一种用于检测血清中PF4含量的抗体对及其用途制造技术

本申请提供一种用于检测血清中PF4含量的抗体对及其用途，包括与PF4的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_N和与PF4的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_C，所述单克隆抗体AntiPF4_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiPF4_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。本申请将PF4抗原分成N端(SEQIDNO:2)和C端(SEQIDNO:3)两段序列，并用这两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiPF4_N和AntiPF4_C，通过该抗体对可以有效的测定肝素使用后血清中PF4的含量，进而便于指导肝素的使用。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测血清中PF4含量的抗体对及其用途
本申请涉及医药领域，尤其涉及一种用于检测血清中PF4含量的抗体对及其用途。
技术介绍
肝素是治疗和预防血栓性疾病的常用药物,在肾脏内科广泛应用于血液透析治疗。随着肝素在临床上的广泛应用,其所引起的不良反应亦日益引起人们的重视,主要包括肝素抵抗、出血、血栓形成和过敏反应,其中肝素诱导的血小板减少症(heparininducedthrom-bocytopenia,HIT)是较为严重并发症之一。HIT是由肝素类药物引起的一种以血小板减少为特征的并发症,多发于患者接受肝素治疗后的5～10d,其发生的原因是患者体内产生了针对血小板因子4(plateletfactor4,PF4)和肝素(heparin)形成的复合物的抗体(H-PF4抗体)[WARKENTINTE,CHONGBH,GREINACHERA.Heparin-inducedthrombocytopenia：towardconsensus[J].ThrombHaem-ost,1998,79：1-7.]。有研究显示,H-PF4抗体与动静脉血栓的发生有关,血液透析患者长期应用肝素进行抗凝治疗,处于形成H-PF4抗体的危险中[PENADELAVEGAL,MILLERRS,BENDAMM,etal.As-sociationofheparin-dependentantibodiesandadverseoutcomesInhemodialysispatients：apopulation-basedstudy[J].MayoClinProc,2005,80(8):995-1000.]。肝素是当前血液透析中常用的抗凝剂,其不良反应主要是由于体内产生了H-PF4抗体,该抗体的出现对患者透析过程中血小板下降、血栓栓塞并发症以及心脑血管事件的发生具有提示作用,并对指导透析患者肝素的合理应用和判断透析患者的远期预后具有一定的临床价值。然而，截止目前，还没有针对PF4临床检测的配对抗体序列报道。
技术实现思路
本申请为解决上述技术问题而提供一种用于检测血清中PF4含量的抗体对及其用途。本申请所采取的技术方案是：本申请第一方面提供一种用于检测血清中PF4含量的抗体对，其特征在于：包括与PF4的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_N和与PF4的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_C，所述单克隆抗体AntiPF4_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiPF4_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。进一步的，所述单克隆抗体AntiPF4_N轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:4所示的LCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:5所示的LCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:6所示的LCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列；所述单克隆抗体AntiPF4_N重链氨基酸序列包括SEQIDNO:8所示的HCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:9所示的HCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:10所示的HCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列。进一步的，所述单克隆抗体AntiPF4_C轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:14所示的LCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:15所示的LCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:16所示的LCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列；所述单克隆抗体AntiPF4_N重链氨基酸序列包括SEQIDNO:18所示的HCDR1或与其至少90％同源的氨基酸序列，SEQIDNO:19所示的HCDR2或与其至少90％同源的氨基酸序列，以及SEQIDNO:20所示的HCDR3或与其至少90％同源的氨基酸序列。进一步的，所述单克隆抗体AntiPF4_N和AntiPF4_C均为IgG型单克隆抗体，且一个为捕获抗体，一个为检测抗体。进一步的，所述AntiPF4_N为捕获抗体，所示AntiPF4_C为检测抗体。进一步的，所述检测抗体的检测标记物为检测标记蛋白、荧光基团、放射性同位素中的一种。进一步的，所述检测抗体的检测标记蛋白包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、荧光素酶和β-半乳糖苷酶，且检测抗体与检测标记蛋白重组表达。进一步的，所述检测抗体的检测方法包括酶联免疫(ELISA)检测法、化学发光检测检测法、蛋白质印迹检测检测法、免疫组化(IHC)检测法和免疫层析检测检测法。进一步的，所述抗体对选自与PF4结合的Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv和di-scFv的抗体片段。本申请的第二方面提供一种DNA分子，其特征在于，它编码权利要求1或2或3所述的抗体。本申请的第三方面提供一种上述任一一种抗体对在制备检测血清中PF4含量的试剂盒中的应用。本申请具有的优点和积极效果是：本申请将PF4抗原分成N端(SEQIDNO:2)和C端(SEQIDNO:3)两段序列，并用这两段序列分别免疫小鼠，筛选到高特异性和高灵敏性的抗体对AntiPF4_N和AntiPF4_C，通过该抗体对可以有效的测定肝素使用后血清中PF4的含量，进而便于指导肝素的使用。除了上面所描述的本申请解决的技术问题、构成技术方案的技术特征以及由这些技术方案的技术特征所带来的优点之外，本申请所能解决的其他技术问题、技术方案中包含的其他技术特征以及这些技术特征所带来的优点，将在下文中作进一步详细的说明。附图说明图1是本申请实施例提供的AntiPF4_N和AntiPF4_C抗体对检测示意图；图2是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-NL-LFc载体电泳图；图3是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-NH-HFc载体电泳图；图4是本申请实施例提供的重组AntiPF4_N蛋白纯化电泳图；图5是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-CL-LFc载体电泳图；图6是本申请实施例提供的构建的pcDNA3.1-CL-HFc载体电泳图；图7是本申请实施例提供的重组AntiPF4_C蛋白纯化电泳图；图8是本申请实施例提供的AntiPF4_N和AntiPF4_C抗体对制备的试剂盒验证流程示意图；图9是本申请实施例四提供的剂量-反应曲线线性测试中的第一次测定曲线；图10是本申请实施例四提供的剂量-反应曲线线性测试中的第二次测定曲线；图11是本申请实施例四提供的剂量-反应曲线线性测试中的第三次测定曲线；图12是本申请实施例提供的临床诊断中本申请抗体制成试剂盒与对照试剂盒检测PF4的剂量-反应曲线图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测血清中PF4含量的抗体对，其特征在于：包括与PF4的N端表位即SEQ IDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_N和与PF4的C端表位即SEQ ID NO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_C，所述单克隆抗体AntiPF4_N包括SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiPF4_C包括SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的重链可变区。/n

