一种可产共轭亚油酸的毕赤酵母工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可产共轭亚油酸的毕赤酵母工程菌及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明专利技术的毕赤酵母工程菌可用于生产共轭亚油酸，将本发明专利技术的毕赤酵母工程菌发酵获得的含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液添加至含0.9g/L游离亚油酸的反应体系中进行反应，仅反应3h，即可使反应液中共轭亚油酸的产量高达0.855g/L、转化率高达95％，并且，反应中的共轭亚油酸全部为cis9,trans11‑CLA，无其他共轭亚油酸异构体。

【技术实现步骤摘要】
一种可产共轭亚油酸的毕赤酵母工程菌及其应用
本专利技术涉及一种可产共轭亚油酸的毕赤酵母工程菌及其应用，属于基因工程以及微生物工程

技术介绍
共轭亚油酸(Conjugatedlinoleicacid，CLA)是一组含有共轭双键的十八碳二烯酸的总称，是亚油酸(Linoleicacid，LA)的立体几何异构体。由于共轭双键位置不同且双键具有顺式及反式两种几何结构，共轭亚油酸的种类十分丰富。在共轭亚油酸的众多异构体中，cis9,trans11-CLA、trans10,cis12-CLA被证实具有重要的生理活性，例如，研究表明，cis9,trans11-CLA和trans10,cis12-CLA均具有抗癌的生理活性，其中，cis9,trans11-CLA的抗癌能力更强(具体可见参考文献：DurgamVR，FernandesG.ThegrowthinhibitoryeffectofconjugatedlinoleicacidonMCF-7cellsisrelatedtoestrogenresponsesystem.CancerLetter本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母工程菌以毕赤酵母为宿主表达编码亚油酸异构酶的基因；所述亚油酸异构酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母工程菌以毕赤酵母为宿主表达编码亚油酸异构酶的基因；所述亚油酸异构酶的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.如权利要求1所述的一种毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母为毕赤酵母PichiaPinkTMStrain2。


3.如权利要求1或2所述的一种毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述编码亚油酸异构酶的基因的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。


4.如权利要求1-3任一所述的一种毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母工程菌以PichiapPink-HC-3CZHEK质粒为表达载体；所述PichiapPink-HC-3CZHEK质粒是通过将去除α-factor后的pPinkα-HC质粒与3CZHEK基因相连获得的。


5.一种生产共轭亚油酸的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1-4任一所述的毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心，收集菌体；将菌体破碎，收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液；将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液添加至含亚油酸的反应体系中进行反应，得到反应液；将反应液进行分离，得到共轭亚油酸；
或者，所述方法为先将上述毕赤酵母工程菌接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心，收集菌体；将菌体破碎，收集含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液；将含亚油酸异构酶的细胞破碎上清液进行分离，得到亚油酸异构酶；将亚油酸异构酶添加至含亚油酸的反应体系中...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海琴，杨波，赵建新，李秀清，高鹤，张灏，陈卫，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32