用于眼内疾病或病症的动物模型、筛选方法和治疗方法技术

本文提供了与眼内疾病诸如年龄相关性黄斑变性(AMD)相关的筛选方法和动物模型，例如，以用于鉴定治疗或预防眼睛疾病诸如AMD的候选治疗剂。本文还提供了可用于杀灭微生物诸如巨大芽孢杆菌或抑制其生长的化合物/组合物。本文进一步提供了使用所述化合物/组合物来治疗微生物诸如巨大芽孢杆菌的感染以及治疗或预防与此类感染相关的疾病或病症诸如AMD的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于眼内疾病或病症的动物模型、筛选方法和治疗方法对相关申请的交叉引用本申请要求2019年1月7日提交的国际申请号PCT/CN2019/070572和2019年4月25日提交的国际申请号PCT/CN2019/084369以及2018年11月14日提交的中国专利申请号201811351660.9的优先权，这些专利中的每一者的公开内容整体以引用方式并入以用于所有目的。
本专利技术一般属于眼睛疾病的诊断和治疗
，并且更具体地涉及筛选方法、动物模型和治疗或预防眼睛疾病或病症的方法。在多种实施方案中，本公开还涉及用于治疗和/或预防受试者，例如人类患者或脊椎动物诸如狗、猫、马或猴的年龄相关性黄斑变性(AMD)的化合物、组合物和方法。
技术介绍
眼睛是心灵的窗户，眼睛对于每一个人来说都是非常重要的。人们每天都要用到眼睛，但同时眼睛又非常脆弱。很容易因为各种各样的因素，造成眼睛不适或病变。常见的眼睛疾病包括结膜炎和干眼综合征，并且更严重的眼内疾病或病症包括白内障(Cat)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、青光眼(GLA)、白塞病(BD)、伏格特-小柳-原田综合征(VKH)、葡萄膜炎等。在老年人群中，年龄相关性黄斑变性(AMD)是全世界不可逆视力丧失的主要原因。其特征在于在视网膜色素上皮(RPE)与布鲁赫膜之间沉积的融合性软玻璃膜疣和/或早期黄斑中的视网膜色素改变(中期AMD)。在后期阶段，晚期AMD的特征在于两种主要亚型：黄斑中的地图状萎缩(干性AMD)或脉络膜新生血管(湿性AMD)。虽然抗VEGF疗法已用于控制湿性AMD，但目前尚无批准用于干性AMD的疗法。AMD的发病机制既涉及遗传因素也涉及环境因素。目前，在AMD病理中，触发局部炎症并导致早期软玻璃膜疣的环境因素尚不清楚。许多研究已鉴定了与AMD易感性相关的基因座处的变化，这些基因座包括补体因子H(CFH)、年龄相关性黄斑病变易感性2(ARMS2)、HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)，表明AMD可能是炎性疾病。目前，在AMD病理中，触发局部炎症并导致早期软玻璃膜疣的环境因素尚不清楚。需要用于评估、治疗或预防受试者例如哺乳动物或人类的眼内疾病或病症的改进的组合物和方法。本公开解决了这一需求和其他相关的需求。
技术实现思路
在多种实施方案中，本专利技术涉及用于多种眼睛疾病诸如人类眼睛疾病的筛选方法和动物模型。这些筛选方法和动物模型部分地基于以下意外的发现，即眼内环境不是无菌的，某些眼内微生物群诸如巨大芽孢杆菌可以是多种眼睛疾病诸如AMD的病因。在一些实施方案中，本专利技术提供了用于鉴定治疗或预防眼睛疾病诸如AMD的候选治疗剂的筛选方法。该筛选方法可以是体外筛选方法，例如在培养皿中，或体内筛选方法，例如使用本文所述的动物模型。在一些实施方案中，本专利技术提供了筛选方法，该筛选方法包括：a)在测试化合物存在下在合适的培养基中培养微生物；b)在所述测试化合物存在下测量所述培养基中所述微生物的生长；以及任选地c)与对照相比，鉴定抑制所述微生物的生长的候选治疗剂。在一些实施方案中，微生物包括与健康受试者相比在患有眼睛疾病的受试者的眼内空间(例如，前房中的房水、悬韧带、睫状体、睫状体和睫状肌、后房中的玻璃体液、视网膜、脉络膜、视神经、晶状体或虹膜)中富集的物种，其中眼睛疾病选自年龄相关性黄斑变性(AMD)、白塞病(BD)、白内障(Cat)、眼内炎(EOS)、青光眼(GLA)、伏格特-小柳-原田综合征(VKH)以及它们的组合。在一些实施方案中，受试者是人类受试者。在一些实施方案中，该方法用于鉴定治疗或预防人类眼睛疾病诸如AMD、BD、Cat、EOS、GLA、VKH或它们的组合的候选治疗剂。在一些具体实施方案中，该筛选方法用于鉴定治疗或预防AMD的候选治疗剂。