一种用于体外保存T记忆性干细胞的储存液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于体外保存T记忆性干细胞的储存液及其应用。本发明专利技术所要保护的一个技术方案是用于体外保存T记忆性干细胞的组合物。所述组合物的活性成分由TWS119、IL‑7和IL‑15组成。所述组合物中，TWS119、IL‑7和IL‑15的配比可为TWS119 1.5～3nmol，IL‑7 3～10ng，IL‑15 3～10ng。实验证明，使用含有该组合物的储存液与使用常用储存液相比，含有该组合物的储存液可以在体外短时间内保存T

【技术实现步骤摘要】
一种用于体外保存T记忆性干细胞的储存液及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于体外保存T记忆性干细胞的储存液及其应用。
技术介绍
T记忆性干细胞(Tmemorystemcell，TSCM)是近年来发现的分化早期的T细胞亚群，同时具有干细胞和记忆性T细胞的特性，干细胞特征表现为自我更新和分化的潜能，而记忆性T细胞特征是指在抗原再次刺激时，TSCM细胞迅速增殖分化为效应性T细胞，介导细胞因子产生和细胞毒效应，并在短时间内清除抗原。TSCM在体内具有良好的植入性，并可以分化为各种记忆性和效应性T细胞。TSCM具有极高的干细胞特点，即强大的自我更新能力、抗凋亡能力以及定向增殖及分化潜能。因此，TSCM显示出高效和持久的抗肿瘤和感染疾病的潜力，是过继治疗的理想种子细胞，具有较强的应用前景。。TSCM仅占人外周血单个核细胞的2％-4％，制备足够数量的TSCM并在体外一定时间内保存其活性是其应用的前提。因为在体外制备出来的TSCM如果不能及时应用，常常需要在体外保存一段时间，体外保存容易丢失其干细胞“特性”，即分化为较末期的细胞，失去了其应用价值，因此，寻找在体外可以保持其特性不变的方法极为重要。目前，采用抗原刺激、分化抑制剂和细胞因子扩增的联合方法可以制备出足量的TSCM，满足后续的研究和临床的应用。TSCM体外制备周期长，且T细胞不易冻存保存，那么需要一种体外保存TSCM的方法来维持其特性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何保存T记忆性干细胞或如何在体外短期保存T记忆性干细胞或如何保持短期储存T记忆性干细胞的细胞形态、表型、增殖和分化等特性不变。为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于体外保存T记忆性干细胞的组合物。所述组合物的活性成分由TWS119、IL-7和IL-15组成。所述组合物中，TWS119、IL-7和IL-15的配比可为TWS1191.5～3nmol，IL-73～10ng，IL-153～10ng。上述组合物中，所述TWS119、IL-7、IL-15的配比可为TWS1191.5～3nmol，IL-73～8ng，IL-153～8ng。上述组合物中，所述TWS119、IL-7、IL-15的配比可为TWS1192nmol，IL-75ng，IL-155ng。上文所述组合物中还可包括人血清和RPMI-1640培养液。上文所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15、人血清和RPMI-1640培养液的配比可为TWS1191.5～3nmol,IL-73～8ng,IL-153～8ng,人血清80～120μL，RPMI-1640培养液880～920μL。上文所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15、人血清和RPMI-1640培养液的配比可为TWS1192nmol,IL-75ng,IL-155ng,人血清100μL，RPMI-1640培养液900μL。上文所述组合物的各个组分可独立包装也可混合存放。上文所述组合物中，所述血清可为人血清。所述IL-7可为重组人IL-7；所述IL-15可为重组人IL-15。为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了含有上文所述的组合物的试剂或试剂盒。所述试剂或试剂盒用于储存T记忆性干细胞。为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了体外保存T记忆性干细胞的方法。所述方法包括用含有上文所述的组合物的储存液储存T记忆性干细胞。上文所述T记忆性干细胞可通过含10％人血清的RPMI-1640培养液、5μmol/LTWS119、20ng/mLIL-7和20ng/mLIL-15的培养基培养获得。使用上文所述储存液储存所述T记忆性干细胞的时间可为30天。使用上文所述储存液储存所述T记忆性干细胞的条件可为37℃、5％CO2条件下储存培养。