一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提出了一种融合表达β‑甘露聚糖酶和α‑半乳糖苷酶的毕赤酵母，其特征在于，包括pPIC9K载体、β‑甘露聚糖酶基因以及α‑半乳糖苷酶基因，所述β‑甘露聚糖酶基因与α‑半乳糖苷酶基因组成融合基因，融合基因两端包含EcoRI和Not1酶切位点序列和载体pPIC9K的同源臂序列。本发明专利技术通过β‑甘露聚糖酶和α‑半乳糖苷酶融合使用可以更加彻底地降解半乳甘露聚糖，以β‑甘露聚糖酶和α‑半乳糖苷酶融合使用作为饲料添加剂处理饲料后不会造成营养物质浪费。

【技术实现步骤摘要】
一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母、制备方法及其应用
一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母、制备方法及其应用。
技术介绍
半乳甘露聚糖是一种抗营养因子，可以增加饲料的粘度，降低饲料中营养物质的利用率。动物体内不能产生降解半乳甘露聚糖的酶类，动物采食半乳甘露聚糖含量高的食物后，无法对饲料养分充分消化和吸收。动物会产生食欲不振和体重减轻等症状。现有技术通过单一的酶如β-甘露聚糖酶消除抗营养因子半乳甘露聚糖，但是，β-甘露聚糖酶只能水解甘露糖骨干的1,4连接键，不能水解1,6键连接的半乳糖残基，不能把半乳甘露聚糖充分降解。而且单一的酶降解半乳甘露聚糖后的产物分子量大，不容易被动物吸收利用，造成了营养物质的浪费，也使得动物觅食后长不快。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本专利技术提出了一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母、制备方法及其应用，以β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶融合使用作为饲料添加剂处理饲料后不会造成营养物质浪费。为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母，其特征在于，包括pPIC9K载体、β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因，所述β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因组成融合基因，融合基因两端包含EcoRI和Not1酶切位点序列和载体pPIC9K的同源臂序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母，其特征在于，包括pPIC9K载体、β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因，所述β-甘露聚糖酶基因以及α-半乳糖苷酶基因组成融合基因，融合基因两端包含EcoRI和Not1酶切位点序列和载体pPIC9K的同源臂序列。


2.根据权利要求1所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母的表达质粒包括pPIC9K载体和EcoRI酶切位点以及Not1酶切位点之间的全长融合基因。


3.一种如权利要求1-2任一所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、化学合成改良的β-甘露聚糖酶与α-半乳糖苷酶的融合基因；
S2、酶切S1中所得融合基因与酶切线性化的毕赤酵母表达载体连接或重组，得融合基因表达质粒；
S3、将S2中构建好的融合基因表达质粒酶切线性化后，转化入毕赤酵母感受态细胞中；
S4、通过His缺陷和G418抗性筛选出有融合基因插入的毕赤酵母菌。


4.根据权利要求4所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶的毕赤酵母的制备方法，其特征在于，所述S2中融合基因序列与酶切线性化的毕赤酵母表达载体通过T4连接酶或2XClonExpressMix连接或重组。


5.根据权利要求3所述的融合表达β-甘露聚糖酶和α...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱佑民，钟诚，于婷婷，张慧，郑业鸿，雷雨，孟维龙，张文荟，林莉莉，
申请(专利权)人：上海国龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31