一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对及其用途制造技术

本申请提供一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对及其用途，本申请将RANKL抗原分成N端(SEQ ID NO:2)和C端(SEQ ID NO:3)两段序列，并用这两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiRANKL_N和AntiRANKL_C，通过该抗体对可以有效的测定血清中RANKL的含量，进而便于诊断和治疗骨质疏松症。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对及其用途
本申请涉及医药领域，尤其涉及一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对及其用途。
技术介绍
骨质疏松症是一种与年龄相关的慢性全身性代谢性疾病，它主要以骨量减少、骨微结构破坏和骨脆性增加为特征。由于其发病率和死亡率的提高，该病已经成为全球性的公共健康问题。鉴于骨质疏症松的高发病率及其带来的严重后果，人们对其发病机制进行了深入研究。RANKL蛋白被认为是破骨细胞活化增殖过程中必不可少的生物分子，它有三种亚型且均能促进破骨细胞增殖。RANKL可由多种细胞表达，软骨组织表达的RANKL受1，25(OH)2D3BMP2，Wnt/b-catenin信号通路调节，并吸引破骨细胞前体聚集吸收新形成的多余骨质，预防骨硬化；而骨细胞中RANKL的表达与应力刺激相关；炎症性疾病中B细胞、T细胞表达的RANKL可能参与免疫反应与B细胞的成熟过程。研究发现57岁以上女性血清RANKL水平明显升高，这与绝经后骨质疏松出现时间一致。Kim等认为RANKL通过介导活性氧通路诱导持久性的钙震荡，最终促进单核细胞向破骨细胞分化。Xu等同样认为通过调节RANKL/OPG的比例可以诱导破骨细胞分化。综上，RANKL在破骨细胞分化过程中扮演着重要的角色。除此之外RANKL还可以激活成熟破骨细胞，延长其存活时间，增强骨吸收能力。由于使用相关抗体、肽、天然化合物抑制RANKL可以阻止破骨细胞的形成和功能，故RANKL被视为诊断及治疗骨质疏松症的一个潜在靶点,由于RANKL与骨质疏松的发生、发展有关,所以血清中RANKL含量检测也是我们研究的方向。然而，截止目前，还没有针对RANKL临床检测的配对抗体报道。
技术实现思路
本申请为解决上述技术问题而提供一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对及其用途。本申请所采取的技术方案是：本申请第一方面提供一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对，包括与RANKL的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_N和与RANKL的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_C，所述单克隆抗体AntiRANKL_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiRANKL_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。进一步的，所述单克隆抗体AntiRANKL_N轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:4所示的LCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:5所示的LCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:6所示的LCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列；所述单克隆抗体AntiRANKL_N重链氨基酸序列包括SEQIDNO:8所示的HCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:9所示的HCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:10所示的HCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列。进一步的，所述单克隆抗体AntiRANKL_C轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:14所示的LCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:15所示的LCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:16所示的LCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列；所述单克隆抗体AntiRANKL_C重链氨基酸序列包括SEQIDNO:18所示的HCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:19所示的HCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:20所示的HCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列。进一步的，所述单克隆抗体AntiRANKL_N和AntiRANKL_C均为IgG型单克隆抗体，且一个为捕获抗体，一个为检测抗体。进一步的，所述AntiPF4_N为捕获抗体，所示AntiPF4_C为检测抗体。进一步的，所述检测抗体的检测标记物为检测标记蛋白、荧光基团、放射性同位素中的一种。进一步的，所述检测抗体的检测标记蛋白包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、荧光素酶和β-半乳糖苷酶，且检测抗体与检测标记蛋白重组表达。进一步的，所述检测抗体的检测方法包括酶联免疫(ELISA)检测法、化学发光检测检测法、蛋白质印迹检测检测法和免疫组化(IHC)检测法。进一步的，所述抗体对选自与RANKL结合的Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv和di-scFv的抗体片段。本申请第二方面提供一种DNA分子，它编码权利要求1或2或3所述的抗体。本申请第三方面提供一种上述任一一种抗体对在制备检测血清中RANKL含量的试剂盒中的应用。本申请具有的优点和积极效果是：本申请将RANKL抗原分成N端(SEQIDNO:2)和C端(SEQIDNO:3)两段序列，并用这两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiRANKL_N和AntiRANKL_C，通过该抗体对可以有效的测定血清中RANKL的含量，进而便于诊断和治疗骨质疏松症。除了上面所描述的本申请解决的技术问题、构成技术方案的技术特征以及由这些技术方案的技术特征所带来的优点之外，本申请所能解决的其他技术问题、技术方案中包含的其他技术特征以及这些技术特征所带来的优点，将在下文中作进一步详细的说明。附图说明图1是本申请实施例提供的AntiRANKL_N和AntiRANKL_C抗体对检测示意图；图2是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-NL-LFc载体电泳图；图3是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-NH-HFc载体电泳图；图4是本申请实施例提供的重组AntiRANKL_N蛋白纯化电泳图；图5是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-CL-LFc载体电泳图；图6是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-CL-HFc载体电泳图；图7是本申请实施例提供的重组AntiRANKL_C蛋白纯化电泳图；图8是本申请实施例提供的AntiRANKL_N和AntiRANKL_C抗体对制备的试剂盒验证流程示意图；图9是本申请实施例四提供的性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第一次测定曲线；图10是本申请实施例四提供的性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第二次测定曲线；图11是本申请实施例四提供的性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第三次测定曲线；图12是本申请实施例提供的临床诊断中本申请抗体制成试剂盒与对照试剂盒检测RANKL的剂量-反应曲线图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关专利技术，而非对该专利技术的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与专利技术相关的部分。需要说明的是，在不冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对，其特征在于,包括:与RANKL的N端表位即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_N和与RANK的C端表位即SEQID NO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_C，所述单克隆抗体AntiRANKL_N包括SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiRANKL_C包括SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的重链可变区。/n

【技术特征摘要】
20200511 CN 20201038967401.一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对，其特征在于,包括:与RANKL的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_N和与RANK的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiRANKL_C，所述单克隆抗体AntiRANKL_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiRANKL_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。


2.如权利要求1所述的一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对，其特征在于，所述单克隆抗体AntiRANKL_N轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:4所示的LCDR1，SEQIDNO:5所示的LCDR2，以及SEQIDNO:6所示的LCDR3；所述单克隆抗体AntiRANKL_N重链氨基酸序列包括SEQIDNO:8所示的HCDR1，SEQIDNO:9所示的HCDR2，以及SEQIDNO:10所示的HCDR3。


3.如权利要求2所述的一种用于检测血清中RANKL含量的抗体对，其特征在于，所述单克隆抗体AntiRANKL_C轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:14所示的LCDR1，SEQIDNO:15所示的LCDR2，以及SEQIDNO:16所示的LCDR3；所述单克隆抗体AntiRANKL_C重链氨基酸序列包括SEQIDNO:18所示的HCDR1，SEQIDNO:19所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，程勇，刘继来，王征，
申请(专利权)人：廊坊天光生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13