为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述任意一种应用：P1、上文所述的组合物和/或上文所述的试剂或试剂盒和/或上文所述的方法在储存T记忆性干细胞产品中的应用；P2、上文所述的组合物和/或上文所述的试剂或试剂盒和/或上文所述的方法在制备保持体外T记忆性干细胞生物学活性的产品中的应用；P3、上文所述的组合物和/或上文所述的试剂或试剂盒和/或上文所述的方法在制备保持体外T记忆性干细胞表型的产品中的应用；P4、上文所述的组合物和/或上文所述的试剂或试剂盒和/或上文所述的方法在制备改善体外T记忆性干细胞的增殖状态产品中的应用；P5、上文所述的组合物和/或上文所述的试剂或试剂盒和/或上文所述的方法在制备保持体外T记忆性干细胞分化的效应细胞的杀伤能力产品中的应用。由上文所述的方法储存得到的T记忆性干细胞也属于本专利技术的保护范围。上文中所述T记忆性干细胞可为人外周血来源的T记忆性干细胞。本专利技术实施例中，分别采用本专利技术自制的细胞储存液和已知常用的普通干细胞储存液短期储存人外周血来源的TSCM细胞。其中自制细胞储存液为：2μM/LTWS119+5ng/mLIL-7+5ng/mLIL-15+10％人血清+RPMI-1640；普通的细胞培养细胞储存液为：10％人血清+RPMI-1640。储存30天后，观察细胞形态学变化及计数细胞的死亡率，流式细胞仪检测细胞增殖能力和细胞表型；检测TSCM分化的效应细胞的杀伤能力，以新鲜制备的TSCM细胞作阳性对照。结果显示，TSCM细胞形态各组间均无明显差异；自制保存液保存培养的TSCM细胞存活率高于普通细胞培养液组，其增殖能力、表型以及由其分化的效应细胞的杀伤能力与新鲜细胞均无明显差异。因此，采用本专利技术自制的TSCM细胞储存液可以在体外短时间内保存TSCM细胞，使其存活率、增殖和分化均保持较高水平，可应用于临床和基础研究应用。附图说明图1为各组细胞死亡率比较(n＝5,mean±SD)。图2为各组细胞形态学观察(×10)。A为新鲜培养的TSCM细胞；B为自制保存液保存的细胞；C为普通培养液保存的细胞。图3为TSCM细胞的表型检测。TSCM的圈门策略。首先以前向散射光和侧向散射光圈出淋巴细胞，以CD45RA+CCR7+和CD95来标记TSCM。A为流式代表图1例，纵坐标第一列为侧向散射光(SSC)，第二列为CCR7(代表趋化因子受体)，第三列为CD95(代表凋亡抑制因子)；横坐标从左到右依次为前向散射光(FSC)、CD45RA、FSC。B为TSCM表型阳性的细胞比率的数据分析图(n＝5,mean±SD)。图4为三组细胞增殖能力比较。A为流式代表图1例，纵坐标为细胞数，横坐标为CFSE(代表细胞增殖代数)；B为发生增殖的细胞比率的数据分析图(n＝5,mean±SD)。图5为由三组细胞分化来的效应细胞对THP-1杀伤能力的比较。A为代表流式图1例，纵坐标为PI，横坐标为前向散射光(FSC)；B为杀伤的THP-1细胞的比率，(n＝5,mean±SD)。图6为不同浓度的TWS119和雷帕霉素对于TSCM细胞频率和绝对数值的影响。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于体外保存T记忆性干细胞的组合物，所述组合物的活性成分由TWS119、IL-7、IL-15组成；所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15的配比为TWS119 1.5～3nmol，IL-7 3～10ng，IL-15 3～10ng。/n

【技术特征摘要】
1.用于体外保存T记忆性干细胞的组合物，所述组合物的活性成分由TWS119、IL-7、IL-15组成；所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15的配比为TWS1191.5～3nmol，IL-73～10ng，IL-153～10ng。


2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15的配比为TWS1191.5～3nmol，IL-73～8ng，IL-153～8ng。


3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述组合物中，TWS119、IL-7、IL-15的配比为TWS1192nmol，IL-75ng，IL-155ng。


4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的组合物，其特征在于：所述组合物中还包括人血清和RPMI-1640培养液。


5.根据权利要求1-4中任一权利要求中所述的组合物，其特征在于：所述组合物中，所述血清为人血清；所述IL-7为重组人IL-7；所述IL-15为重组人IL-15。


6.含有权利要求1-5中任一权利要求所述的组合物的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒用于储存T记忆性干细胞。


7.体外保存T记忆性干细胞的方法，包括用含有权利要求1-5中任一权利要求所述的组合物的储存液储存T...

【专利技术属性】
技术研发人员：官立萍，崔静，张杨，李光华，司艳丽，秦朝，姚凝聪，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41