一种快速检测组胺的方法技术

本发明专利技术属于食品安全检测领域，提供了一种快速检测组胺的方法，步骤包括，以金核银壳纳米溶胶为增强基底，应用对组胺有选择性吸附的分子印迹聚合物结合表面增强拉曼光谱技术检测样品，对样品中低浓度组胺SERS信号变化有着明显响应，可用于检测水产品，例如鱼肉中的痕量组胺。本发明专利技术检测方法能够简便、快捷、准确地实现组胺定性和定量检测，灵敏度好，选择性高。选择性高。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测组胺的方法


[0001]本专利技术属于食品安全检测领域，具体为一种快速检测组胺的方法，尤其涉及利用分子印迹
‑
表面增强拉曼光谱(SERS)联用技术快速检测鱼肉中组胺的方法。

技术介绍

[0002]组胺又名组织胺，分子式为C5H9N3，化学名为4(5)
‑
(2
‑
氨乙基)咪唑。组胺是一种生物胺,也是对人体健康影响最大的一种多胺类物质，主要由生物体内的组氨酸经过组胺酸脱羧酶脱羧反应生成。新鲜水产品中组胺含量较低，但当鱼肉储存不当、腐烂变质时，会产生大量的组胺。因此，国外及我国均制定了组胺在水产品及其制品中的最高残留限量标准：美国食品和药物管理局规定食用鱼肉中组胺含量不能高于50mg/kg；澳大利亚和欧盟对水产品中的组胺含量提出了严格要求，并规定水产品及其制品中组胺含量不得高于100mg/kg；我国的国家标准《GB 2733
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2015》也规定鲐鱼、鲭鱼、金枪鱼等高组胺鱼类和其他海水鱼类中的组胺限量分别为400mg/kg和200mg/kg。近年来，全国各地乃至全球范围内的沿海地区组胺中毒事件频发，考虑到组胺的潜在危险性，建立食品中组胺快速检测方法对食品安全监管具有重要的现实意义。
[0003]传统的组胺检测方法有高效液相色谱法、液质联用法、毛细管电泳法、酶联免疫法等，这些方法存在前处理复杂、分析时间长、检测成本高等缺点，现有技术所提供的检测食品中组胺的方法并不能达到快速、廉价、准确和灵敏的检测效果。
[0004]以拉曼散射为基础建立的表面增强拉曼光谱(surface
‑
enhanced Raman spectroscopy，SERS)通过将待测物分子吸附在粗糙金属材料表面，可使待测物的拉曼信号增强104～10
10
倍，使得一些微量和痕量物质得以检出。SERS技术为食品等复杂体系中痕量物质的检测提供一种新的途径，现已广泛用于食品中痕量化学物质的分析。现有技术中采用银纳米粒子溶胶利用SERS检测技术对组胺分子进行检测(等人，2016)，检测限为111.2mg/kg，但低于111.2mg/kg浓度的组胺含量依然能通过积累效应对人体产生毒害。
[0005]水产品尤其是鱼肉中基质成分复杂，蛋白质、脂肪、水分等物质会影响待测化学分子与基底结合，进而影响检测结果灵敏度。分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers，MIPs)是基于分子印迹技术制备对目标分子具有高选择性的高分子材料，能够在复杂基质中特异性识别和分离出目标分子,从而达到有效分离和富集的作用。因此通过对现有SERS前处理方法加以改进，添加分子印迹聚合物，有效减少鱼肉样品中基质成分的影响，从而提供一种能够快速、高效、准确的测定出鱼肉样品中痕量的组胺的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于解决上述问题，基于分子印迹
‑
SERS联用技术，提供一种高效、准确的鱼肉中组胺的快速检测方法。
[0007]本专利技术技术方案为：
[0008]一种快速检测组胺的方法，步骤包括：
[0009]将待测样品与分子印迹聚合物材料混匀后，将样品
‑
分子印迹聚合物材料混合物与金核银壳纳米溶胶混匀，并烘干后进行SERS测试；所述的分子印迹材料以组胺为模板分子制备。
[0010]所述的金核银壳纳米金属溶胶粒径为21
‑
29nm，其中金核的粒径为18
±
2nm。优选的，所述的金核银壳纳米溶胶粒径为27nm
±
2nm。
[0011]所述的分子印迹聚合物对组胺有吸附作用，其制备方法为：以组胺为模板分子，与功能单体和交联剂混合，加入引发剂，利用本体聚合方法合成分子印迹材料。聚合后洗涤去除模板分子组胺。
