一种特异性识别PD-L1的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及单克隆抗体技术领域，具体来说是一种特异性识别PD

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体
，具体来说是一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]PD
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1的临床转化研究主要是通过研发可以封闭PD
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1或其配体的抗体进行。这些抗体有的已经应用于临床I期和Ⅱ期实验，有的还在动物模型中进行实验。据文献报道，这些抗体主要应用于：晚期癌症治疗，例如转移性黑色素瘤、肾癌等；慢性和长期病毒感染，比如脉络丛脑膜炎病毒，HIV感染等。另外，对于自身免疫病中PD
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1及其配体的异常表达也有报道，激活PD
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1途径以治疗自身免疫病也在讨论的范围内。目前已有的进入临床实验的封闭PD
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1信号通路的抗体均是针对癌症治疗的，且大多数都是由药物公司研发。
[0003]另外，上个世纪90年代，在驼类体内发现天然缺失轻链，仅由重链组成的抗体。重链单域抗体可直接识别抗原，其蛋白质大小约为15
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17kD，由于分子量小，因此又称为纳米抗体。重链抗体大约含130个氨基酸，具有较小的分子质量和较简单的结构，是可获得的较小的与抗原结合的单位。已有研究表明，纳米抗体相对于传统抗体具有更高的热稳定性，更好的折叠能力以及组织侵入性。文献表明，有些纳米抗体可以通过血脑屏障，这一特性对于药物输送意义重大。且其CDR3区比传统抗体长，更容易与凹陷结构结合，因此对于在封闭酶的活性方面很有优势。此外重链抗体还可以其他蛋白共同表达组成具有双特异性或者多种功能的融合蛋白。重链抗体与荧光蛋白结合极大地推动了分子成像技术的发展，进而推动了肿瘤的个性化治疗及药物研发领域的进步。近年来，国内外已构建了很多驼源天然单域重链抗体噬菌体库，也有半合成驼源单域重链抗体噬菌体库的建立，其展示的纳米抗体在癌症治疗、疫苗研发等领域都有重要应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，通过使用合成法成功构建了噬菌体展示的纳米抗体文库，随后，以PD
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L1胞外域蛋白为抗原筛选抗体，最终得到特异性结合PD
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L1的抗体。纳米抗体本身的分子量较小，具有免疫原性小，高温稳定性等优点，使得针对PD
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L1胞外域蛋白的纳米抗体相对已有的传统抗体具有较大的优势和更广泛的应用。
[0005]为了实现上述目的，在本专利技术的第一方面，提供一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体，所述纳米抗体的互补决定区包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。
[0006]进一步的，所述纳米抗体的骨架区包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列FR1、SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列FR2、SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列FR3和SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列FR4。
[0007]进一步的，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还包括一种多核苷酸，其编码具有上述纳米抗体。
[0009]进一步的，还包括一种表达载体，所述表达载体中包括上述多核苷酸。
[0010]优选的，所述表达载体优选为pET28a，上述多核苷酸可通过分子克隆技术克隆至pET28a中进行表达。
[0011]本专利技术还提供一种宿主细胞(为非繁殖细胞)，该宿主细胞中含有上述的表达载体或其基因组中整合有上述的多核苷酸。
[0012]在本专利技术的另一方面，提供一种产生纳米抗体的方法，包括：培养上述的宿主细胞，使之表达上述的纳米抗体。
[0013]进一步的，提供一种用如上所述表达载体转化的宿主细胞。宿主细胞优选为大肠杆菌。
[0014]在本专利技术的另一方面，提供一种纳米抗体噬菌体(噬菌粒)，其包括：噬菌体(噬菌粒)，以及展示于噬菌体表面的所述的纳米抗体。
[0015]在另一优选例中，所述的噬菌体是商业化噬菌体，即是常规用于进行蛋白展示的噬菌体。例如，所述的噬菌体是M13丝状噬菌体。
[0016]在本专利技术的另一方面，提供所述的纳米抗体或所述的纳米抗体噬菌体的用途，用于检测PD
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L1；或用于制备检测PD
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L1的试剂或试剂盒。
[0017]在另一优选例中，所述的用途为非诊断性的用途。较佳地，用于检测来自人体或动物体以外的样品(如水、药品、食品、农药、饲料、饮品、保健品等)中的PD
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L1。
[0018]在本专利技术的另一方面，提供一种用于检测PD
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L1的试剂盒，所述的试剂盒中包括所述的纳米抗体或所述的纳米抗体噬菌体。
[0019]在一个优选例中，所述试剂盒中还包括固相载体，所述的纳米抗体或纳米抗体噬菌体被固定于固相载体(如多孔板、盖玻片、微珠)或游离存在。