在一些实施方案中，微生物包括与健康受试者相比在患有AMD的受试者的眼内空间(例如，房水、玻璃体液、软玻璃膜疣)中富集的物种。在一些实施方案中，微生物包括选自以下的一种或多种物种：表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、溶血葡萄球菌(Staphylococcushaemolyticus)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)、阴道加德纳菌(Gardnerellavaginalis)、屎肠球菌(Enterococcusfaecium)、哈氏噬纤维菌(Cytophagahutchinsonii)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)和稻黄单胞菌(Xanthomonasoryzae)。在一些实施方案中，微生物包括巨大芽孢杆菌和/或恶臭假单胞菌。在一些实施方案中，微生物至少包括巨大芽孢杆菌。在一些实施方案中，微生物包括微生物物种的混合物，所述微生物物种基本上类似于从患有AMD的受试者的房水、玻璃体液和/或软玻璃膜疣观察到的那些。在一些实施方案中，微生物部分或全部来源于患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水和/或玻璃体液。用于鉴定治疗或预防其他眼睛疾病诸如BD、Cat、EOS、GLA、VKH的候选治疗剂的筛选方法类似于针对AMD所述的那些方法，但是使用不同的微生物，如本文详述。例如，对于BD，在测试化合物存在下培养的微生物通常可以包括选自以下的一种或多种物种：维氏鞘氨醇单胞菌(Sphingomonaswittichii)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)、皮氏罗尔斯顿菌(Ralstoniapickettii)、卷曲乳酸杆菌(Lactobacilluscrispatus)、多噬伯克霍尔德菌(Burkholderiamultivorans)、德氏乳酸杆菌(Lactobacillusdelbrueckii)和西尔氏亚栖热菌(Meiothermussilvanus)(D)。对于Cat，在测试化合物存在下培养的微生物通常可以包括选自以下的一种或多种物种：门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)、坐皮肤球菌(Kytococcussedentarius)、脱氮嗜脂环物菌(Alicycliphilusdenitrificans)、木糖氧化无色杆菌(Achromobacterxylosoxidans)、日本鞘氨醇菌(Sphingobiumjaponicum)、脓肿分枝杆菌(Mycobacteriumabscessus)、金黄节杆菌(Arthrobacteraurescens)、牙普雷沃菌(Prevotelladentalis)、苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)和埃布瑞斯食酸菌(Acidov本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种筛选方法，所述筛选方法包括：/na)在测试化合物存在下在合适的培养基中培养微生物；/nb)在所述测试化合物存在下测量所述培养基中所述微生物的生长；以及任选地/nc)与对照相比，鉴定抑制所述微生物的生长的候选治疗剂，/n其中所述微生物包括与健康受试者相比在患有年龄相关性黄斑变性(AMD)的受试者的眼内空间(例如，前房中的房水、悬韧带、睫状体、睫状体和睫状肌、后房中的玻璃体液、视网膜、脉络膜、视神经、晶状体或虹膜)中富集的物种。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181114 CN 2018113516609;20181203 CN PCT/CN2018/11.一种筛选方法，所述筛选方法包括：
a)在测试化合物存在下在合适的培养基中培养微生物；
b)在所述测试化合物存在下测量所述培养基中所述微生物的生长；以及任选地
c)与对照相比，鉴定抑制所述微生物的生长的候选治疗剂，
其中所述微生物包括与健康受试者相比在患有年龄相关性黄斑变性(AMD)的受试者的眼内空间(例如，前房中的房水、悬韧带、睫状体、睫状体和睫状肌、后房中的玻璃体液、视网膜、脉络膜、视神经、晶状体或虹膜)中富集的物种。