[0012]优选的，模板分子组胺与功能单体的摩尔比为1:4
‑
6；功能单体与交联剂的摩尔比为1：1.5
‑
2。
[0013]优选的，所述的功能单体为甲基丙烯酸，交联剂为二甲基丙烯酸乙二醇酯，引发剂为2,2
‑
偶氮二异丁腈。
[0014]优选的，模板分子组胺与功能单体混合后溶解于溶剂，再加入交联剂和引发剂，反应16
‑
36小时。更优选的反应时间为24小时。优选的，溶剂为乙腈。
[0015]所述的金核银壳纳米溶胶通过以下方法制备：
[0016](1)浓度为0.005％
‑
0.02％的沸腾的氯金酸溶液中加入浓度为0.5％
‑
1.5％的柠檬酸三钠溶液，并加热至340
‑
360℃反应3
‑
6min得到金纳米溶胶，作为金种液；所述的氯金酸与柠檬酸三钠的重量比为1：1.6
‑
2；
[0017](2)金种液与浓度为0.05
‑
0.15mol/L抗坏血酸溶液混合后，加入浓度为0.5
‑
0.15mmol/L的硝酸银溶液，反应3
‑
6min得到金核银壳纳米溶胶；以氯金酸质量计，抗坏血酸与金种液的用量比为1.2
‑
1.5mol：1g，硝酸银与金种液的用量比为80
‑
100mmol：1g。
[0018]优选的，步骤(1)中，氯金酸溶液浓度为0.01％，柠檬酸三钠溶液浓度为1％，氯金酸与柠檬酸三钠的重量比为1：1.8。
[0019]优选的，步骤(1)中，向沸腾的氯金酸溶液中加入柠檬酸三钠溶液过程中搅拌并加热，搅拌速度为1000
‑
1500rpm，加热温度为350℃；反应时间为5分钟。
[0020]优选的，步骤(2)中，抗坏血酸溶液浓度为0.1mol/L，硝酸银溶液浓度为0.1mmol/L，以氯金酸质量计，抗坏血酸与金种液的用量比为1.3
‑
1.4mol：1g，硝酸银与金种液的用量比为85
‑
95mmol：1g。
[0021]步骤(2)中，硝酸银溶液的滴加方式为逐滴滴加；反应温度为室温；反应时间为5分钟。
[0022]上述方法用于检测水产品中的组胺时，样品的前处理方法为：
[0023](A)待测样品匀浆均质，用高氯酸溶液混匀、离心提取处理，取上清液得到待测样品初步提取液；
[0024]优选的，离心温度为4℃；离心速度为4000
‑
8000rpm，优选为5000rpm。
[0025]优选的，高氯酸溶液浓度为0.3
‑
0.5mol/L，与待测样品的用量比为4
‑
10mL:1g，分一到两次加入。
[0026]在本专利技术的一个优选方式中，高氯酸溶液浓度为0.4mol/L，加入量为5mL：1g；分两次添加，添加后离心，合并上清液，得到待测样品初步提取液。
[0027](B)待测样品初步提取液过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测组胺的方法，其特征在于，步骤包括：将待测样品与分子印迹材料混匀后，将样品
‑
分子印迹材料混合物与金核银壳纳米溶胶混匀，并烘干后进行SERS测试；所述的分子印迹材料以组胺为模板分子制备。2.权利要求1所述的快速检测组胺的方法，其特征在于，所述的金核银壳纳米金属溶胶粒径为21
‑
29nm，其中金核的粒径为18
±
2nm。3.权利要求1所述的快速检测组胺的方法，其特征在于，所述的分子印迹材料的制备方法为：以组胺为模板分子，与功能单体和交联剂混合，加入引发剂，利用本体聚合方法合成分子印迹材料。4.权利要求3所述的快速检测组胺的方法，其特征在于，模板分子组胺与功能单体的摩尔比为1:4
‑
6；功能单体与交联剂的摩尔比为1：1.5
‑
2。5.权利要求3或4所述的快速检测组胺的方法，其特征在于，所述的功能单体为甲基丙烯酸，交联剂为二甲基丙烯酸乙二醇酯，引发剂为2,2
‑
偶氮二异丁腈。6.权利要求1或2所述的快速检测组胺的方法，其特征在于，所述的金核银壳纳米溶胶通过以下方法制备：(1)浓度为0.005％
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0.02％的沸腾的氯金酸溶液中加入浓度为0.5％
‑
1...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖克强，张苑怡，宁海花，苗军舰，曲映红，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：