区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因及其应用，本发明专利技术的DNA条形码标准检测基因能快速的对不同象草品种及其杂交种进行区分、鉴定，该方法的准确性高、操作过程简洁、用时短的特点，特别是，采用本发明专利技术可准确地鉴别不同象草品种及其杂交种，可应用于象草品种的鉴定及品种保护，这对于象草种质资源的科学保护具有重要意义以便高效、快速、准确的鉴定不同象草品种及其杂交种。相比传统的通过形态鉴定法，本发明专利技术的方法能在实验室条件下较短时间内很好的完成，可大大提高效率。具有很好的推广价值。

【技术实现步骤摘要】
区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因及其应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因及其应用。
技术介绍
象草(Cenchruspurpureus)因大象爱采食而得名，是禾本科、黍族多年生大型草本植物，原产于非洲。象草因其具有生物量大、生长快速、适应性强等特点，被用作重要的饲草作物在全世界热带及亚热带被广泛种植，此外，由于象草在生物能方面的优势也使其成为潜在的能源草。目前国内主要栽培象草品包括：桂闽引象草、矮象草、紫象草、热研4号象草、桂牧1号象草、巨菌草；其中，热研4号象草、桂牧1号象草为杂交种，象草品种及其杂交种形态极为相似。此外，象草的繁殖方式主要为无性繁殖，已茎段作为繁殖材料，象草品种及其杂交种的茎段形态也极为相似。从现有的形态学研究看，还缺乏直观、明显的差异可区分不同象草品种及其杂交种的方法。为此，有必要对不同品种的象草基因进行研究，从分子水平上快速区分不同象草品种，达到简单、高效、准确区分不同象草品种的目的。
技术实现思路
鉴于上述内容，有必要提供区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因及其应用，该应用技术能快速、准确的对不同象草品种进行区分，特别是对象草的杂交种进行有效区分。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因，所述DNA条形码标准检测基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1-SEQIDNO.5所示。进一步的，所述不同象草品种为5个，分别为：桂闽引象草、矮象草、紫象草、巨菌草和杂交种象草；所述桂闽引象草(简写：CpGMY)(拉丁名：C.purpureuscv.GuiMinYin)对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述矮象草(简写：CpMott)(拉丁名：C.purpureuscv.Mott)对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.2所示；所述紫象草(简写：CpPurple)(拉丁名：C.purpureuscv.Purple)对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.3所示；所述巨菌草(简写：CpJujun)(拉丁名：C.giganteumz.x.lintentativename)对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.4所示；所述杂交种象草的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.5所示。进一步的，上述的杂交种象草为热研4号象草和/或桂牧1号象草；其中，热研4号象草(简写：CpReyan4)为(C.purpureus×C.americanuscv.)的杂交种；桂牧1号象草(简写：CpGuimu1)为(Cenchruspurpureuscv.Mott)×(C.americanus×C.purpureus)cv.的杂交种。本专利技术还包括所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因在象草分类中的应用。本专利技术还包括一种应用所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因区分不同象草品种的方法，所述方法为：提取待测象草品种基因组DNA；以提取的基因组DNA为模板，以CpITSf和CpITSr为引物进行PCR扩增，获得PCR产物，对PCR产物进行测序；当核酸序列如SEQIDNO.1所示，第527位碱基为G、第537位碱基为C、同时第569位碱基为G时，该象草品种为桂闽引象草；当核酸序列如SEQIDNO.2所示，第292位碱基为A和/或第527位碱基为A、同时第537位碱基为C、同时569位碱基为A时，该象草品种为矮象草；当核酸序列如SEQIDNO.3所示，第527位碱基为A、同时第537位碱基为C、同时569位碱基为G时，该象草品种为紫色象草；当核酸序列如SEQIDNO.4所示，第527位碱基为A、同时第537位碱基为T、同时569位碱基为G时，该象草品种为巨菌草；当核酸序列如SEQIDNO.5所示，第414位碱基为G时，该象草品种为杂交种象草；所述引物CpITSf如序列表SEQIDNO.6所示；所述引物CpITSr如序列表SEQIDNO.7所示。本专利技术还包括一种应用所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因区分象草杂交种的方法，提取待测象草品种的基因组DNA；以提取的基因组DNA为模板，以CpITSf和CpITSr为引物进行PCR扩增，获得PCR产物，对PCR产物进行测序；当核酸序列如SEQIDNO.5所示，第414位碱基为G时，该象草品种为杂交种；所述引物CpITSf如序列表SEQIDNO.6所示；所述引物CpITSr如序列表SEQIDNO.7所示。本专利技术还包括一种区分不同象草品种的鉴定方法，提取待鉴定的象草材料的基因组DNA，以基因组DNA为模板，应用CpITSf和CpITSr为引物进行PCR扩增获得未知象草的PCR产物并测序，然后将未知象草测序后的PCR产物序列和权利要求1或2所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因序列一起聚类建树，未知象草的PCR产物序列被聚类到哪个种，则未知象草即为该种；所述引物CpITSf如序列表SEQIDNO.6所示；所述引物CpITSr如序列表SEQIDNO.7所示。本专利技术还包括一种获取所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因的方法，该方法为：(1)通过不同的生物学特性初步鉴定桂闽引象草、矮象草、紫象草、巨菌草、热研4号象草和/或桂牧1号象草；(2)提取幼苗的DNA；(3)将幼苗的DNA通过引物CpITSf和CpITSr进行PCR扩增和测序；(4)对测序结果进行比对、编辑、质量核查、检测特异SNP位点，序列建树；(5)对标准分类对应序列的确认得到相应的DNA条形码标准检测基因如序列表SEQIDNO.1-SEQIDNO.5所示；(6)用已知明显分类的象草品种进行准确性验证。本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术的DNA条形码标准检测基因能快速的对不同象草品种(桂闽引象草、矮象草、紫象草、巨菌草)及其杂交种(热研4号和/或桂牧1号)进行区分、鉴定，具有操作过程简洁、用时短，准确率高的特点，经检验，该方法的准确率达到100％。相比传统的通过形态鉴定法，可大大提高效率。该方法能在实验室条件下较短时间内很好的完成，具有很好的推广价值，有助于快速有效的区分不同象草种质资源。2、采用本专利技术的标准检测基因和方法可准确地鉴别不同象草品种及其杂交种，除上述优点外，本专利技术还找出了杂交象草：热研4号象草和桂牧1号象草区别于其他非杂交象草的特异性SNP，利用该位点能快速建立引物区分杂交象草和非杂交象草，为象草后期的种质鉴定提供良好的参考。【附图说明】图1基于不同象草品种及其杂交种标准分类对应序列构建的聚类图。【具体实施方式】为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因，其特征在于，所述DNA条形码标准检测基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.5所示。/n

