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一种花生抗氧化多肽及其制备方法技术

技术编号:29477891 阅读:13 留言:0更新日期:2021-07-30 18:47
本发明专利技术公开了一种花生抗氧化多肽及其制备方法,所述抗氧化多肽的氨基酸序列为Pro‑Gly‑Cys‑Pro‑Ser‑Thr。以花生为原料,采用胃蛋白酶对其进行酶解,分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化多肽。本发明专利技术抗氧化多肽缓解了人工抗氧化剂可能引起的副作用,提供了一种新的天然抗氧化剂,可以取代传统的合成食品抗氧化剂。

【技术实现步骤摘要】
一种花生抗氧化多肽及其制备方法
本专利技术属于生物
,具体涉及一种花生抗氧化多肽及其制备方法。
技术介绍
氧化是所有生物在氧化代谢过程中形成自由基的过程,是生物体发展某些重要功能所必需的,常见的活性氧包括羟基自由基、超氧阴离子自由基和过氧化氢。活性氧的过度积累导致细胞生物分子的氧化损伤,如DNA片段化、蛋白质变性和膜脂过氧化,与人体多种疾病相关,包括癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等。此外,在食品中,氧化不仅会引发营养流失、腐烂、异味,造成食品品质的下降,严重时还会对摄入者的身体健康造成影响。因此,使用安全的抗氧化剂抑制过氧化物的产生是一个不错的选择。人工合成抗氧化剂如叔丁基羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁羟基甲酚(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)等在食品中应用广泛,具有防止食品氧化变质、防止毒素产生、保持营养成分的作用,但是这些合成的抗氧化剂可能会对人体健康造成伤害:如不当使用BHA可致癌,BHT有抑制人体呼吸酶活性的嫌疑,TBHQ有致畸致癌的危险。为缓解众人对人工合成抗氧化剂安全性的担忧,开发天然抗氧化剂越来越受到食品工业和科学界的关注。食源性生物活性肽是蛋白质经特定蛋白水解酶酶解或发酵后形成的从二肽到具有复杂线性、环状结构的不同肽类的总称。食源性抗氧化肽作为一种理想的天然替代品正受到越来越多的关注,其抗氧化活性不仅体现在体外清除自由基,还体现在体内调节抗氧化途径。用于制备抗氧化肽的动植物原料主要包括未充分利用的蛋白质丰富的食物和富含蛋白质的工业副产物,或者蛋白质中含有特定药理价值的多肽序列或氨基酸残基,不同来源的多肽均有可能具有抗氧化活性。花生是一种主要的农业作物,广泛用于榨油。脱脂花生粕是花生油生产过程中的主要副产品,富含蛋白质和大量必需氨基酸。但由于蛋白质溶解性差、颜色深、风味不佳、营养价值低,至今仍被用作动物饲料和肥料,造成资源浪费。为进一步提高花生副产物的功能利用度,可将其作为一种潜在的抗氧化肽来源。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对天然抗氧化剂的不足和人工合成抗氧化剂的安全缺陷,以及花生生物利用度不足的现状,提供一种花生抗氧化多肽及其制备方法。本专利技术具体通过以下技术方案实现:本专利技术提供了一种花生抗氧化多肽,其氨基酸序列为Pro-Gly-Cys-Pro-Ser-Thr。在本专利技术的另一方面,提供了所述花生抗氧化多肽的制备方法,以花生为原料,采用胃蛋白酶对其进行酶解,分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化多肽。所述的酶解条件为:pH为1.5-3.5、温度37℃、酶解时间为3.0h、底物浓度为4%,酶添加量为1%。肽酶的类型是决定肽的大小、组成和氨基酸序列的主要因素,不同类型的酶可以特异性切割肽的不同位置,最终影响蛋白质水解产物的抗氧化活性。蛋白酶的专一性主要是由于形成肽键的两个氨基酸的性质不同所决定的。胃蛋白酶是一种内切酶,作用于蛋白质分子内部肽键,不会切割末端产生游离氨基酸,保证产生的都是多肽链。胃蛋白酶消化过程中,优选涉及芳香族氨基酸,包括Phe、Trp和Tyr的肽键被裂解,导致疏水性增加,从而使蛋白水解物与DPPH等自由基反应,具有抗氧化活性。同时,胃蛋白酶不会在含有缬氨酸、丙氨酸或甘氨酸的键上裂解。本次专利技术的肽段前一位相连的氨基酸与后一位相连的氨基酸均是芳香族氨基酸,为胃蛋白酶特异性切割的位点,而本专利技术肽段中的甘氨酸Gly相关的肽键不会被裂解,从而保留半胱氨酸,半胱氨酸中的巯基由于其与自由基的直接相互作用而具有独立的重要抗氧化作用。胃蛋白酶为动物来源的蛋白酶,酶切位点的专一性较微生物来源的蛋白酶也更加严格精准。