2.根据权利要求1所述的筛选方法，其中所述微生物包括选自以下的一种或多种物种：表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、恶臭假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、罗伊氏乳杆菌、阴道加德纳菌、屎肠球菌、哈氏噬纤维菌、地衣芽孢杆菌和稻黄单胞菌。


3.根据权利要求1所述的筛选方法，其中所述微生物包括巨大芽孢杆菌和/或恶臭假单胞菌。


4.根据权利要求1所述的筛选方法，其中所述微生物包括微生物物种的混合物，所述微生物物种基本上类似于从患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水、玻璃体液和/或软玻璃膜疣观察到的那些。


5.根据权利要求1所述的筛选方法，其中所述微生物部分或全部来源于患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水和/或玻璃体液。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的筛选方法，其中筛选多种测试化合物，并且其中所述多种测试化合物包括不是已知的广谱抗生素或对所述微生物的一种或多种物种具有功效的已知抗生素的至少一种测试化合物。


7.根据权利要求6所述的筛选方法，其中所述测试化合物不是氨苄青霉素、万古霉素、新霉素、甲硝唑或四环素。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的筛选方法，其中所述鉴定包括鉴定在最大测试浓度或低于最大测试浓度时防止所述微生物的可见生长的候选治疗剂。


9.根据权利要求1-7中任一项所述的筛选方法，其中所述鉴定包括鉴定在最大测试浓度或低于最大测试浓度时防止所述微生物的可见集落形成的候选治疗剂。


10.一种筛选方法，所述筛选方法包括：
a)确定或已确定与健康受试者相比在患有年龄相关性黄斑变性(AMD)的受试者的眼内空间中富集的一种或多种微生物物种；
b)在测试化合物存在下在合适的培养基中培养包括所富集的微生物物种中的至少一种的微生物；
c)在所述测试化合物存在下测量所述培养基中所述微生物的生长；以及任选地
d)与对照相比，鉴定抑制所述微生物的生长的候选治疗剂。


11.根据权利要求10所述的筛选方法，其中所述微生物包括微生物物种的混合物，所述微生物物种基本上类似于从患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水、玻璃体液和/或软玻璃膜疣观察到的那些。


12.根据权利要求1-11中任一项所述的筛选方法，其中所述受试者是人类受试者。


13.一种制作动物模型的方法，所述方法包括将微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质引入动物的眼睛的眼内空间，其中所述微生物包括与健康受试者相比在患有年龄相关性黄斑变性(AMD)的受试者的眼内空间中富集的物种。


14.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物包括选自以下的一种或多种物种：表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、恶臭假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、罗伊氏乳杆菌、阴道加德纳菌、屎肠球菌、哈氏噬纤维菌、地衣芽孢杆菌和稻黄单胞菌。


15.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物包括巨大芽孢杆菌和/或恶臭假单胞菌。


16.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物包括微生物物种的混合物，所述微生物物种基本上类似于从患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水、玻璃体液和/或软玻璃膜疣观察到的那些。


17.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物部分或全部来源于患有年龄相关性黄斑变性的受试者的房水和/或玻璃体液。


18.根据权利要求13-17中任一项所述的方法，其中所述动物是非人灵长类动物(例如，猴)。


19.根据权利要求13-17中任一项所述的方法，其中所述动物不是猕猴。


20.根据权利要求13-19中任一项所述的方法，其中将所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质注射到所述动物的视网膜下空间中。


21.根据权利要求13-20中任一项所述的方法，其中注射所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质以引起例如在所述动物的视网膜组织上的玻璃膜疣样病变。


22.根据权利要求13-21中任一项所述的方法，其中注射所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质以例如在所述动物的所述眼睛中的视网膜色素上皮层下方引起玻璃膜疣状结节。


23.根据权利要求13-22中任一项所述的方法，其中注射所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质以例如在所述动物的所述眼睛中引起视网膜色素上皮细胞的细胞焦亡。


