一种用于检测血清中G17含量的配对抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测血清中G17含量的配对抗体及其应用，包括与G17的N端表位如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_N和与G17的C端表位如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_C，并采用化学发光检测方法特异性识别AntiG17_N、AntiG17_C，检测G17的含量。本发明专利技术创造性的将G17抗原进行分成N端和C端两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiG17_N和AntiG17_C，用于检测血清中胃泌素17的含量，进而判断患者胃黏膜的损伤情况，对临床上指导用药的安全性具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测血清中G17含量的配对抗体及其应用
本专利技术涉及胃部疾病诊断领域，具体涉及一种用于检测血清中G17含量的配对抗体及其应用。
技术介绍
胃泌素是一种主要由胃窦和十二指肠的G细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中,95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34，其中80％—90％是G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标。据文献《胃蛋白酶原、胃泌素-17及Hp-IgG抗体对胃癌、萎缩性胃炎患者胃粘膜状况的血清学评价》中得知研究应用血清PGⅠ、G-17和PGⅠ/PGⅡ比值及Hp感染状况,对早期胃癌、萎缩性胃炎患者胃粘膜状况的评价,探讨胃癌高危人群的非侵袭性血清学筛查方法。筛查方法：内镜和组织病理学确诊胃癌患者65例,内镜确诊萎缩性胃炎患者70例、正常对照组50例。使用ELISA法检测各组血清PGⅠ、PGⅡ、G-17及Hp-IgG。结果如下：胃体萎缩时,胃癌组血清PGⅠ水平及PGⅠ/PGⅡ比值降低,与对照组比较均具显著差异(P＜0.01),与胃炎组比较亦均有显著差异(P＜0.05)。多灶性萎缩性时,胃癌组血清PGⅠ水平和PGⅠ/PGⅡ比值显著降低,与正常对照组比较具非常显著差异(P＜0.01和P＜0.001),与胃炎组比较亦具有显著差异(P＜0.05和P＜0.01),血清G-17水平显著降低,与正常对照组和胃炎组比较具有统计意义(P＜0.001和P＜0.05),且多灶性萎缩病变在胃癌中的比例明显多于胃炎组。而Hp感染不影响胃癌患者血清PGⅠ和G17的水平。结论为：低水平血清PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ比值和G-17提示患者可能有胃癌高风险的多灶性萎缩病变,血清PGs和G-17的检测可作为胃粘膜萎缩的非侵袭性检查方法。
技术实现思路
鉴于现有技术中的上述缺陷或不足，期望提供一种用于检测血清中G17含量的配对抗体及其应用。根据本申请实施例提供的技术方案，一种用于检测血清中G17含量的配对抗体，包括与G17的N端表位如SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_N和与G17的C端表位如SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_C，所述AntiG17_N包括如SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiG17_C包括如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。本专利技术中，所述AntiG17_N包含轻链LCDR1即SEQIDNO:4所示、LCDR2即SEQIDNO:5所示、LCDR3即SEQIDNO:6所示的三个氨基酸序列，重链HCDR1即SEQIDNO:8所示、HCDR2即SEQIDNO:9所示、HCDR3即SEQIDNO:10所示的三个氨基酸序列，所述AntiG17_C包含轻链LCDR1即SEQIDNO:14所示、LCDR2即SEQIDNO:15所示、LCDR3即SEQIDNO:16所示的三个氨基酸序列，重链HCDR1即SEQIDNO:18所示、HCDR2即SEQIDNO:19所示、HCDR3即SEQIDNO:20所示的三个氨基酸序列。本专利技术中，所述配对抗体可以变换成G17结合片段Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv、di-scFv。本专利技术中，所述AntiG17_N、所述AntiG17_C为IgG型单克隆抗体，所述AntiG17_N作为捕获抗体，所述AntiG17_C作为检测抗体，所述AntiG17_C的检测标记是酶、荧光基团、放射性同位素。本专利技术中，所述配对抗体可与检测标记蛋白重组表达，所述检测标记蛋白为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、荧光素酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶。本专利技术中，所述配对抗体的含量通过免疫学检测方法检测，所述免疫学检测方法包括酶联免疫(ELISA)、化学发光检测、蛋白质印迹检测和免疫组化(IHC)、免疫层析检测。一种化学发光检测试剂盒，包含与G17的N端表位结合的AntiG17_N和与G17的C端表位结合的AntiG17_C，以化学发光检测方法特异性识别AntiG17_C，用于检测G17的含量。综上所述，本申请的有益效果：本专利技术创造性的将G17抗原进行分成N端如SEQIDNO:2所示和C端如SEQIDNO:3所示两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiG17_N和AntiG17_C，用于检测血清中胃泌素17的含量，进而判断患者胃黏膜的损伤情况，对临床上指导用药的安全性具有重要意义。附图说明通过阅读参照以下附图所作的对非限制性实施例所作的详细描述，本申请的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1本专利技术配对抗体反应原理示意图；图2为本专利技术pcDNA3.1-NL-LFc载体构建；图3为本专利技术pcDNA3.1-NH-HFc载体构建；图4为本专利技术重组AntiG17_N蛋白纯化图谱；图5为本专利技术pcDNA3.1-CL-LFc载体构建；图6为本专利技术pcDNA3.1-CH-HFc载体构建；图7为本专利技术重组AntiG17_C蛋白纯化图谱；图8为本专利技术试剂盒性能验证操作示意图；图9是本专利技术性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第一次测定曲线；图10是本专利技术性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第二次测定曲线；图11是本专利技术性能指标考核中剂量-反应曲线验证的第三次测定曲线；图12为本专利技术试剂盒与市场试剂盒检测浓度结果相关性示意图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关专利技术，而非对该专利技术的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与专利技术相关的部分。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。一种用于检测血清中G17含量的配对抗体，包括与G17的N端表位如SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_N和与G17的C端表位如SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_C，所述AntiG17_N包括如SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiG17_C包括如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。所述AntiG17_N包含轻链LCDR1即SEQIDNO:4所示、LCDR2即SEQIDNO:5所示、LCDR3即SEQIDNO:6所示的三个氨基酸序列，重链HCDR1即SEQIDNO:8所示、HCDR2即SEQIDNO:9所示、HCDR3即SEQIDNO:10所示的三个氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测血清中G17含量的配对抗体，其特征是：包括与G17的N端表位如SEQ IDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_N和与G17的C端表位如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_C，/n所述AntiG17_N包括如SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiG17_C包括如SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的重链可变区。/n

【技术特征摘要】
20200511 CN 202010389676X1.一种用于检测血清中G17含量的配对抗体，其特征是：包括与G17的N端表位如SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_N和与G17的C端表位如SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiG17_C，
所述AntiG17_N包括如SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiG17_C包括如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和如SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。


2.根据权利要求1所述的一种用于检测血清中G17含量的配对抗体，其特征是：
所述AntiG17_N包含轻链LCDR1即SEQIDNO:4所示、LCDR2即SEQIDNO:5所示、LCDR3即SEQIDNO:6所示的三个氨基酸序列，重链HCDR1即SEQIDNO:8所示、HCDR2即SEQIDNO:9所示、HCDR3即SEQIDNO:10所示的三个氨基酸序列，
所述AntiG17_C包含轻链LCDR1即SEQIDNO:14所示、LCDR2即SEQIDNO:15所示、LCDR3即SEQIDNO:16所示的三个氨基酸序列，重链HCDR1即SEQIDNO:18所示、HCDR2即SEQIDNO:19所示、HCDR3即SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：于源滋，王征，刘静，刘继来，
申请(专利权)人：廊坊天光生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13