齿轮通过轴承套设在固定柱的外壁上，固定柱的底端与固定套连接，固定套安装在培养箱的内壁底面上，从动齿轮的顶面上对称设置有连接杆，连接杆的顶端设置有第一球体；第一球体沿着竖直槽转动。优选的，外套的上方设置有培养皿置物板，培养皿置物板上设置有与培养皿相适配的放置槽，放置槽沿着培养皿置物板环形阵列设置有多组，放置槽内滑动连接有活塞板，活塞板的底面与滑动杆的顶端连接，滑动杆的底端延伸出放置槽，并与培养皿置物板滑动连接，滑动杆的底端与第二球体连接，滑动杆的外壁套设有第一弹簧，第一弹簧的一端活塞板连接，第一弹簧的另一端与放置槽连接，放置槽的上方设置有盖板，盖板由软性材料组成；第二球体与第一球体结构相同，第二球体位于第一球体的上方。优选的，培养皿置物板通过连接件与外套连接，连接件包括套筒、滑杆、第二弹簧、滑板、插杆、拉柄；外套的侧壁对称安装有套筒，外套的顶部设置有与插板相适配的卡槽，套筒的内壁上滑动连接有滑板，滑杆的一端与滑板连接，滑杆延伸出套筒，并与套筒滑动连接，滑杆的另一端与拉柄连接，滑杆上套设有第二弹簧，第二弹簧的一端与滑板连接，第二弹簧的另一端与套筒的内壁连接，滑板远离滑杆的一侧设置有插杆，插杆滑动延伸至卡槽内，插板上设置有与插杆相适配的插槽。优选的，加热机构包括循环进管、循环出管、温度传感器、连接管、伸缩管、加热板、气缸，循环进管和循环出管并排设置，循环进管和循环出管依次穿过固定套、固定柱，并延伸至加热筒的内腔中，循环进管和循环出管分别与连接管的一端连接，连接管的另一端与伸缩管连接，伸缩管竖直设置，两组伸缩管分别安装在加热板的底面两侧；培养皿置物板的中部设置有温度传感器。优选的，加热筒的底面内壁上设置有气缸，气缸的输出端与加热板连接，加热筒的底面设置有开口，加热板位中空结构。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×107个/mL；将稀释后的细胞悬液分装至1.8mL冻存管中，每管添加1mL，并留样待检，将细胞冻存管放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；预留的冻存细胞悬液进行细菌、真菌、内毒素和支原体等指标的检测，指标检测合格后，冻存入库做长期保存；复苏时，将从冻存入库中取出的细胞转入预温至-80℃的冻存盒内后，平衡5min转入37℃水浴融化；将融化后的细胞转移至含质量百分含量为10％人血白蛋白的生理盐水混合液中洗涤，检测细胞活率，之后将细胞重悬于含有质量百分含量为10％人血白蛋白的无血清的培养皿内；将培养皿置于培养皿置物板的放置槽内，再将盖板盖上，对培养皿进行限位，然后打开培养箱的箱门，将培养皿置物板放置在外套上，培养皿置物板上的插板位于到外套的卡槽内，然后连接件的插杆插入到插板上的插槽，实现对培养皿置物板的固定；当培养结束后，通过拉动拉柄，带动滑板移动，使得插杆从插板上的插槽脱离，从而使得对培养皿置物板的拆卸；启动驱动电机工作，带动主动齿轮转动，主动齿轮通过啮合作用带动从动齿轮进行转动，从动齿轮上安装有连接杆，连接杆沿着竖直槽进行转动，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n第一步：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×10

【技术特征摘要】
1.一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：对得到的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；用冻存液重悬外周血单个核细胞进行稀释，使细胞悬液密度达到1～10×107个/mL；将稀释后的细胞悬液分装至1.8mL冻存管中，每管添加1mL，并留样待检，将细胞冻存管放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；预留的冻存细胞悬液进行细菌、真菌、内毒素和支原体等指标的检测，指标检测合格后，冻存入库做长期保存；复苏时，将从冻存入库中取出的细胞转入预温至-80℃的冻存盒内后，平衡5min转入37℃水浴融化；将融化后的细胞转移至含质量百分含量为10％人血白蛋白的生理盐水混合液中洗涤，检测细胞活率，之后将细胞重悬于含有质量百分含量为10％人血白蛋白的无血清的培养皿（20）内；
第二步：将培养皿（20）置于培养皿置物板（11）的放置槽内，再将盖板（21）盖上，对培养皿（20）进行限位，然后打开培养箱（1）的箱门（2），将培养皿置物板（11）放置在外套（10）上，培养皿置物板（11）上的插板（8）位于到外套（10）的卡槽内，然后连接件的插杆（33）插入到插板（8）上的插槽，实现对培养皿置物板（11）的固定；
第三步：启动驱动电机（3）工作，带动主动齿轮（4）转动，主动齿轮（4）通过啮合作用带动从动齿轮（5）进行转动，从动齿轮（5）上安装有连接杆（9），连接杆（9）沿着竖直槽（28）进行转动，连接杆（9）上的第一球体（15）也随着进行转动，当第一球体（15）与第二球体（16）接触再分离时，会使得第二球体（16）上下移动，第二球体（16）通过滑杆（30）带动滑板（32）上下移动，滑板（32）使得培养皿（20）上下振荡，使得细胞在培养皿（20）内晃动；
同时，通过循环进管（13）向加热板（26）注入热源，并从循环出管（14）流出，从而对加热板（26）进行加热，通过气缸（27）工作，控制加热板（26）与培养皿置物板（11）之间的距离，从而对培养温度进行调节，培养皿置物板（11）由导热材料制成的，吸收加热板（26）的热量，并将热量传输到放置槽内，对培养皿（20）进行加热，为细胞培养提供温度。


2.根据权利要求1所述的一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于，培养箱（1）的正面上方设置有箱门（2），培养箱（1）内设置有培养装置，培养装置包括振荡机构和加热机构。


3.根据权利要求2所述的一种长期储存及复苏培养单个细胞的方法，其特征在于，振荡机构包括驱动电机（3）、主动齿轮（4）、从动齿轮（5）、固定柱（6）、固定套（7）、连接杆（9）、外套（10）、固定环（12）、第一球体（15）；外套（10）通过固定环（12）安装在培养箱（1）的内壁上，外套（10）内设置有圆柱形的加热筒（22），外套（10）的内壁与加热筒（22）的外壁之间设置有环形的竖直槽（28）；培养箱（1）的底面上设置有驱动电机（3），驱动电机（3）的输出端与主动齿轮（4）连接，主动齿轮（4）与从动齿轮（5）啮合连接，从动齿轮...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂燕华，徐婉婧，张洁洁，
申请(专利权)人：恩大细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44