一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法技术

本发明专利技术属于生物技术运用领域，具体公开了一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法。该方法基于胶原酶II和胶原酶IV组合酶解，通过目标组织取样、解离消化、清洗重悬步骤制得单细胞悬液，并针对脂肪含量高或者组织结构较为致密的情况，对清洗液和解离时间进行了优化，获得了高质量的单细胞悬液。本发明专利技术方法可以将大多数鱼类组织成功解离为单细胞悬液，适用范围广，且操作简便，制备效率高，推动了单细胞测序技术在鱼类基础生物学研究中的运用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术运用领域，具体涉及一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，该方法旨在制备鱼类不同组织高质量、高活性的单细胞悬液，以支持鱼类不同组织单细胞研究。

技术介绍

1、新兴的高通量单细胞转录组测序(single-cell rna sequencing，scrna-seq)技术通过解析上万个细胞的转录信息，能够准确鉴定不同组织的细胞类型和状态，从而实现在单细胞水平分析细胞的动态变化及细胞间的关系,深刻揭示全身不同组织行使生物学功能的分子机制。这项技术也在水产动物研究中具有广泛的应用前景，然而，单细胞转录组测序技术的难点之一在于获得高质量的单细胞悬液。目前，养殖鱼类的单细胞组学研究往往局限于某一类组织，缺乏系统性的适用于不同鱼类组织的高质量单细胞解离方法。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本专利技术提供了一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，是一种基于胶原蛋白酶解离的方法，用于获得鱼类16个不同的组织(包括心、肝、脾、头肾、口、眼、鳔、中肾、鳍条、胃、鳃、肠、精巢、卵巢、皮肤和肌肉组织)的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤一中，所述目标组织的重量为15-45mg。

3.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤二中，所述胶原蛋白酶消化液由胶原酶II和胶原酶IV按质量比1:1混合配制而成，总浓度为2mg/mL。

4.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤三中，最后一次清洗结束后用DPBS-0.04％BSA重悬，得到单细胞悬液。</p>

5.根据...

【技术特征摘要】

1.一种适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤一中，所述目标组织的重量为15-45mg。

3.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤二中，所述胶原蛋白酶消化液由胶原酶ii和胶原酶iv按质量比1:1混合配制而成，总浓度为2mg/ml。

4.根据权利要求1所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：步骤三中，最后一次清洗结束后用dpbs-0.04％bsa重悬，得到单细胞悬液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的适用于鱼类不同组织单细胞悬液制备的方法，其特征在于：当所述目标组织为普通组织时，步骤二中所述解离消化的条件为：37℃、23min，步骤三中采用dpbs-0.04...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡鹏，黄松钱，徐元，焦荷，吴智超，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：