【技术特征摘要】
1.区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因，其特征在于，所述DNA条形码标准检测基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1-SEQIDNO.5所示。


2.根据权利要求1所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因，其特征在于，所述不同象草品种为5个，分别为：桂闽引象草、矮象草、紫象草、巨菌草和杂交种象草；所述桂闽引象草对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述矮象草对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.2所示；所述紫象草对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.3所示；所述巨菌草对应的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.4所示；所述杂交种象草的DNA条形码标准检测基因核酸序列如SEQIDNO.5所示。


3.如权利要求1或2所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因在象草分类中的应用。


4.一种应用如权利要求1或2所述区分不同象草品种的DNA条形码标准检测基因区分不同象草品种的方法，其特征在于，所述方法为：提取待测象草品种基因组DNA；以提取的基因组DNA为模板，以CpITSf和CpITSr为引物进行PCR扩增，获得PCR产物，对PCR产物进行测序；
当核酸序列如SEQIDNO.1所示，第527位碱基为G、第537位碱基为C、同时第569位碱基为G时，该象草品种为桂闽引象草；
当核酸序列如SEQIDNO.2所示，第292位碱基为A和/或第527位碱基为A、同时第537位碱基为C、同时569位碱基为A时，该象草品种为矮象草；
当核...

【专利技术属性】
技术研发人员：张吉宇，闫启，易显凤，李洁，张正社，卢丽燕，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62