一种蛋白质的表达方法技术

本发明专利技术提供了一种蛋白质的表达方法，使用无血清无动物源性培养基，采用基础培养基和补充培养基进行蛋白质类药物的大规模生产表达，基础培养基适用于细胞扩增和灌流培养，补充培养基适用于补充批次培养，该方法所表达的蛋白质药物不含有非人源糖基化。质药物不含有非人源糖基化。

A protein expression method

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质的表达方法


[0001]本专利技术名为分案申请，原案申请号为2019114049586。
[0002]本专利技术属于生物
，具体地，本专利技术涉及一种蛋白质的表达方法，更具体地本专利技术涉及一种蛋白质药物的CHO细胞表达方法，所表达的蛋白质药物不含有非人源糖基化。

技术介绍

[0003]在蛋白质翻译后的修饰中，糖基化修饰是最重要和最复杂的修饰之一，也是评价蛋白质类药物，如抗体药物质量的关键属性之一。
[0004]蛋白质药物的功能实现与其糖基化修饰密切相关，糖基化修饰会影响蛋白质药物的性能，如构象、稳定性、溶解度、药物代谢动力学、活性及免疫原性等等。
[0005]根据糖基化修饰的位点可以将糖基化分为N位糖基化和O位糖基化，N位糖基化位于Asn-297，寡糖中的N-乙酰氨基葡萄糖与天冬酰胺残基上的酰胺氮连接修饰蛋白质；O位糖基化由寡糖中的N-乙酰半乳糖与丝氨酸或苏氨酸残基上的羟基连接修饰蛋白质。
[0006]动物细胞表达系统所表达的免疫球蛋白中N位的糖基化是最普遍的糖基化修饰，其糖基化修饰位点位于抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述方法使用无血清、无动物源组分的基础培养基及补充培养基对含有抗EGFR抗体Pan-P基因序列的CHO宿主细胞进行培养表达，所述基础培养基为CHOM-B系列的组合培养基，所述补充培养基为CHOM-S系列的组合培养基。2.根据权利要求1所述的抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述方法的CHO宿主细胞的培养表达包含细胞扩增阶段、灌流培养阶段及补充培养阶段，在细胞扩增和灌流培养阶段使用基础培养基，补充培养阶段使用补充培养基。3.根据权利要求2所述的抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞灌流培养阶段的条件为：温度为30℃~39℃；基础培养基pH为6.6~7.1；溶氧量30%~60%；每日补充葡萄糖3~5g/L；搅拌转速80~150rpm。4.根据权利要求3所述的抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞灌流培养阶段的条件为：温度为35.5℃~36.5℃；基础培养基pH为6.6~6.8；溶氧量30%~40%；每日补充葡萄糖3~5g/L；搅拌转速80~150rpm。5.根据权利要求2所述的抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述CHO宿主细胞补充培养阶段的条件为：在灌流培养培养的第2~4天，降低温度至32℃~34℃，pH为7.0~7.3，添加补充培养基，进行补充培养，每日添加补充培养基的量为上灌体积的1%~5%，补充培养8~18天。6.根据权利要求5所述的抗EGFR抗体的制备方法，其特征在于，所述CHO宿...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯盛，郭怀祖，聂丽，郭清城，戴建新，寇庚，徐进，张存超，黄卫红，
申请(专利权)人：上海百迈博制药有限公司上海张江生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：