一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用。所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F‑68；所述脂质混合物用于培养T细胞的无血清培养基中；所述无血清培养基包括Lonza X‑VIVO 15

【技术实现步骤摘要】
一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用
本专利技术涉及细胞培养
，具体为一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用。
技术介绍
T细胞是淋巴细胞的主要组成之一，具有多种生物学功能，可直接杀伤靶细胞，也可辅助其它淋巴细胞发挥功能，是身体抵御疾病感染、防止肿瘤形成的主要免疫细胞之一。在体外富集、活化、扩增T细胞，可回输治疗多种疾病，包括恶性肿瘤、自身免疫疾病等。在这个过程中，使用安全可靠的无血清培养基对T细胞进行体外扩增，可避免人源、动物源病原体的引入风险，同时避免T细胞扩增体系汇总不明成分可能引起的机体免疫反应，对后续T细胞治疗产品的临床应用非常关键。T细胞的体外扩增要使用能够促进T细胞快速增殖且保持细胞活率的无血清培养基。而脂肪酸如棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇可用于合成细胞膜，是无血清培养基的重要组分。脂肪酸进入细胞后也可氧化分解成乙酰辅酶A，进入三羧酸循环，为细胞提供大量能量，促进T细胞生长。然而，棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇难溶于水，现有的商业化T细胞无血清培养基往往将脂肪酸和胆固醇直接加到培养基中，这样会导致脂质组分不稳定，难以被细胞吸收。综上所述，如何提高脂肪酸和胆固醇在水中的溶解度，增加脂质组分的稳定性和吸收率，对于提高T细胞的细胞活率和增殖倍数有关键作用。因此，配制一种用于细胞培养基的脂质混合物具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于细胞培养基的脂质混合物及其配制方法与应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种用于细胞培养基的脂质混合物，所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F-68。较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg维生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68。较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg维生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。较为优化地，所述脂肪酸混合物包括棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇其中一种或四种混合物。较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.01~0.5mg棕榈酸、0.01~0.5mg棕榈油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg胆固醇。较为优化地，所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.1mg棕榈酸、0.1mg棕榈油酸、0.1mg硬脂酸和0.1mg胆固醇。较为优化地，一种用于细胞培养基的脂质混合物的配制方法，包括以下步骤：取注射水加入洁净的烧杯中，依次加入葡聚糖、维生素E醋酸酯、聚醚F-68搅拌均匀；再依次加入棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇继续搅拌均匀；转移至容量瓶中定容，0.2μm过滤器过滤，得到脂质混合物，分装，置于4℃储存。较为优化地，一种用于细胞培养基的脂质混合物的应用，所述脂质混合物用于培养T细胞的无血清培养基中。较为优化地，所述无血清培养基包括LonzaX-VIVO15TM培养基、Corning88-581-CMDC/CIK细胞无血清培养基、LonzaX-VIVO15TM无酚红培养基中的一种。较为优化地，所述脂质混合物以1:1000的比例加入培养T细胞的无血清培养基中。本技术方案中，以棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸三种脂肪酸以及胆固醇形成脂肪酸混合物，作为T细胞生长、增殖、新陈代谢所必要的脂质类营养物质。加入葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F-68三种脂质作为添加成分，辅助培养T细胞；其中，三种添加剂之间无相互反应，葡聚糖为细胞培养常用的溶解剂，对细胞安全，能够辅助棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、胆固醇溶解；维生素E乙酸酯为细胞培养常用的抗氧化剂，能有效防止棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸在保存过程中氧化；聚醚F-68为细胞培养常用的表面活性剂，调节水油相容性，能够促进棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、胆固醇溶于水，进而溶于细胞培养基；以此，添加成分促进了T细胞对脂肪酸混合物中营养成分的吸收，显著提高了T细胞活率和细胞增殖倍数。与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：（1）添加成分有效提高了棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇在水中的溶解度，成分安全稳定，加入T细胞无血清培养基中脂质混合物易于被T细胞吸收，可有效提高T细胞活率和细胞增殖倍数，具有很高的科研和临床应用价值。（2）脂质混合物中各成分均为细胞培养常用的安全成分，配方简便，提高了棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸以及胆固醇的稳定性，在科研和可能的临床应用中具有更高的稳定性和确定性。（3）通过对脂质混合物中各组分的精准配比，使得脂质混合物具有优异的性能，其可以有效提高T细胞活率和细胞增殖倍数，培养10天，在原商品化无血清培养基基础上，将T细胞扩增倍数提高200%以上，将终末细胞活率提高20%以上。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1：实施例1的T细胞的增殖曲线图；图2：实施例1的T细胞活率图；图3：实施例2的T细胞的增殖曲线图；图4：实施例2的T细胞活率图；图5：实施例3的T细胞的增殖曲线图；图6：实施例3的T细胞活率图；图7：实施例4的T细胞的增殖曲线图；图8：实施例4的T细胞活率图；图9：实施例5-8的T细胞的增殖曲线对比图；图10：实施例5-8的T细胞活率对比图；图11：实施例9的T细胞的增殖曲线图；图12：实施例9的T细胞活率图；图13：实施例10的T细胞的增殖曲线图；图14：实施例10的T细胞活率图；图15：实施例11-13的T细胞的增殖曲线对比图；图16：实施例11-13的T细胞活率对比图。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中的材料来源：棕榈酸（Sigma，货号P0500）、棕榈油酸（Sigma，货号P9417）、硬脂酸（Sigma，货号S4751）、胆固醇（Sigma，货号C3045）、葡聚糖（Sigma，货号D4876）、维生素E醋酸酯（Sigma，货号29992）、聚醚F-68（Gibco，货号24040032）、所述商业化T细胞无血清培养基为X-VIVO15TM培养基（Lonza，货号04-418Q）、KBM581DC/CIK培养基（Corning，货号88-551-CM）、X-VIVO15TM无酚红培养基（Lonza，货号04-C44Q）。另，实施例中其他所用的方法和试剂，除非另有说明，否则为本领域常规的方法和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于细胞培养基的脂质混合物，其特征在于：所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F-68；所述脂肪酸混合物包括棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇四种混合物；/n所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg维生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68、0.01~0.5mg棕榈酸、0.01~0.5mg棕榈油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg胆固醇；/n所述脂质混合物以1:1000的比例加入培养T细胞的无血清培养基中。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于细胞培养基的脂质混合物，其特征在于：所述脂质混合物包括脂肪酸混合物和添加成分；所述添加成分包括葡聚糖、维生素E醋酸酯和聚醚F-68；所述脂肪酸混合物包括棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸和胆固醇四种混合物；
所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.02~2mg葡聚糖、0.02~2mg维生素E醋酸酯、0.02~2mg聚醚F-68、0.01~0.5mg棕榈酸、0.01~0.5mg棕榈油酸、0.01~0.5mg硬脂酸和0.01~0.5mg胆固醇；
所述脂质混合物以1:1000的比例加入培养T细胞的无血清培养基中。


2.根据权利要求1所述的一种用于细胞培养基的脂质混合物，其特征在于：所述脂质混合物的原料包括以下成分：每毫升含量，0.2mg葡聚糖、0.2mg维生素E醋酸酯、0.2mg聚醚F-68。


3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：马士棋，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32