一种磁珠干化保护液、干化磁珠及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生化试剂技术领域，具体涉及一种磁珠干化保护液、干化磁珠及其制备方法。其中所述磁珠干化保护液，以质量百分数计，所述组分包括5‑15％纤维二糖，0.005‑0.02％吐温20和0.05‑0.2％蔗糖酯，余量为水；所述蔗糖酯的HLB值为15。本发明专利技术提供的磁珠干化保护液，可以最大限度的保护干化羟基磁珠的性能，干化后的羟基磁珠可以室温保存和运输，保存期限长，有助于在微流控芯片中应用。

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠干化保护液、干化磁珠及其制备方法
本专利技术涉及生化试剂
，具体涉及一种磁珠干化保护液、干化磁珠及其制备方法。
技术介绍
核酸的分子生物学技术是进行病原微生物检测、物种鉴定、物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统进化等常用研究手段之一。能否提取出高质量的核酸则是分子生物学实验中的关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败。因此，核酸提取是分子生物学最关键的方法之一。随着分子生物学的广泛应用，对核酸提取技术也提出了新的要求，高效、便捷、环保、大通量、自动化成为核酸提取技术发展的主流方向。从第1代化学法，如酚-氯仿法、Trizol法，到第2代吸附柱法，以及近年发展起来的第3代磁珠法，其提取技术和效率不断地改进优化。羟基磁珠表面修饰大量的硅烷醇基团(羟基)，能在高盐低pH条件下和溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合，而不与其他杂质(如蛋白)结合，迅速从生物样品中分离核酸，操作安全简单，非常适用于核酸的自动化和高通量提取。然而市面上磁珠几乎都是在保存液中运输和使用，干燥会极大损害磁珠性能，但随着磁珠纯化方法的日渐普及，以及微流控设备的研发和进步，如何预置干化磁珠变得十分重要，因为设备和芯片的小型化，能够减少试剂仓单独储存磁珠能够降低芯片体积，而且，干化后磁珠可以预置在芯片的任意位置，因此可以极大地减轻微流控过程液体流动的复杂性，给予开发者更大的空间去研发和优化，提供更便捷的使用和控制。中国专利技术专利申请CN109725148A公开了一种免疫磁珠保存液，含有缓冲液、情性蛋白质、甘油、水溶性糖、人工合成高分子聚合物、蛋白稳定剂、还原性物质、氨基酸、整合剂、血清、表面活性剂和防腐剂。该专利技术的免疫磁珠保存液，使免疫磁珠可以在4℃保存条件下一年内维持较高的活性，为免疫磁珠在实际检测中的应用提供了保障。中国专利技术专利申请CN109725141A公开了一种链霉亲和素偶联磁珠(SA-磁珠)冻干工作液、SA-磁珠冻干品及冻干品的制备方法，所述冻干工作液适用于碱性磷酸酶发光体系，包括蛋白保护剂，所述蛋白保护剂为酪蛋白钠。所述冻干工作液还包括缓冲液，所述缓冲液为TBS缓冲液，所述TBS缓冲液的组分为10-50mMTris-HC1，0.9％Nacl，pH:7.4，该专利技术的冻干工作液，包括了酪蛋白钠和TBS缓冲液，以使冻干工作液更适于碱性磷酸酶反应体系的SA-磁珠冻干品：SA-磁珠与冻干工作液的混合液以微液滴形式点样到芯片中再通过原位冻干后得到冻干品，冻干品复溶后能够保持很好的结合生物素的活性，与生物素化抗体、抗原及碱性磷酸醇标记抗体发生夹心反应后，对酶催化底物的活性影响小，发光值高而稳定。中国专利技术专利申请CN108008125A公开了一种适用于免疫磁珠的冻干工作液，所述冻干工作液为冻干缓冲液、冻干保护剂和防腐剂的组合，所述冻干缓冲液、冻干保护剂与防腐剂的质量比为1-10:1-500:1；所述冻干缓冲液为三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、硼酸棚砂缓冲液中的一种或多种组合；所述冻干保护剂包括糖类物质和聚合物，所述糖类物质与聚合物的质量比为0.1-20:1。以上保护液均为冻干保护液，需要冷冻干燥，用于免疫磁珠的保存，而羟基磁珠在冷冻、干燥和离心操作条件下均会引起磁珠团聚，不易于重悬和分散，并且影响磁珠表面功能基团的化学活性。因此开发一种适合于羟基磁珠的干化保护液，成为一个急需解决的重要课题。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种羟基磁珠的干化保护液，以最大限度的保护干化羟基磁珠的性能，干化后的羟基磁珠可以室温保存和运输，保存期限长，52℃下可保存50天。本专利技术上述目的通过如下技术方案予以实现：一种磁珠干化保护液，其组分包括纤维二糖、吐温20、蔗糖酯和水；优选地，以质量百分数计，所述组分包括5-15％纤维二糖，0.005-0.02％吐温20和0.05-0.2％蔗糖酯，余量为水；所述蔗糖酯的HLB值为15。优选地，以质量百分数计，其组分包括8-12％纤维二糖，0.008-0.01％吐温20和0.08-0.15％蔗糖酯，余量为水。优选地，所述组分还包括葡聚糖；葡聚糖的平均重均分子量为2000-9000。优选地，所述葡聚糖的质量百分比为2-5％。本专利技术的第二目的是提供上述磁珠干化保护液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)先将吐温与水混合均匀得吐温水溶液；优选地，所述吐温水溶液的浓度为8-12％；优选为10％；(2)再将蔗糖酯和水混合均匀，得蔗糖水溶液；优选地，所述蔗糖水溶液的浓度为8-12％；优选为10％；(3)最后将(1)中加入蔗糖水溶液，再分次或一次加入其余磁珠干化保护液组分，45-55℃混合均匀即得。本专利技术的另一目的是提供一种干化磁珠，所述干化磁珠包括磁珠和磁珠干化保护剂，所述磁珠干化保护剂由磁珠干化保护液晾干而成；所述磁珠干化保护液为任选地上述磁珠干化保护液；优选地，所述磁珠与磁珠干化保护液的质量体积比为20-30：1mg/mL。优选地，所述干化磁珠为干化硅羟基磁珠。本专利技术的再一目的是提供一种干化磁珠的制备方法，包括如下步骤：将磁珠分散于所述磁珠干化保护液中，室温晾干或在45-60℃烘箱中干燥30-50min即得。优选地，所述磁珠为硅羟基磁珠；优选地，所述磁珠与磁珠干化保护液的质量体积比为20-30：1mg/mL；优选地，所述磁珠预先在500-1200W下超声5-15min，经吸附弃掉上清液；优选地，所述晾干为晾干10-15h。本专利技术还有一个目的是提供上述磁珠干化保护液或干化磁珠在微流控芯片中的应用。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术开发了一种磁珠干化保护液，包括纤维二糖、吐温、蔗糖酯和水；采用磁珠干化保护液干化的磁珠可以确保干化后羟基磁珠的性能，且可以室温保存和运输；(2)本专利技术进一步提供了磁珠干化保护液的各成分的最佳范围配比，可进一步明显提高干化后羟基磁珠的性能，并可以延长保护期，研究证明，本专利技术干化后羟基磁珠在室温在52℃下可保存50天；可以通过理论推算常温下可保存12个月以上，在冷藏4℃下可以保存3年以上。(3)本专利技术磁珠干化保护液使用方便，直接加入裂解液和样品即可使用。(4)采用本专利技术磁珠干化保护液干化的羟基磁珠，应用范围广，可以在磁珠法纯化方面和微流控方面广泛使用，特别是在微流控芯片方面，能够减少试剂仓单独储存磁珠能够降低芯片体积，而且，干化后磁珠可以预置在芯片的任意位置，因此可以极大地减轻微流控过程液体流动的复杂性，给予开发者更大的空间去研发和优化，提供更便捷的使用和控制。(5)本专利技术发现，在磁珠干化保护液中加入纤维二糖，相比蔗糖、聚乙二醇和乳糖等其他物质，可以起到最好的保护作用，同时加入葡聚糖可以起到很好的协同作用，且意外发现葡聚糖的分子量对干化磁珠的保护具有较明显的影响，分子量过大本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁珠干化保护液，其组分包括纤维二糖、吐温20、蔗糖酯和水。/n

