流感疫苗血凝素含量分析方法技术

一种流感疫苗血凝素含量分析方法，该方法在常规连接的图片采样仪器、计算机和输出设备上实施，包括数据收集、数据处理、误差分析、数据存储输出步骤。本发明专利技术与当前的测量方法对比具有以下的优势：单向免疫扩散试验图片能够实现永久保存，同时其电子文本可以方便传输。数据采集采用多种方式，自动计算出平行样的平均值，减少人为测量误差。自动绘制标准曲线，比较直观观察标准品及样品点在标准曲线中的分布情况，对实验结果进行评价。利用误差分析系统自动计算出一组标准品数据的相关系数，实现对样品结果可信度评价。同时可以制定相关系数的可信度标准。能够自动实现检定原始数据的永久性电子存档，同时依据需要输出含有不同批号组合的检定报告。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物医药分析
，具体涉及人用或兽用传统疫苗、基因工程疫苗、单克隆抗体和免疫诊断试剂等抗原或抗体的标准化定量分析。
技术介绍
应用单向免疫扩散方法进行抗原或抗体含量的测定已广泛应用于生物医药的检测、分析及质量控制领域，中国药典(2005版)四部收录的多种生物制品的制造及检定规程中采用此种方法进行抗原含量的测定。接种流感疫苗(灭活疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗)是目前有效预防流行性感冒的有效手段。流感疫苗的成分标识为血凝素含量，经国家食品药品监督管理局批准上市的流感疫苗制造检定规程中血凝素含量测定采用单向免疫扩散方法。目前该方法在数据采集、数据处理过程中仍采用手工测量、手工计算的方式，费时费工，误差较大，无法适应GMP、GLP的标准。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种，以解决现有技术存在的在数据采集、数据处理过程中仍采用手工测量、手工计算的方式，费时费工，误差较大，无法适应GMP、GLP的标准的问题。本专利技术采用以下技术方案该方法在常规连接的图片采样仪器、计算机和输出设备上实施，包括数据收集、数据处理、误差分析、数据存储输出步骤；所述的图片采样仪器为高端扫描仪。所述的输出设备为显示器或打印机。本专利技术的有益效果是应用本专利技术对流感疫苗血凝素含量进行测定，符合生物制品质量标准及其质量控制的标准化、数字化、规范化的要求。与当前的测量方法对比具有以下的优势1、单向免疫扩散试验图片能够实现永久保存，同时其电子文本可以方便传输。2、数据采集采用多种方式，自动计算出平行样的平均值，减少人为测量误差。3、自动绘制标准曲线，比较直观观察标准品及样品点在标准曲线中的分布情况，对实验结果进行评价。4、利用误差分析系统自动计算出一组标准品数据的相关系数，实现对样品结果可信度评价。同时可以制定相关系数的可信度标准。5、能够自动实现检定原始数据的永久性电子存档，同时依据需要输出在同一图片中含有不同批号组合的检定报告。附图说明图1是本专利技术的流程图；图2是本专利技术实施例所处理的流感疫苗血凝素单向免疫扩散图片；图3是本专利技术实施例的标准品的X-Y曲线。具体实施例方式参见图1，本专利技术包括该方法包括依次进行的数据收集步骤1、数据处理步骤2、误差分析步骤3和数据存储输出步骤4。其中数据收集步骤1包括(1)图片的导入和命名采用图片采集仪器(如扫描仪)将流感疫苗血凝素测定图片以jpg格式的导入到计算机内，并将其命名和保存在图片文档中。(2)标准品数据的采集操作人员可以采用平行线测量或点线测量方法对所述图片上的标准品沉淀环直径进行测量，其测量结果自动存入数据库中，通过对二个或三个平行样的测定，自动计算其(沉淀环直径)平均值。同理依次对若干个标准品进行测量采集；(3)被测样品数据采集依据上述“标准品数据的采集(2)”的方法进行样品数据采集，采集数据前需输入样品的稀释倍数；采集系统同时支持手工录入、修改及删除功能。数据处理步骤2包括(1)标准曲线的绘制系统采用最小二乘法求出方程Y2＝A+BX中的A、B值，并绘制标准曲线。(2)样品测量值的计算利用方程Y2＝A+BX，依据稀释倍数求出样品的X值，其中Y为标准品或样品的沉淀环直径(系统采集数据)，标准品的X值为手工录入值，样品的X值即为流感疫苗的血凝素含量。A为标准曲线的截距，B为标准曲线的斜率。误差分析步骤3通过对标准品实验数据的测量，利用误差分析软件(给出软件具体的名称和来源)计算出此组数据的具有统计学意义相关系数，对实验误差进行定量分析；同时也可通过观察标准品及样品点在标准曲线中的分布情况，对实验结果进行评价说明测量值与真实值的误差及测量结果是否在标准曲线可读范围内。数据存储输出步骤4标准品和样品的测量结果分别存储，可以选用实验序号或样品批号调出所需要的实验及样品报告，并分别进行输出。所述的图片导入步骤采用的图片采样仪器为高端扫描仪，并与计算机连接。