用于胞内递送分子的多聚化递送系统技术方案

本发明专利技术涉及分子生物学领域，更具体的说，涉及一种多聚化递送系统，其可用于胞内递送货物分子。本发明专利技术的多聚化递送系统能够实现货物分子高效内吞以及从内吞小泡的高效释放，显著提升货物分子的细胞质递送效率。一旦在细胞质中可获得货物分子时，它们就可发挥与其相关的任何作用。因此，本发明专利技术的多聚化递送系统提供了用于影响细胞的生物学机制和途径的有效手段，其可用于研究、治疗、诊断等诸多领域。诊断等诸多领域。诊断等诸多领域。

Polymeric delivery systems for intracellular delivery molecules

【技术实现步骤摘要】
用于胞内递送分子的多聚化递送系统


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，更具体的说，涉及用于胞内递送货物分子的多聚化递送系统。

技术介绍

[0002]细胞膜作为选择性透过性屏障对细胞存活和功能至关重要，虽然小分子物质可以通过细胞的天然过程或脂质双层的直接扩散穿过细胞膜，但是在大多数情况下，外源性的活性生物大分子等细胞内载物从细胞质膜的有效通过，仍然是细胞运送过程的主要障碍。因此，一种能够有效提高细胞内载物向活细胞运输效率的分子转运工具对于其在生物医药等领域的应用极为重要。
[0003]目前，利用细胞穿膜肽(Cell-penetrating peptides,CPPs)介导生物大分子入胞是生物医药领域的研究热点之一。CPPs一般为5-30个氨基酸的多肽，可以通过化学交联、融合表达或非共价结合的方式介导包括蛋白质在内的生物大分子穿过细胞膜进入胞内。由于在介导生物大分子入胞时具有用量低、转运所需时间短、剂量可控、操作简单、免疫反应及毒副作用低等优点，细胞穿膜肽已经被应用于生物医药的各个领域。
[0004]尽管CPPs在转导生物大分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.融合多肽，其包含多聚化结构域序列、细胞穿膜肽、pH敏感融合肽以及蛋白酶识别序列。2.权利要求1所述的融合多肽，其中，所述多聚化结构域是二聚化结构域、三聚化结构域、四聚化结构域或任何更高级的多聚化结构域；优选地，所述多聚化结构域选自：亮氨酸拉链、NOE、GCN4-P1、Delta及其任何组合；优选地，所述多聚化结构域选自亮氨酸拉链；优选地，所述多聚化结构域序列包含SEQ ID NO:1或2所示的序列。3.权利要求1或2所述的融合多肽，其中，所述细胞穿膜肽选自穿透素(Penetratin)、Tat衍生肽(例如，Tat(48-60)或Tat(47-57))、Rev(34-50)、VP22、转运肽(transportan)、Pep-1、Pep-7，及其任意组合；优选地，所述细胞穿膜肽包含Tat衍生肽，例如Tat(48-60)；优选地，所述细胞穿膜肽包含如SEQ ID NO:14所示的序列。4.权利要求1-3任一项所述的融合多肽，其中，所述pH敏感融合肽选自流感病毒HA2或其突变体(例如INF7，KALA或GALA)、蜂毒素(Melittin)，及其任意组合；优选地，所述pH敏感融合肽包含INF7；优选地，所述pH敏感融合肽包含如SEQ ID NO:12所示的序列。5.权利要求1-4任一项所述的融合多肽，其中，所述蛋白酶选自弗林蛋白酶和/或溶酶体半胱氨酸蛋白酶；优选地，所述蛋白酶识别序列选自弗林蛋白酶识别序列、溶酶体半胱氨酸蛋白酶识别序列及其组合。6.权利要求5所述的融合多肽，其中，所述弗林蛋白酶识别序列包含R-X
1-X
2-R(SEQ ID NO:47)，其中，X1为任意氨基酸，X2为K或R；优选地，所述弗林蛋白酶识别序列包含R-R-X
1-X
2-R(SEQ ID NO:48)；优选地，所述弗林蛋白酶识别序列包含SEQ ID NO:49所示的序列；优选地，所述弗林蛋白酶识别序列包含SEQ ID NO:8所示的序列。7.权利要求5或6所述的融合多肽，其中，所述溶酶体半胱氨酸蛋白酶选自组织蛋白酶B、组织蛋白酶C、组织蛋白酶X、组织蛋白酶S、组织蛋白酶L、组织蛋白酶D或组织蛋白酶H；优选地，所述溶酶体半胱氨酸蛋白酶是组织蛋白酶L；优选地，所述组织蛋白酶L识别序列包含SEQ ID NO:10所示的序列。8.权利要求1-7任一项所述的融合多肽，其中，所述蛋白酶识别序列包含弗林蛋白酶识别序列和组织蛋白酶L识别序列；优选地，所述蛋白酶识别序列包含SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:10；优选地，所述蛋白酶识别序列包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10。9.权利要求1-8任一项所述的融合多肽，其中，所述融合多肽从N端至C端包含：所述细胞穿膜肽、pH敏感融合肽、蛋白酶识别序列，或者，从N端至C端包含：所述pH敏感融合肽、细胞穿膜肽、蛋白酶识别序列；并且，所述多聚化结构域序列位于所述融合多肽的N端或C端，或者位于上述任何两个相邻结构域之间；优选地，所述蛋白酶识别序列从N端至C端包含所述弗林蛋白酶识别序列和组织蛋白酶L识别序列，或者从N端至C端包含所述组织蛋白酶L识别序列和弗林蛋白酶识别序列。
10.权利要求1-9任一项所述的融合多肽，其中，所述融合多肽中所包含的任何两个相邻结构域之间任选地通过肽接头连接；优选地，所述肽接头是(G
m
S)
n
，其中m选自1-4的整数，n选自1-3的整数。11.权利要求1-10任一项所述的融合多肽，其中，所述融合多肽包含SEQ ID NOs:16-18任一项所示的序列。12.权利要求1-11任一项所述融合多肽的多聚体；优选地，所述多聚体是二聚体、三聚体或四聚体；优选地，所述多聚体是同源多聚体。13.融合蛋白，其包含权利要求1-11任一项所述的融合多肽，以及另外的多肽；优选地，所述另外的多肽包含可检测的标记；优选地，所述另外的多肽包含表位标签、报告基因编码蛋白序列和/或核定位信号(NLS)序列。14.权利要求13所述的融合蛋白，其中，所述另外的多肽是核酸结合结构域序列；优选地，所述核酸结合结构域序列是锌指蛋白(例如ZFP9)；优选地，所述核酸结合结构域序列包含SEQ ID NO:31所...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛胜祥，于思远，杨晗，潘海峰，任书玲，李廷栋，郭清顺，熊君辉，张军，夏宁邵，
申请(专利权)人：厦门万泰沧海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：