[0020]在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：能与所述的纳米抗体连接的可检测标记物(如HRP)，所述的可检测标记物被连接于所述的纳米抗体或分离地存在于试剂盒；和/或PD
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L1标准品或PD
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L1偶联物(为PD
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L1与载体蛋白的偶联物，如PD
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L1
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BSA、PD
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L1
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OVA)标准品；和/或与可检测标记物相对应的底物；和/或酶联免疫反应试剂(包括但不限于：包被(缓冲)液，洗涤(缓冲)液，封闭液，固定液，终止液，显色液)；和/或说明检测PD
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L1的方法的使用说明书。
[0021]在本专利技术的另一方面，提供一种检测待测样品中PD
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L1存在情况的方法，所述方法包括：以所述的纳米抗体或所述的纳米抗体噬菌体作为PD
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L1的检测抗体，通过酶联免疫反应法来检测待测样品中PD
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L1的存在情况。
[0022]在另一优选例中，将待测样品包被于固相载体上，以携带或不携带可检测标记物(以携带可检测标记物的抗抗体进一步结合)的所述的纳米抗体或所述的纳米抗体噬菌体作为检测抗体，检测PD
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L1的存在情况。
[0023]在另一优选例中，所述的方法为非诊断性的方法。所述的待测样品是来自人体或动物体以外的样品(如水、药品、食品、农药、饲料、饮品、保健品等)。
[0024]本专利技术另一方面，提供一种包含与治疗剂缀合的本专利技术所述抗体的免疫缀合物。所述治疗剂优选为毒素、放射性同位素、药物或细胞毒剂。
[0025]本专利技术另一方面，还提供了包含本专利技术所述抗体的任何一种双特异性分子。例如，
可以将上述PD
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l抗体与具有另一种抗原结合特性的抗体或抗体片段功能性连接组成双特异性抗体。诸如，所述双特异性抗体包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体，所述纳米抗体的互补决定区包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列CDR1、SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列CDR2和SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列CDR3。2.如权利要求1所述的一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体,其特征在于，所述纳米抗体的骨架区包括如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列FR1、SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列FR2、SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列FR3和SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列FR4。3.如权利要求2所述的一种特异性识别PD
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L1的纳米抗体,其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.一种多核苷酸，其特征在于，其编码具有权利要求1~3任一所述的纳米抗体。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体中包括权利要求4所述的多核苷酸。6.如权利要求5所述的一种表达载体，其特征在于，所述表达载体优选为pET28a。7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞内包括权利要求5~6任一所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。8.如权利要求7所述的一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞优选为大肠杆菌。9.一种纳米抗体噬菌体，其特征在于，所述噬菌体表面包括权利要求1~3任一所述的纳米抗体。10.一种用于检测PD
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L1的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1~3任一所述的纳米抗体或权利要求9所述的纳米抗体噬菌体。11.如权利要求10所述的一种用于检测PD
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L1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括固相载体，所述的纳米抗体或纳米抗体噬菌体被固定于固相载体中。12.如权利要求11所述的一种用于检测PD
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【专利技术属性】
技术研发人员：张广华，刘云，陆阳，区文彩，阮月敏，
申请(专利权)人：西宝生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：