一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]干血斑中提取基因组核酸是一种极为常见的需求，比如婴幼儿遗传病筛查，亲子鉴定，成人多种疾病的检测，法医侦查等，需要提取干血斑中淋巴细胞的基因组，通过对于基因组的分析，其结果对于临床医学疾病诊断及治疗十分重要。目前，干血斑提取基因组DNA主要有柱膜法和磁珠法两种，为了使整个试剂盒不含有毒物质，保证了操作人员的安全，其他方法如饱和酚
‑
氯仿法，盐析沉淀法已经基本不采用；此外，柱膜法提取不能用于机器，也不适用于自动法高通量操作，而且提取效力一般。
[0003]目前，干血斑提取基因组DNA的提取方法很难做到每次都能提到完整的基因组DNA，并且很难做到没有碎片和拖尾现象，因此，亟需研发一种干血斑基因组DNA提取试剂、试剂盒，以提取片段完整、质量稳定、条带整洁的基因组DNA，以来满足企业客户和研究所、各大高校和医疗机构相关人员的需求。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的试剂盒及提取方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术实施例提供一种DNA提取试剂，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；
[0007]其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1
‑
10M/L、Tris质量浓度为10
‑
100mM/L、EDTA的质量浓度为10
‑
100mM/L、Triton X
‑
100的体积分数为2％；
[0008]或所述结合液中，硫氰酸胍的质量浓度为1
‑
10M/L、Tris的质量浓度为10
‑
100mM/L、EDTA的质量浓度为10
‑
100mM/L、吐温20的体积分数为1.5％；
[0009]所述磁珠采用硅羟基磁珠。
[0010]优选的，所述DNA提取试剂包括漂洗液和洗脱液；
[0011]所述漂洗液包括第一漂洗液和第二漂洗液；
[0012]所述第一漂洗液中，PEG 6000 5
‑
10％(w/v)、NaCl 20
‑
50mmol/L，溶剂为无菌水；
[0013]所述第二漂洗液为75
‑
80％的乙醇；
[0014]所述洗脱液为pH为8.0，1M/L Tris或RNase
‑
free水。
[0015]优选的，所述裂解液中，异硫氰酸胍的摩尔浓度为0.5
‑
5mol/L、SDS的浓度为0.1
‑
5％、Tris
‑
HCl缓冲液的浓度为10
‑
80mmol/L、EDTA的浓度为0.5
‑
10mmol/L、NaCl的浓度为5
‑
50mmol/L、Triton X
‑
100的体积分数为0.1
‑
2.0％、吐温20的体积分数为0.1
‑
2.0％。
[0016]优选的，所述磁珠的粒径为200
‑
600nm。
[0017]本专利技术实施例还提供一种DNA提取试剂盒，所述DNA提取试剂盒包括上述所述的
DNA提取试剂。
[0018]优选的，所述的DNA提取试剂盒还包括离心管、与磁力架配合使用。
[0019]本专利技术实施例还提供一种磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法，使用上述所述的DNA提取试剂和所述的DNA提取试剂盒，包括：
[0020]1)将干血斑样品加入裂解液和蛋白酶K，预热振荡裂解，得到裂解混合液；
[0021]2)将上述裂解混合液加入混匀的硅羟基磁珠和磁珠结合液混和液中，振荡混匀；
[0022]3)将步骤2)中的混合液置于磁力架上静置，去除液体；
[0023]4)将步骤3)中的磁珠用漂洗液洗涤2次；
[0024]5)将清洗后的磁珠晾干，用洗脱液洗脱，得到纯化的基因组DNA。
[0025]优选的，所述步骤1)中，所述干血斑样品的数量为3
‑
10片，所述裂解液的加入量为200
‑
400μL，蛋白酶K的加入量为20
‑
50μL，预热温度为60
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70℃，振荡时间为25
‑
40min；
[0026]所述步骤2)中，振荡时间为10min，900rpm。
[0027]优选的，所述预热温度为65℃。
[0028]优选的，所述干血斑样品的片数为3
‑
10片，所述干血斑样品的大小为2
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5mm。
[0029]所述干血斑样品的大小为3mm。
[0030]本专利技术具有如下优点：
[0031]本专利技术的干血斑基因组核酸提取试剂盒能够做到提取多种血液相关样本，而且提取效力高、纯度佳、产品稳定性强。
[0032]本专利技术的干血斑基因组核酸提取方法从干血斑中提取基因组DNA，采用筛选磁珠、磁珠结合液，以及独特的裂解液、缓冲液体和洗涤溶液，可以高效、专一吸附DNA，最大限度的去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，大大提高了提取基因组核酸的质量和总量，本专利技术试剂盒及提取方法便于操作，提取的基因组DNA片段完整、浓度高、纯度高、质量稳定。
附图说明
[0033]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0034]图1为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中不同磁珠筛选试验提取基因组DNA的q值的结果比较图，基因组冷冻前测量值；
[0035]图2为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中磁珠筛选试验提取基因组DNA的q值的结果比较图，基因组冷冻后测量值；
[0036]图3为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中不同磁珠质量对应不同干血斑片数的提取基因组DNA的q值的结果比较图；
[0037]图4为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中不同磁珠与不同磁珠结合液，提取基因组DNA的q值的结果比较图；
[0038]图5为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中不同样本、不同磁珠以及相同磁珠在不同磁珠样本结合液中，提取基因组DNA的q值的结果比较图；
[0039]图6为本专利技术实施例提供的磁珠法提取干血斑基因组DNA的方法中不同磁珠结合
液分别在65℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA提取试剂，其特征在于，所述DNA提取试剂包括裂解液、磁珠以及磁珠结合液；其中，所述磁珠结合液中，硫氰酸胍质量浓度为1
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10M/L、Tris质量浓度为10
‑
100mM/L、EDTA的质量浓度为10
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100mM/L、Triton X
‑
100的体积分数为2％；或所述结合液中，硫氰酸胍的质量浓度为1
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10M/L、Tris的质量浓度为10
‑
100mM/L、EDTA的质量浓度为10
‑
100mM/L、吐温20的体积分数为1.5％；所述磁珠采用硅羟基磁珠。2.如权利要求1所述的DNA提取试剂，其特征在于，所述DNA提取试剂包括漂洗液和洗脱液；所述漂洗液包括第一漂洗液和第二漂洗液；所述第一漂洗液中，PEG 6000 5
‑
10％(w/v)、NaCl 20
‑
50mmol/L，溶剂为无菌水；所述第二漂洗液为75
‑
80％的乙醇；所述洗脱液为pH为8.0，1M/L Tris或RNase
‑
free水。3.如权利要求1所述的DNA提取试剂，其特征在于，所述裂解液中，异硫氰酸胍的摩尔浓度为0.5
‑
5mol/L、SDS的浓度为0.1
‑
5％、Tris
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HCl缓冲液的浓度为10
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80mmol/L、EDTA的浓度为0.5
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10mmol/L、NaCl的浓度为5
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50mmol/L、Triton X
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100的体积分数为0.1
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2.0％、吐温2...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩典霖，胡佳佳，胡美丽，杨亮，
申请(专利权)人：济凡生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：