所述的数据处理、误差分析和数据存储输出步骤均在计算机及与其连接的输出设备上进行。所述的输出设备为显示器或打印机。下面结合实施例对本专利技术的过程作进一步详细说明实施例本专利技术采用的设备由高端扫描仪、计算机和输出设备(显示器或/和打印机)，采用常规连接方式相互连接。一、首先进行数据采集步骤1、待分析图片备好如图2所示的样品(即流感疫苗血凝素单向免疫扩散图片)。图片为琼脂糖浓度为1％凝胶(内含抗体)，内圈为上样圈，周围环形部分为抗原扩散环。图2中的中间一排从左边数4个图形为抗原标准品，下面一排从左边数4个图形为抗原标准品复孔，中间一排最右边的二孔为阴性对照图形(B、H3N2型别的流感血凝素标准品42μg/ml)，下面一排最右边的一孔为阴性对照图形(H1N1型别的流感血凝素标准品0μg/ml)。图中的上面一排为被侧样品，其中1、2号样为单孔，3、4号样为复孔。抗原标准品1-4的浓度分别为56μg/ml、42μg/ml、28μg/ml、14μg/ml。2、图片采集采用所述的高端扫描仪将图2所示的待分析图片进行图片扫描采集，将该扫描得到的图片以jpg格式命名和保存在图片文档中。二、数据处理步骤1、图片分析(1)血凝素标准品数据输入、标准品扩散圈直径数据的采集选择标准品序号，并输入标准品的标准抗原含量如下标准品1血凝素56μg/ml；标准品2血凝素42μg/ml；标准品3血凝素28μg/ml；标准品4血凝素14μg/ml。采用平行线法或点线法多次采集数据库中标准品图样的扩散圈的直径，并计算出多次采集的各数据的平均值。采用相同的方法采集样品扩散圈直径数据，并计算出多次采集的各数据的平均值。(2)样品测量值的计算利用方程Y2＝A+BX，依据稀释倍数求出样品的X值，其中Y为标准品或样品的沉淀环直径(系统采集数据)，标准品的X值为手工录入值，样品的X值即为流感疫苗的血凝素含量。各数据参见表1，表1中的血凝素值为标准品输入值，直径的平方值及平均值为采集数据值。三、标准品曲线输出和误差分析将上述表1中处理的标准品数据绘制成图3所示的Y-X曲线，图3的横坐标表示X值(X值为输入标准品数值或待测样品的血凝素值)图像(斜线)是依据Y2＝A+BX方程得出，并进行相关系数的误差分析，得到相关系数为99.54％(参见表2)。表2的A、B回归系数依据Y2＝A+BX方程得出，线性相关性检验与相关系数是依据下列公式得出。对于变量y与x的一组观测值来说，我们把r=Σi=1x(xi-x‾)(yi-y‾)Σi=1x(xi-x‾)2Σi=1x(yi-y‾)2=Σi=1xxiyi-nx‾y‾(Σi=1xxi2-nx‾2)(Σi=1xyi2-ny‾2)]]>称为变量y与x之间的样本相关系数(相关系数) |r|≤1当|r|越接近于1，相关程度越大；当|r|越接近于0，相关程度越小。四、样品结果数据存储输出将上述的样品的批号、稀释倍数、血凝素测量值结果(参见表3)、标准品的数据采集图表、标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于：该方法在常规连接的图片采样仪器、计算机和输出设备上实施，包括数据收集、数据处理、误差分析、数据存储输出步骤；其中：　　　　数据收集步骤包括：　　　　（１）图片的导入和命名：通过所述的图片采集仪器将流感疫苗血凝素测定图片以ｊｐｇ格式的导入到计算机内，并将其命名和保存在图片文档中；　　　　（２）标准品数据的采集：采用平行线测量或点线测量方法对所述图片上的标准品沉淀环直径进行测量，其测量结果自动存入计算机的数据库中，通过对二个或三个平行样的测定，自动计算其平均值；同理依次对若干个标准品进行测量采集；　　　　（３）待测样品数据采集：依据上述步骤（２）的方法进行样品采集；　　　　数据处理步骤包括：　　　　（１）标准曲线的绘制：系统采用最小二乘法求出方程Ｙ↑［２］＝Ａ＋ＢＸ中的Ａ、Ｂ值，并绘制标准曲线；　　　　（２）样品测量值的计算：利用方程Ｙ↑［２］＝Ａ＋ＢＸ，依据稀释倍数求出样品的Ｘ值，其中：Ｙ为标准品或样品的沉淀环直径（系统采集数据），标准品的Ｘ值为手工录入值，样品的Ｘ值即为流感疫苗的血凝素含量；　　　　误差分析步骤包括：利用误差分析软件对所述的标准品的测量数据进行定量误差分析并绘出相应的误差曲线；同时通过观察标准品及样品点在标准曲线中的分布情况，对实验结果进行评价，即说明测量值与真实值的误差及测量结果是否在标准曲线可读范围内。　　　　数据存储输出步骤包括：标准品和样品的测量结果分别存储，可以选用实验序号或样品批号调出所需要的实验及样品报告，并分别通过输出设备进行输出。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：石晶，刘培嵩，王茂祥，
申请(专利权)人：长春创新药物器械研究有限公司，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]