红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法及应用技术

本文提供了一种红细胞膜碎片冻干保护液，其包括：10mM

【技术实现步骤摘要】
红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法及应用


[0001]本专利技术涉及红细胞膜碎片冻干保护液，以及利用该冻干保护液对红细胞膜碎片进行冻干处理的冻干方法。本专利技术还涉及该冻干方法制备的冻干细胞膜碎片及其在血型反定型检测方面的应用。

技术介绍

[0002]目前，临床上进行血型检测主要采用微柱凝胶血型卡，其本质为利用凝集技术检测抗原抗体反应。其中，进行正定型检测是用血型单克隆抗体试剂检测红细胞膜上血型抗原，反定型检测则是用红细胞试剂检测血清中相应抗体。该红细胞试剂采用红细胞保存液来保存红细胞。由于不同单位使用的红细胞保护液的成份及理化性质的差异，会造成反定型用红细胞试剂的质量不稳定，导致血清抗体检测结果不准确，影响到临床输血安全。
[0003]一些研究者考虑采用其他在表面带有血型抗原的颗粒物来代替红细胞进行反定型检测。例如，中国专利公开CN101387648A描述了在表面包被血型抗原的磁珠，试图代替红细胞用于血型的反定型检测。然而，已知的是血型抗原为膜蛋白，其在体外难以维持体内环境下所具有的三维结构，会逐渐失去抗原性(与相应血型抗体的反应能力)。因此，这种包被血型抗原的磁珠并不能解决红细胞难以长期保存以及反定型检测难以标准化的问题。
[0004]另一些反定型方法利用红细胞膜碎片采用酶联免疫反应进行检测(灵敏度高于凝集技术)，但同样存在血型抗原难以保存的问题。红细胞膜碎片大多为现用现配，少数放在4摄氏度和
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20摄氏度短期保存。使用新鲜制备的血型抗原造成工艺复杂，人力过多地消耗于抗原制备中。膜碎片的短期保存方法存在很多缺点，如保存天数不足一周，并且随着保存天数增长，抗原性下降，不适合将红细胞膜碎片作为原料进行大批量生产，造成批间差严重。因而，在血型检测或膜蛋白应用相关领域，一直在探寻适合的原料保存方法。

