抗人程序死亡因子-1单克隆抗体制造技术

本发明专利技术提供了人PD‑1抗体、其抗原结合片段及其医药用途。还提供了包含所述抗体CDR区的嵌合抗体、包含人PD‑1抗体及其抗原结合片段的药物组合物，以及所述抗体在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
抗人程序死亡因子-1单克隆抗体
本申请涉及免疫学领域。具体涉及鼠抗人程序死亡因子-1(PD1)单克隆抗体及其应用。
技术介绍
程序死亡因子-1(PD1)是CD28家族成员，在活化的B细胞，T细胞及髓样细胞上表达。人PD1由基因Pdcd1编码，位于2q37.3，全长9.6kb，由5个外显子和4个内含子组成，其上游包含663bp的启动子。PD1为55KDa的I型跨膜蛋白，分子结构由胞外区，跨膜区及胞内区组成，胞外区含有一个免疫球蛋白可变区IgV结构域，胞内区含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和免疫受体酪氨酸转换作用模块(ITSM)。PD-1胞外区氨基酸序列和CTLA-4有24％的同源性，与CD28有28％的同源性。在T细胞被激活后，PD-1主要通过ITIM将酪氨酸磷脂酶SHP2集合，导致下游效应分子去磷酸化。PD-1有两个配体：PD-L1和PD-L2。PD-L1和PD-L2都是B7同源物，PDL基因位于人染色体9P24.2位点，大小为42kb，其分子结构均包含一个免疫球蛋白样可变区结构域，一个恒定区样结构域，一个跨膜区和一个短的胞质尾巴。PD-1与PD-L1和PD-L2结合后可下调T细胞的活化。PD-L1表达于多种肿瘤细胞表面，这些肿瘤细胞包括：肺癌，胃癌，肝癌，食道癌，肾癌，卵巢癌，宫颈癌，乳腺癌，皮肤癌，结肠癌，膀胱癌，神经胶质癌，头颈癌，口腔鳞状细胞癌。而且这些癌症周边发现大量表达PD-L1的CD8+T细胞，临床结果统计显示，PD-L1在肿瘤细胞上的高表达水平与癌症患者不良预后有关。r>
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有抗体结合PD-1的亲和力和特异性不高，不能有效阻断PD-1与PD-L1、PD-L2结合的缺陷和不足，提供了新的能高效结合PD-1并能阻断PD-1与PD-L1和PD-L2结合的抗体，鼠单抗在SEB超抗原刺激PBMC及混合淋巴细胞反应实验(MLR)中，更能促进T细胞分泌细胞因子IL2和IFNγ。本专利技术提供了抗PD1的单克隆抗体。具体地，本专利技术提供了以下几个方面：1.抗PD1的抗体或其抗原结合片段，包含选自以下各项组成的组的重链CDR1-3和轻链CDR1-3：(1)HCDR1：由SEQIDNO：8的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：9的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：10的序列表示；LCDR1：由SEQIDNO：20的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：21的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：22的序列表示；(2)HCDR1：由SEQIDNO：12的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：13的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：14的序列表示；LCDR1：由SEQIDNO：24的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：25的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：26的序列表示；(3)HCDR1：由SEQIDNO：16的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：17的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：18的序列表示；LCDR1：由SEQIDNO：28的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：29的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：30的序列表示。2.上述1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包括：(1)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：7所示的氨基酸序列，和轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：19所示的氨基酸序列；(2)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：11所示的氨基酸序列，和轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：23所示的氨基酸序列；(3)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：15所示的氨基酸序列，和轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：SEQIDNO：27所示的氨基酸序列。3.上述1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体还包含重链恒定区和轻链恒定区，优选来自人IgG或IgM，更优选IgG4。4.上述1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab，scFv，Fab′，dAb，F(ab′)2，Fv或Fab/c。5.上述1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。6.编码上述1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。7.药物组合物，其包含上述1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段；可选地，其还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。8.如上述1-5任一项所述的PD-1抗体或其抗原结合片段、如上述7所述的药物组合物在制备用于治疗PD-1介导的疾病或病症的药物中的用途。9.