【技术特征摘要】
1.一种磁珠干化保护液，其组分包括纤维二糖、吐温20、蔗糖酯和水。


2.根据权利要求1所述的磁珠干化保护液，其特征在于，以质量百分数计，所述组分包括5-15％纤维二糖，0.005-0.02％吐温20和0.05-0.2％蔗糖酯，余量为水；所述蔗糖酯的HLB值为15。


3.根据权利要求2所述的磁珠干化保护液，其特征在于，以质量百分数计，其组分包括8-12％纤维二糖，0.008-0.01％吐温20和0.08-0.15％蔗糖酯，余量为水。


4.根据权利要求1-3任意一项所述的磁珠干化保护液，其特征在于，所述组分还包括葡聚糖；葡聚糖的重均分子量为2000-9000。


5.根据权利要求4所述的磁珠干化保护液，其特征在于，所述葡聚糖的质量百分比为2-5％。


6.一种根据权利要求1-5任意一项所述的磁珠干化保护液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)先将吐温与水混合均匀得吐温水溶液；优选地，所述吐温水溶液的浓度为8-12％；
(2)再将蔗糖酯和...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑜，蔡亦梅，贾欣月，李洁昆，蒋鹏翀，高静，任鲁风，
申请(专利权)人：北京中科生仪科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11