一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法技术

本发明专利技术公开了一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用适当的有机溶剂和缓冲溶液为流动相，梯度洗脱，有效完成恩替卡韦及其相关杂质的分离，保证杂质的有效检出。本发明专利技术专属性好，能将存在的降解杂质、残留中间体、紫外吸收的辅料与主成分有效分开，且灵敏度高，能够应用于恩替卡韦口服溶液的质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法
本专利技术涉及药物有关物质测定
，尤其涉及是一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法。
技术介绍
有关物质与药品质量、安全性及疗效密切相关，有关物质的存在可能会降低药物的疗效，甚至引起毒副作用，因此，必须通过适当的检测分析方法控制药物中有关物质的种类和含量，确保药品质量。恩替卡韦是鸟嘌呤核苷类似物，对乙肝病毒(HBV)多聚酶具有抑制作用，化学名称：2-氨基-9-((1S,3R,4S)-4-羟基-3-(羟甲基)-2-甲烯基环戊基)-3H-嘌呤-6(9H)-酮|9-(4-羟基-3-羟甲基-2-亚甲基环戊-1-基)鸟嘌呤。恩替卡韦口服溶液属于3类新药，即在国外上市未在国内上市的药物。然而，目前国内外均未有该品种的有关物质检测方法报道，另通过对原研说明书的查询，恩替卡韦口服溶液处方中含有多种具有紫外吸收的辅料，例如麦芽糖醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯等，增加了有关物质分析方法开发的难度。因此，亟待开发一种灵敏性高，专属性好的恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，以实现对恩替卡韦口服溶液中有关物质的质量控制。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提出的一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法。本专利技术保护一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，所述的有关物质为以下10种：EP杂质A、EP杂质B、EP杂质C、EP杂质D、EP杂质E、EP杂质F、鸟嘌呤、呋喃恩替卡韦、恩替卡韦N2类似物和4-二甲基硅烷恩替卡韦。采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用适当的有机溶剂和缓冲溶液为流动相，梯度洗脱，有效完成恩替卡韦及其相关杂质的分离，保证杂质的有效检出。其中，EP杂质A、EP杂质B、EP杂质C、EP杂质D、EP杂质E、EP杂质F、鸟嘌呤、呋喃恩替卡韦、恩替卡韦N2类似物、4-二甲基硅烷恩替卡韦。化学式分别如下：优选地，所述有机溶剂为乙腈，所述缓冲溶液为柠檬酸钠水溶液，且柠檬酸钠的浓度按体积比为0.04％～0.06％，并用三乙胺调节pH值为6.0～8.0。优选地，该方法中梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈比例为2％；3～40min，乙腈比例从2％变为10％；40～50min，乙腈比例从10％变为20％；50～75min，乙腈比例从20％变为70％；75～85min，乙腈比例为70％；85～88min，乙腈比例为从70％变为2％。进一步地，检测条件为：检测波长为249nm～259nm；流速为0.9～1.1ml/min；进样量为10～50μl；缓冲溶液中柠檬酸钠浓度按体积比为0.04％～0.06％，pH值为6.0～8.0。优选地，检测波长为254nm；流速为1.0ml/min；进样量为20μl；缓冲溶液中柠檬酸钠浓度按体积比为0.05％，pH值为7.0。进一步地，样品配置方法为：精密量取恩替卡韦口服溶液适量，用三乙胺调节乙腈-0.05％柠檬酸钠溶液的pH值至7.00，并使用调节过后的乙腈-0.05％柠檬酸钠溶液按2：98稀释恩替卡韦口服溶液，配制成含恩替卡韦浓度为0.020～0.030mg/ml的溶液。优选地，含恩替卡韦溶液的浓度为0.025mg/ml。本专利技术的有益效果：1、本申请专属性好，能将存在的降解杂质、残留中间体、紫外吸收的辅料与主成分有效分开，且灵敏度高，能够应用于恩替卡韦口服溶液的质量控制。附图说明图1为实施例1中恩替卡韦相关杂质专属性对比色谱图。色谱图中：曲线从上至下分别为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、鸟嘌呤、呋喃恩替卡韦、恩替卡韦N2类似物、4-二甲基硅烷恩替卡韦、恩替卡韦、麦芽糖醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、香精、溶剂。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。本专利技术的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本专利技术限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本专利技术的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本专利技术从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。实施例1：本实施例以含恩替卡韦的溶液为例，使用色谱方法的方法学验证。1.有关物质定位试验配制恩替卡韦样品溶液、各有关物质对照溶液、辅料溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果参见表1，图谱参见图1。表1恩替卡韦与各杂质分离参数结果杂质名称进样保留时间相对保留时间与前峰分离度鸟嘌呤5.2320.22大于2.0呋喃恩替卡韦15.520.66大于2.0EP杂质A21.1870.90大于2.0EP杂质B22.0020.94大于2.0恩替卡韦23.4151.00大于2.0恩替卡韦N2类似物24.2351.04大于2.0EP杂质C24.9731.07大于2.0EP杂质D26.3151.12大于2.0EP杂质E34.381.47大于2.04-二甲基甲硅烷基恩替卡韦53.4022.28大于2.0EP杂质F78.533.35大于2.0结果显示：恩替卡韦有关物质之间都能达到良好的分离。2.检测限、定量限试验采用信噪比法测定恩替卡韦及其各有关物质的检测限和定量限。分别配制恩替卡韦及其各有关物质的贮备液，稀释至一定浓度并进样，计算峰高与噪声的比值(信噪比)，其信噪比(S/N)约为10的样品检测量即为定量限，信噪比(S/N)约为3的样品检测量即为检测限，结果见表2。表2定量限与检测限试验结果结果显示：本方法对各有关物质的响应高，能准确控制各有关物质的含量。3.标准曲线精密称取恩替卡韦及其10个有关物质，用乙腈-0.05％柠檬酸钠溶液(用三乙胺调节pH值至7.00)(2：98)稀释，配制成7份不同浓度的溶液。分别进样并记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到恩替卡韦及其各有关物质的线性回归方程，结果见表3。表3标准曲线实验结果结果显示：在本方法下，恩替卡韦及其10个有关物质在一定浓度范围内，均能呈现良好的线性。4.准确度精密量取适量恩替卡韦口服溶液，用乙腈-0.05％柠檬酸钠溶液(用三乙胺调节pH值至7.00)(2：98)稀释，配制成含恩替卡韦浓度为0.025mg/ml的溶液9份，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用适当的有机溶剂和缓冲溶液为流动相，梯度洗脱。/n

【技术特征摘要】
1.一种恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用适当的有机溶剂和缓冲溶液为流动相，梯度洗脱。


2.根据权利要求1所述的恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙腈，所述缓冲溶液为柠檬酸钠水溶液且柠檬酸钠的浓度按体积比为0.04％～0.06％，并用三乙胺调节pH值为6.0～8.0。


3.根据权利要求2所述的恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，其特征在于：采用的梯度洗脱程序为：0～3min，乙腈比例为2％；3～40min，乙腈比例从2％变为10％；40～50min，乙腈比例从10％变为20％；50～75min，乙腈比例从20％变为70％；75～85min，乙腈比例为70％；85～88min，乙腈比例为从70％变为2％。


4.根据权利要求2所述的恩替卡韦口服溶液有关物质分析方法，其特征在于：检测条件：检测波长为249nm～259nm；流速为0.9～1.1ml/min；进样量为10～50μl；缓冲溶液中柠檬酸钠浓度按体积比为0.04％～0....

【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，陶春蕾，孟广东，李逍，
申请(专利权)人：安徽万邦医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34