【技术特征摘要】
20200511 CN 20201038968101.一种用于检测血清中PF4含量的抗体对，其特征在于：包括与PF4的N端表位即SEQIDNO:2所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_N和与PF4的C端表位即SEQIDNO:3所示氨基酸序列相结合的单克隆抗体AntiPF4_C，所述单克隆抗体AntiPF4_N包括SEQIDNO:7所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:11所示氨基酸序列的重链可变区，所述AntiPF4_C包括SEQIDNO:17所示氨基酸序列的轻链可变区和SEQIDNO:21所示氨基酸序列的重链可变区。


2.如权利要求1所述的一种用于检测血清中PF4含量的抗体对，其特征在于，所述单克隆抗体AntiPF4_N轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:4所示的LCDR1，SEQIDNO:5所示的LCDR2，以及SEQIDNO:6所示的LCDR3；所述单克隆抗体AntiPF4_N重链氨基酸序列包括SEQIDNO:8所示的HCDR1，SEQIDNO:9所示的HCDR2，以及SEQIDNO:10所示的HCDR3。


3.如权利要求2所述的一种用于检测血清中PF4含量的抗体对，其特征在于，所述单克隆抗体AntiPF4_C轻链氨基酸序列包括SEQIDNO:14所示的LCDR1，SEQIDNO:15所示的LCDR2，以及SEQIDNO:16所示的LCDR3；所述单克隆抗体AntiPF4_C重链氨基酸序列包括SEQIDNO:18所示的HCDR1，SEQIDNO:19所示的HCDR2，以及SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，刘继来，程勇，王征，
申请(专利权)人：廊坊天光生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13