所述的分离纯化的方法包括超滤、SephadexLH-20分子筛、SephadexG-25分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱。所述的分离纯化的具体步骤为:1)首先利用超滤离心管对花生多肽溶液进行超滤分离,得到不同分子量的多肽组分;2)收集具有最佳抗氧化活性的组分,用SephadexLH-20凝胶色谱柱进行分离,洗脱液为去离子水,测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性;3)收集具有最佳抗氧化活性的组分,用SephadexG-25凝胶色谱柱进行分离,洗脱液为去离子水,测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性;4)收集具有最佳抗氧化活性的组分,采用DPPH自由基消除法,利用RP-HPLC反相液相色谱进行进一步分离,收集加入DPPH后消除的洗脱峰,得到抗氧化多肽。进一步的,步骤1)得到的多肽组分包括分子量≥30000Da、3000-30000Da、≤3000Da的多肽。其中≤3000Da的小肽抗氧化活性更强。进一步的,步骤2)和3)中流速为2.5mL/min,在280nm下进行测量。本专利技术的有益效果为:本专利技术改变了现有抗氧化剂的提取与运用的思路和方法,缓解了人工抗氧化剂可能引起的副作用,提供了一种新的天然抗氧化剂,可以取代传统的合成食品抗氧化剂。另外,本专利技术还可改善我国花生粕中蛋白经济效益偏低的情况,为花生副产物的再开发提供新思路,对科技、经济和食品业的发展将具有深远意义。附图说明图1是本专利技术实施例1中SephadexLH-20分离组分的吸收峰图;图2是本专利技术实施例1中SephadexLH-20分离组分的DPPH自由基清除能力;图3是本专利技术实施例1中SephadexLH-20分离组分的ABTS自由基清除能力;图4是本专利技术实施例1中SephadexLH-20分离组分的羟基自由基清除能力;图5是本专利技术实施例1中SephadexG-25分离组分的吸收峰图;图6是本专利技术实施例1中SephadexG-25分离组分的抗氧化活性;图7是本专利技术实施例1中RP-HPLC反相液相色谱分离组分的抗氧化多肽峰。具体实施方式下面将结合本专利技术具体的实施例,对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本专利技术保护的范围。实施例11)花生蛋白的提取花生去壳去皮,破碎成粉末,加20%正己烷脱脂2h,然后加入10%超纯水,调节pH为9.0,搅拌2h。然后静置分层,取水层并调节pH为3.0,收集沉淀,冷冻干燥后得到花生蛋白。2)花生蛋白的酶解酶购自上海阿拉丁公司(中国·上海)。采用胃蛋白酶酶解花生蛋白,蛋白浓度为4%,酶添加量为1%、酶解条件取pH为3.0、温度37℃、酶解3.0h后,沸水浴中灭酶15min,然后迅速冷却至室温,置于离心机中,11000r/min离心30min,取上清液备用。3)酶解产物的分离纯化利用超滤离心管对花生多肽溶液进行超滤分离,利用分子量截留范围不同的超滤膜对酶解产物进行分离,得到不同分子量的多肽,包括≥30000Da,3000-30000Da,≤3000Da等组分本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种花生抗氧化多肽,其特征在于,其氨基酸序列为Pro-Gly-Cys-Pro-Ser-Thr。/n

【技术特征摘要】
1.一种花生抗氧化多肽,其特征在于,其氨基酸序列为Pro-Gly-Cys-Pro-Ser-Thr。


2.权利要求1所述花生抗氧化多肽的制备方法,其特征在于,以花生为原料,采用胃蛋白酶对其进行酶解,分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化多肽。


3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的酶解条件为:pH为1.5-3.5、温度37℃、酶解时间为3.0h、底物浓度为4%,酶添加量为1%。


4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述的分离纯化的方法包括超滤、SephadexLH-20分子筛、SephadexG-25分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱。...

【专利技术属性】
技术研发人员:卜迁黄玉婷高鸿钟凯
申请(专利权)人:四川大学
类型:发明
国别省市:四川;51

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