24.根据权利要求13-23中任一项所述的方法，其中注射所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质以在所述动物的所述眼睛中引起补体系统的激活和/或炎症，例如，C5A、CFH、半胱天冬酶1和NLRP3蛋白质的表达升高。


25.根据权利要求13-24中任一项所述的方法，其中注射所述微生物和/或来自所述微生物的灭活蛋白质以例如在所述动物的所述眼睛中引起视网膜色素上皮细胞对活性IL-1β和/或IL-18的分泌。


26.一种动物模型，所述动物模型通过根据权利要求13-25中任一项所述的方法产生。


27.一种筛选方法，所述筛选方法包括：
a)向根据权利要求26所述的动物模型施用测试化合物；
b)确定施用后眼睛疾病的一种或多种症状的严重程度；以及任选地
c)鉴定与对照相比减轻所述症状中的至少一种的候选治疗剂。


28.根据权利要求27所述的筛选方法，其中所述测试化合物口服、局部、玻璃体内、肌内、皮下或静脉内施用。


29.根据权利要求27或28所述的筛选方法，其中所述鉴定包括鉴定候选治疗剂，当与对照相比时，所述候选治疗剂a)减少例如在所述动物的视网膜组织上的玻璃膜疣样病变；b)减少例如在所述动物的所述眼睛中的视网膜色素上皮层下方的玻璃膜疣状结节；c)减少在所述动物的所述眼睛中视网膜色素上皮细胞的细胞焦亡；d)减少所述动物的所述眼睛中补体系统的激活和/或炎症，例如，降低C5A、CFH、半胱天冬酶1和NLRP3蛋白质的表达；e)减少所述动物的所述眼睛中视网膜色素上皮细胞对活性IL-1β和/或IL-18的分泌；或f)a)-e)的任何组合。


30.根据权利要求27-29中任一项所述的筛选方法，其中所述鉴定包括鉴定候选治疗剂，当与对照相比时，所述候选治疗剂杀灭所述动物模型的所述眼睛(例如，眼内空间或腔体)、血液和/或胃肠道诸如肠中的所述微生物或抑制其生长。


31.根据权利要求27-30中任一项所述的筛选方法，其中所述测试化合物经预筛选能有效抑制所述微生物的生长。


32.有效量的抗生素用于治疗或预防受试者的AMD的用途，其中所述受试者被鉴定为例如在眼内空间中感染了选自以下的一种或多种物种：表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、恶臭假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、罗伊氏乳杆菌、阴道加德纳菌、屎肠球菌、哈氏噬纤维菌、地衣芽孢杆菌和稻黄单胞菌。


33.有效量的抗生素在有需要的受试者中用于治疗玻璃膜疣症状(例如，软玻璃膜疣)的用途。


34.有效量的抗生素在有需要的受试者中用于减少眼睛中的玻璃膜疣样病变、玻璃膜疣状结节、视网膜色素上皮细胞的细胞焦亡；眼睛中补体系统的激活和/或炎症，和/或眼睛中视网膜色素上皮细胞对活性IL-1β和/或IL-18的分泌的用途。


35.根据权利要求33或34所述的用途，其中(a)所述受试者患有AMD(例如，干性AMD或湿性AMD)；(b)所述受试者在视网膜色素上皮(RPE)与布鲁赫膜之间沉积有软玻璃膜疣；和/或在黄斑中具有视网膜色素改变；(c)所述受试者在眼内空间中感染了与健康受试者相比在AMD患者的眼内空间中富集的一种或多种物种；或(d)所述受试者在眼内空间中感染了选自以下的一种或多种物种：表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、恶臭假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、罗伊氏乳杆菌、阴道加德纳菌、屎肠球菌、哈氏噬纤维菌、地衣芽孢杆菌和稻黄单胞菌。


36.一种用于筛选化合物或化合物的组合在治疗或预防眼部疾病方面的功效的方法，所述方法包括：
获得取自受试者的房水或玻璃体液的样品，所述受试者选自患有所述眼部疾病的受试者、患有所述眼部疾病的受试者的家族成员或紧密遗传关系，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，魏来，欧阳晖，
申请(专利权)人：珠海岐微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44