一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法，本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术首次使用同位素稀释质谱法对TIMP1标准物质进行绝对定量分析，填补了现有技术空白，对TIMP1标准物质的溯源分析研究和质控体系建立具有重要意义；本发明专利技术结合了质谱平行反应监测模式，在高分辨精度下采集数据，相比于常规的多反应监测模式(MRM)，显著减小了基质共流出物对肽段分析的干扰；本发明专利技术提供的分析方法对其他蛋白类标准物质的定值和溯源分析研究具有指导借鉴意义。

【技术实现步骤摘要】
一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法
本专利技术涉及一种蛋白质分析检测技术，具体涉及一种基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1蛋白)标准物质的质谱分析方法。
技术介绍
基质金属蛋白酶抑制因子1(Tissueinhibitorofmetalloproteinases1，TIMP1)可以通过抑制金属蛋白酶的活性，广泛参与组织重构和肿瘤血管生成、肿瘤细胞的侵袭和转移的发展，是一种重要的癌症早期诊断和预后生物标志物。临床检测中对TIMP1的定量测定结果是否可靠，取决于该蛋白标准物质定值的准确性。常用的蛋白浓度测定方法如考马斯亮蓝法、Folin-酚试剂法、BCA法具有选择性差、灵敏度和准确度低的缺点。质谱法是近年来蛋白质分析领域逐渐发展起来的一种新技术，其专属性强、精密度高、结果准确可靠，其中同位素稀释质谱法是目前蛋白类标准物质定值的基准方法。本专利技术采用同位素稀释质谱法，对TIMP1蛋白标准物质进行绝对定量分析，填补了该领域的技术空白，具有良好的准确性、可靠性和溯源性。
技术实现思路
本申请的主要目的在于提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)选取两条特征肽段GFQALGDAADIR和SEEFLIAGK用于TIMP1蛋白定量；/n(2)使用稳定同位素

【技术特征摘要】
1.一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取两条特征肽段GFQALGDAADIR和SEEFLIAGK用于TIMP1蛋白定量；
(2)使用稳定同位素13C和15N对上述特征肽段GFQALGDAADIR的精氨酸进行标记，得到对应的内标肽段GFQALGDAADIR*13C6,15N4；使用稳定同位素13C和15N对上述特征肽段SEEFLIAGK的赖氨酸进行标记得到对应的内标肽段SEEFLIAGK*13C6,15N2；
(3)优化与建立TIMP1的特征肽段和内标肽段的质谱分析方法；
(4)建立标准曲线：将步骤(1)和步骤(2)所述的特征肽段和内标肽段溶解后按一定比例混合，分别进行质谱分析，并建立标准曲线；
(5)TIMP1蛋白样本的处理及分析：将TIMP1蛋白样本依次经还原、烷基化、酶解、干燥复溶处理，处理产物使用质谱分析，并对TIMP1蛋白进行绝对定量分析。


2.根据权利要求1所述的一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法，其特征在于，步骤(3)中，TIMP1的特征肽段和内标肽段的质谱方法的优化和建立流程为：
将权利要求1所述的特征肽段和内标肽段分别进行纳升液相色谱-质谱分析，并在平行反应监测模式下采集数据；通过Skyline软件分析上述平行反应监测模式下采集的数据，选取每个肽段母离子碎裂后峰强度最高的5个碎片离子作为对应的目标肽段子离子，完成TIMP1的特征肽段和内标肽段的离子对的筛选和优化。


3.根据权利要求2所述的一种TIMP1蛋白标准物质的质谱分析方法，其特征在于，纳升液相色谱-质谱分析方法为：
分析柱为C18毛细管色谱柱3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高俊顺，江南，宋林珍，王洪，高俊莉，
申请(专利权)人：杭州广科安德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33