一种犬脑钠肽（BNP）单克隆抗体的制备制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域。本发明专利技术涉及一种包含犬脑钠肽（BNP）两个优势抗原表位的多肽，通过用多肽偶联KLH蛋白免疫小鼠来增强免疫效果。本发明专利技术还提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包含犬BNP两个优势表位，为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组蛋白表达载体。本发明专利技术还涉及用多肽偶联KLH蛋白免疫小鼠建立噬菌体库，经淘选筛选得到对应犬BNP单链抗体scfv序列，将得到的scfv序列构建成完整鼠IgG1抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体，通过免疫荧光正交实验确定最佳单抗配对组合。

【技术实现步骤摘要】
一种犬脑钠肽(BNP)单克隆抗体的制备
本专利技术属于生物
，具体涉及到一种新的犬脑钠肽(BNP)重组蛋白。还涉及用多肽偶联KLH蛋白免疫小鼠建立噬菌体库，筛选得到特异性单链抗体scfv序列，还涉及将得到的scfv序列构建成真核表达载体来表达抗犬脑钠肽(BNP)重组蛋白的单克隆抗体，并应用于犬心力衰竭的早期诊断。
技术介绍
心力衰竭(heartfailure)又称心功能不全，它不是一个独立的疾病，往往在其他疾病的发生过程中继发产生，是由于心肌收缩力减弱，心输出的血量不能满足机体的需要，而导致全身出现严重的机能障碍综合症。发病率高，危害大，可分为急性和慢性两种。急性心力衰竭常由心脏一时负荷过重引起。慢性心力衰竭，病情发展缓慢，病程可持续数月或数年。病犬精神沉郁，易疲劳，呼吸困难，黏膜发绀，四肢末端常发生对称性水肿，运动后水肿减轻或消失；脉数细，心音减弱，常可听到心内杂音和心律失常，救治不及时，可因缺氧和休克而死亡。长期以来，诊断宠物心衰除呼吸、脉搏等动物表征以及X线、心电图、超声心动图等影像检查心脏腔体与血管形态结构外，还需检查血常本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗犬脑钠肽重组蛋白特异性单链抗体scfv-4H5，包括轻链和重链，其特征在于：/n所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；/n所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.抗犬脑钠肽重组蛋白特异性单链抗体scfv-4H5，包括轻链和重链，其特征在于：
所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；
所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.抗犬脑钠肽重组蛋白特异性单链抗体scfv-6D2，包括轻链和重链，其特征在于：
所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；
所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。


3.一种编码权利要求1所述的抗犬脑钠肽重组蛋白特异性单链抗体scfv-4H5的基因，其特征在于：
编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；
编码重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示。


4.一种编码权利要求2所述的抗犬脑钠肽重组蛋白特异性单链抗体scFv-6D2的基因，其特征在于：
编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；
编码重链可变区的核苷酸序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：武戌青，曹丹琴，陈安琪，余铭恩，吴琼杉，
申请(专利权)人：杭州贤至生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33