技术实现思路

[0005]在一方面，本文提供了一种红细胞膜碎片冻干保护液，其包括：10mM
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20mM的葡萄糖、6mM
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12mM的乳糖、121mM
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141mM的海藻糖、29mM
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39mM的NaCl、4.3mM
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5.3mM的KCl、0.115mM
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0.125mM的KH2PO4和0.6mM
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1.2mM的Na2HPO4。
[0006]在一些实施方案中，所述红细胞膜碎片冻干保护液包括：20mM的葡萄糖、10mM的乳糖、140mM的海藻糖、39mM的NaCl、5.3mM的KCl、0.125mM的KH2PO4和1.2mM的Na2HPO4；10mM的葡萄糖、12mM的乳糖、141mM的海藻糖、31mM的NaCl、4.3mM的KCl、0.115mM的KH2PO4和1.1mM的Na2HPO4；或者15mM的葡萄糖、10mM的乳糖、131mM的海藻糖、35mM的NaCl、5.0mM的KCl、0.115mM的KH2PO4和1.1mM的Na2HPO4。
[0007]另一方面，本文提供了一种冻干红细胞膜碎片的方法，其包括：1) 制备新鲜红细胞膜碎片；以及2) 将所述新鲜红细胞膜碎片与上述红细胞膜碎片冻干保护液混合后进行冻干处理。
[0008]在一些实施方案中，该方法步骤2)包括：i) 将所述新鲜红细胞膜碎片与所述红细
胞膜碎片冻干保护液混合，将所得的混合物置于4摄氏度至
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20摄氏度的温度下预冷，接着进一步降温使其冻结；以及ii) 对冻结的所述混合物进行冻干处理。
[0009]在一些实施方案中，步骤i)中所述预冷在
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20摄氏度下进行30分钟。
[0010]在一些实施方案中，步骤i)中所述降温为以10摄氏度/分钟的速率降至
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70摄氏度，所述冻结在
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70摄氏度进行2小时以上。
[0011]在一些实施方案中，步骤i)中所述新鲜红细胞膜碎片与所述红细胞膜碎片冻干保护液以体积比1：9混合。
[0012]在一些实施方案中，步骤ii)中所述冻干处理包括一次干燥和二次干燥，在所述一次干燥过程中让冻干机的隔板温度和压力分别保持在
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50摄氏度和2
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4帕，处理时间18小时；在所述二次干燥过程中让冻干机的隔板温度和压力分别保持在20摄氏度和2
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4帕，处理时间为10小时。
[0013]另一方面，本文提供了采用上述方法制备的冻干红细胞膜碎片。
[0014]另一方面，本文提供了上述冻干红细胞膜碎片在血型反定型检测中的应用。
[0015]本文提供的红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法可用于制备冻干红细胞膜碎片，该冻干红细胞膜碎片可用于血型检测，有利于反定型过程的标准化。
附图说明
[0016]图1显示了新鲜制备的、不同保存温度下保存7天时的红细胞膜碎片以及经不同冻干保护液冻干制备的红细胞膜碎片常温保存7天时的抗原性检测结果。横坐标显示标准品抗体的稀释倍数，纵坐标显示OD450值(以下各图坐标轴同此说明)。
[0017]图2显示了新鲜制备的、不同保存温度下保存14天时的红细胞膜碎片以及经不同冻干保护液冻干制备的红细胞膜碎片常温保存14天时的抗原性检测结果。
[0018]图3显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同冻干保护液冻干制备的红细胞膜碎片常温保存21天时的抗原性检测结果。
[0019]图4显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同冻干保护液冻干制备的红细胞膜碎片常温保存28天时的抗原性检测结果。
[0020]图5显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同预冷温度处理所制备的冻干红细胞膜碎片当天的抗原性检测结果。
[0021]图6显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同预冷温度处理所制备的冻干红细胞膜碎片保存7天时的抗原性检测结果。
[0022]图7显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同预冷温度处理所制备的冻干红细胞膜碎片保存14天时的抗原性检测结果。
[0023]图8显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同预冷温度处理所制备的冻干红细胞膜碎片保存21天时的抗原性检测结果。
[0024]图9显示了新鲜制备的红细胞膜碎片以及经不同预冷温度处理所制备的冻干红细胞膜碎片保存28天时的抗原性检测结果。
具体实施方式
[0025]除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常
理解的含义。
[0026]“红细胞膜碎片”在本文中指非完整状态的红细胞膜。一般可通过低渗或反复冻融等方式处理红细胞，使红细胞膜破碎，接着通过离心将膜碎片与与其他成分(如血红蛋白)分开，获得沉淀物形式的红细胞膜碎片。红细胞膜碎片的成分包括脂类和膜蛋白，例如各种血型抗原。“新鲜红细胞膜碎片”指新制备的红细胞膜碎片，通常在制备后保存时间不超过1天。
[0027]“冻干保护液”，也可称为“冻干保护剂”， 在本文中指在冻干处理时与红细胞膜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.红细胞膜碎片冻干保护液，包括：10mM
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20mM的葡萄糖、6mM
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12mM的乳糖、121mM
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141mM的海藻糖、29mM
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39mM的NaCl、4.3mM
‑
5.3mM的KCl、0.115mM
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0.125mM的KH2PO4和0.6mM
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1.2mM的Na2HPO4。2.如权利要求1所述的红细胞膜碎片冻干保护液，其包括：20mM的葡萄糖、10mM的乳糖、140mM的海藻糖、39mM的NaCl、5.3mM的KCl、0.125mM的KH2PO4和1.2mM的Na2HPO4；10mM的葡萄糖、12mM的乳糖、141mM的海藻糖、31mM的NaCl、4.3mM的KCl、0.115mM的KH2PO4和1.1mM的Na2HPO4；或者15mM的葡萄糖、10mM的乳糖、131mM的海藻糖、35mM的NaCl、5.0mM的KCl、0.115mM的KH2PO4和1.1mM的Na2HPO4。3.冻干红细胞膜碎片的方法，包括：1) 制备新鲜红细胞膜碎片；以及2) 将所述新鲜红细胞膜碎片与权利要求1或2所述的红细胞膜碎片冻干保护液混合后进行冻干处理。4.如权利要求3所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞伟，王丽，王秀柱，黄志刚，王伟权，
申请(专利权)人：天津德祥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：