如上述1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段、如上述7所述的药物组合物在预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断治疗肿瘤疾病或在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗和/或诊断治疗肿瘤疾病的药物中的用途，优选地，所述肿瘤选自肺癌，胃癌，肝癌，食道癌，肾癌，卵巢癌，宫颈癌，乳腺癌，皮肤癌，结肠癌，膀胱癌，神经胶质癌，头颈癌，口腔鳞状细胞癌。10.上述7所述的药物组合物或上述9所述的用途，所述药物组合物或药物为适于注射的形式，优选是适于通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌内注射或病灶内注射施用的形式。如本专利技术中所使用的，术语“轻链”包括全长轻链和其具有可变区序列来赋予结合特异性的片段。全长轻链包括可变区结构域VL和恒定区结构域CL。轻链的可变区结构域在多肽的氨基末端。轻链包括κ链和λ链。如本专利技术中所使用的，术语“重链”包括全长重链和其具有可变区序列来赋予结合特异性的片段。全长重链包括可变区结构域VH和3个恒定区结构域CH1、CH2和CH3。VH结构域在多肽的氨基末端，并且CH结构域在羧基末端，CH3最靠近多肽的羧基末端。重链可具有任何同种型，包括IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型)、IgA(包括IgA1和IgA2亚型)、IgM和IgE。如本专利技术中所使用的，术语“Fab片段”由一条轻链和CH1以及一条重链的可变区组成。Fab分子的重链不能与另一条重链分子形成二硫键。如本专利技术中所使用的，术语“Fc”区含有两个包含抗体的CH1和CH2结构域的重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键以及通过CH3结构域的疏水相互作用保持在一起。如本专利技术中所使用的，术语“Fab’片段”含有一条轻链和一条重链的部分(其含有VH结构域和CH1结构域以及还有CH1与CH2结构域之间的区域的部分)，以便可在两个Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)2分子。如本专利技术中所使用的，术语“F(ab’)2片段”含有两条轻链和两条含有CH1与CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，以便在两条重链之间形成链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗PD1的抗体或其抗原结合片段，其特征在于包含选自以下各项组成的组的重链CDR1-3和轻链CDR1-3：/n(1)HCDR1：由SEQ ID NO：8的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：9的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：10的序列表示；/nLCDR1：由SEQ ID NO：20的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：21的序列表示；LCDR3：由SEQID NO：22的序列表示；/n(2)HCDR1：由SEQ ID NO：12的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：13的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：14的序列表示；/nLCDRl：由SEQ ID NO：24的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：25的序列表示；LCDR3：由SEQID NO：26的序列表示；/n(3)HCDR1：由SEQ ID NO：16的序列表示；HCDR2：由SEQ ID NO：17的序列表示；HCDR3：由SEQ ID NO：18的序列表示；/nLCDR1：由SEQ ID NO：28的序列表示；LCDR2：由SEQ ID NO：29的序列表示；LCDR3：由SEQID NO：30的序列表示。/n...

【技术特征摘要】
20191220 CN 20191134219381.抗PD1的抗体或其抗原结合片段，其特征在于包含选自以下各项组成的组的重链CDR1-3和轻链CDR1-3：
(1)HCDR1：由SEQIDNO：8的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：9的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：10的序列表示；
LCDR1：由SEQIDNO：20的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：21的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：22的序列表示；
(2)HCDR1：由SEQIDNO：12的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：13的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：14的序列表示；
LCDRl：由SEQIDNO：24的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：25的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：26的序列表示；
(3)HCDR1：由SEQIDNO：16的序列表示；HCDR2：由SEQIDNO：17的序列表示；HCDR3：由SEQIDNO：18的序列表示；
LCDR1：由SEQIDNO：28的序列表示；LCDR2：由SEQIDNO：29的序列表示；LCDR3：由SEQIDNO：30的序列表示。


2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包括：
(1)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQIDNO：7所示的氨基酸序列，和
轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQIDNO：19所示的氨基酸序列；
(2)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：
SEQIDNO：11所示的氨基酸序列，和
轻链可变区，其包含下述序列或由下述...

【专利技术属性】
技术研发人员：路力生，霍永庭，符俊，李凡，龚春喜，潘志福，
申请(专利权)人：广东菲鹏制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44